藥學(xué)院畢業(yè)答辯

研究背景實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)展望致謝內(nèi)容第1頁/共21頁第一頁，共21頁。研究背景2每年新發(fā)頭頸部腫瘤患者60萬例頭頸部腫瘤的發(fā)生率在惡性腫瘤中位于第7位我國的頭頸部惡性腫瘤的發(fā)生率高達(dá)3.268%首次醫(yī)療接觸時(shí)大于60%的患者處于晚期綜合治療5年的生存率僅為40%-50%手術(shù)治療放射治療化學(xué)治療生物免疫治療生物靶向治療第2頁/共21頁第二頁，共21頁。研究目的及意義3發(fā)病率逐步上升化療、放療療效不理想放療和藥物聯(lián)合進(jìn)行提高藥物敏感性療效提升化療效果不佳血腦屏障第3頁/共21頁第三頁，共21頁。血腦屏障4血腦屏障上重要的的蛋白質(zhì)分子：緊密與粘附連接蛋白胞吞轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白基底膜蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

血腦屏障是腦內(nèi)的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞彼此緊密相連，同時(shí)與周圍的周細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞相互作用形成的屏障系統(tǒng)。P-gpMrp2Bcrp第4頁/共21頁第四頁，共21頁。研究背景實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)展望致謝內(nèi)容第5頁/共21頁第五頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)材料61、實(shí)驗(yàn)對(duì)象

成熟的正常雄性Wister大鼠，體質(zhì)量210-280g，平均250g。2、實(shí)驗(yàn)儀器

XXX提供3、實(shí)驗(yàn)試劑

XXX提供第6頁/共21頁第六頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)方法7動(dòng)物分組：將30只大鼠隨機(jī)分為6組，每組5只大鼠。甲、乙、丙為實(shí)驗(yàn)組，A、B、C組為對(duì)照組，。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放療：將分好組的大鼠，做好標(biāo)記，喂養(yǎng)一段時(shí)間后，進(jìn)行放療實(shí)驗(yàn)。

將按體重給予實(shí)驗(yàn)組和正常組大鼠一定劑量的水合氯醛麻醉后（給予水合氯醛方法為腹腔注射），將實(shí)驗(yàn)組大鼠固定在預(yù)先制作好的板子上，將其頭頸部放在放療儀的放療窗下，給予2Gy的劑量的照射，源皮距75cm，照射野約2.5cm×2.5cm,上界位于唇部,下界位于頸部，左右露空，垂直照射，2Gy/次，5次/周。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材：雄性成年大鼠在照射后16小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別取大腦、小腦各一份，石蠟包埋，制備石蠟切片。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠放療視野第7頁/共21頁第七頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)方法8WesternBlot（WB）實(shí)驗(yàn)蛋白提取：稱取凍在超低溫冰箱中的腦組織，用離心管稱取0.4g，加入事先配好的RIPA裂解液400uL后將其用破碎儀破碎后，勻漿后反復(fù)凍融三次（在液氮中凍，水中融化），用離心機(jī)將上述凍融的溶液離心后（12000r/min，10min），取上清液80uL加入小離心管中，加入20uL的蛋白上樣緩沖液，用封口膜封口，在100℃熱水中變性5min，后將其凍存在—20℃冰箱中。將上述提取的蛋白分別做WB實(shí)驗(yàn)，分別做p-gp（P-糖蛋白）、Bcrp（乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白）、mrp2（多藥耐藥相關(guān)蛋白2）。SDS電泳一、配膠8%分離膠（9.2ml蒸餾水、5.3ml30％Acrylamide、5.0ml1.5M10％SDSTris-HCL（pH8.8）、0.2ml10％SDS、0.2ml10%過硫酸銨、0.012mlTDMED）濃縮膠（6.8ml蒸餾水、1.7ml30％Acrylamide、1.25ml1.0MTris-HCL（pH6.8）、0.1ml10％SDS、0.1ml10%過硫酸銨、0.01mlTEMED）二、電泳樣品準(zhǔn)備：將蛋白樣品從-80℃取出，在-4℃下解凍，渦旋離心，排好上樣順序。上樣：第一孔上3μL的maker,其余孔上所需的蛋白樣品8μL。電泳條件：80V恒壓跑至分離膠，約為0.5h,然后用120V跑至結(jié)束約為2h。第8頁/共21頁第八頁，共21頁。9三、濕法轉(zhuǎn)膜1.凝膠處理：取出電泳完的凝膠，切去濃縮膠及溴酚藍(lán)指示帶的下沿分離膠。2.鋪膜：按轉(zhuǎn)印夾(黑)-海綿

-三層濾紙-凝膠-PVDF膜-三層濾紙-海綿-轉(zhuǎn)印夾的順序鋪好。其中濾紙、PVDF膜均為4.5cm*8cm。3.濕轉(zhuǎn)條件：50V恒壓下濕轉(zhuǎn)3h10min。四、膜的封閉TBST溶液清洗3次，每次10min，1.5％的脫脂牛奶中，室溫?fù)u動(dòng)1h封閉。五、一抗的孵育TBST溶液清洗10min，用5％的脫脂奶粉將所需一抗稀釋到合適的比例或用合適比例涂膜，放置室溫2h或4℃過夜，完成后用TBST溶液清洗4次，每次10min。六、二抗孵育用5％的脫脂奶粉將所需二抗稀釋到合適的比例，在室溫將膜搖動(dòng)1h后，用TBST洗滌4次，每次10min。七、顯色配置發(fā)光液，先加白瓶溶液后加黑瓶溶液，將發(fā)光液涂在吸干水分的PVDF膜上，曝光。實(shí)驗(yàn)方法WesternBlot（WB）實(shí)驗(yàn)第9頁/共21頁第九頁，共21頁。研究背景實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)展望致謝內(nèi)容第10頁/共21頁第十頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果11一、放療后XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第11頁/共21頁第十一頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果12二、血腦屏障上的P-gp的表達(dá)結(jié)論：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第12頁/共21頁第十二頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果13三、血腦屏障上的Bcrp的表達(dá)結(jié)論：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第13頁/共21頁第十三頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)果14四、血腦屏障上的Mrp2的表達(dá)結(jié)論：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第14頁/共21頁第十四頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)結(jié)論15綜上所述，結(jié)論：XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第15頁/共21頁第十五頁，共21頁。研究背景實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)展望致謝內(nèi)容第16頁/共21頁第十六頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)討論171、XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX2、XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第17頁/共21頁第十七頁，共21頁。研究背景實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)展望致謝內(nèi)容第18頁/共21頁第十八頁，共21頁。實(shí)驗(yàn)展望19第19頁/共21頁第十九頁，共21頁。20致

謝XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX第20頁/共21頁第二十頁，共21頁。內(nèi)容總結(jié)研究背景。血腦屏障是腦內(nèi)的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞彼此緊密相連，同時(shí)與周圍的周細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞相互