臨床檢驗基礎(chǔ)課件-尿液化學檢驗

尿液化學檢驗2常用尿液化學檢驗

酸堿度蛋白質(zhì)葡萄糖酮體亞硝酸鹽隱血白細胞膽紅素尿膽原和尿膽素維生素C微量清蛋白本周蛋白肌紅蛋白α1、β2-微球蛋白纖維蛋白降解產(chǎn)物尿含鐵血紅素尿NAG酶尿淀粉酶人絨毛膜促性腺激素（HCG）乳糜尿測定其他尿液化學其他檢驗

3常用尿液化學檢驗

酸堿度蛋白質(zhì)葡萄糖酮體膽紅素尿膽原和尿膽素隱血亞硝酸鹽白細胞維生素C4一、尿液酸堿度（PH）

—反映腎臟調(diào)節(jié)體液酸堿平衡的能力尿液PH值主要由腎小管泌H+、銨的形成、HCO3-的重吸收、酸性和堿性磷酸鹽相對含量決定?！緟⒖贾怠砍磕?.5-6.5隨機尿4.5-8.0存放時間過長因細菌分解尿素可使PH偏高56尿液酸堿度（PH）檢測方法指示劑法滴定法干化學試帶法pH計法采用甲基紅（pH4.6～6.2）與溴麝香草酚藍（pH6.0～7.6）適量配合制成pH試紙墊，是目前最廣泛應用的篩查方法。以儀器自動化檢測來反映尿pH5～9的變異范圍，基本滿足臨床需要。酸堿指示劑原理如溴麝香草酚藍溶液。酸堿中和反應原理。7尿液酸堿度（PH）檢測方法采用甲基紅（pH4.6～6.2）與溴麝香草酚藍（pH6.0～7.6）適量配合制成pH試紙墊，是目前最廣泛應用的篩查方法。以儀器自動化檢測來反映尿pH5～9的變異范圍，基本滿足臨床需要。89（一）生理變化1.飲食種類的影響蛋白質(zhì)↑，尿PH↓

蔬菜水果↑,尿PH↑2.堿潮進食后尿PH↑3.其他

如運動、饑餓等生理活動時體內(nèi)酸性代謝產(chǎn)物增多可使尿PH↓；尿中有膿、血或細菌污染等使尿液堿化。藥物的影響?！九R床意義】10（二）病理變化1．尿pH↓：酸中毒、慢性腎小球腎炎、痛風、糖尿病、低血鉀性堿中毒等排酸增加；呼吸性酸中毒。2．尿pH↑：堿中毒、嚴重嘔吐、尿路感染、腎小管性酸中毒。

（三）指導臨床用藥

⑴根據(jù)尿液pH變化指導臨床用藥，預防腎結(jié)石的形成和復發(fā)。⑵酸性尿也可預防細菌的生長，減少泌尿系統(tǒng)的感染。11（四）做尿干化學分析的質(zhì)控

PH對尿蛋白和比重的影響不同PH值尿液，尿蛋白結(jié)果

PH

3.0

5.0

7.0

8.0

9.0

白蛋白

70

100

100

100

200

注：雙縮脲法定值100mg/dL不同PH值尿液,尿液比重變化

PH

5.0

6.0

6.5

7.0

8.0

9.0

比重

1.015

1.015

1.015

1.011

1.010

1.00912二、尿液蛋白質(zhì)檢查正常人尿液濃縮后再經(jīng)免疫電泳，可按蛋白質(zhì)的相對分子量大小分3組：①高相對分子量蛋白：分子量＞9萬，含量極微，包括T-H糖蛋白、分泌型IgA等；②中相對分子量蛋白：分子量4-9萬，以白蛋白為主，占尿蛋白總量的1/2-2/3；③低相對分子量蛋白：分子量＜4萬，絕大多數(shù)在腎小管重吸收，故尿中含量極少，如免疫球蛋白FC片段、游離輕鏈、微球蛋白等。13蛋白尿形成1415

蛋白尿（proteinuria）

【定義】

當尿蛋白排出量＞150mg/24h或尿中蛋白濃度＞100mg/L時，常規(guī)化學定性試驗呈陽性，稱為蛋白尿。16一、生理性蛋白尿指在人體機能正常情況下出現(xiàn)的短暫性蛋白尿，一般不具有病理意義，可分為1、功能性蛋白尿2、體位性蛋白尿3、其他（攝入性、偶然性、老年性、妊娠性）171、功能性蛋白尿指機體在劇烈運動、發(fā)熱、精神緊張等造成腎血管痙攣或充血而使腎小球毛細血管壁的通透性增加所致的暫時性、輕度的蛋白尿。定性一般不超過（+）多見于青少年，常為一過性，蛋白尿隨誘發(fā)因素的消失而消失。182、體位性蛋白尿——又稱直立性蛋白尿可能與直立時前突的脊柱壓迫腎靜脈；或直立過久時腎臟下移，腎靜脈扭曲造成腎臟瘀血，淋巴、血流受阻有關(guān)。臥位時尿蛋白陰性，起床活動或站立過久后可出現(xiàn)陽性，而平臥后又轉(zhuǎn)成陰性。常見于青少年，可隨年齡增長而消失。定性一般++～+++。特殊體位尿——清晨起床后（不可有任何活動）立即留第一次尿液，然后站立15min（雙腳并攏，足跟離墻15cm，枕部和雙肩靠墻）,再立位30-60min后留第二次尿液193、假性蛋白尿(falseproteinuria)混有血、膿、粘液等，不伴隨腎臟本身的損害，常見于泌尿道炎癥、出血及尿中混入生殖系統(tǒng)分泌物等，又稱偶然性蛋白尿。20二、病理性蛋白尿1、腎小球性蛋白尿（glomerular

proteinuria）炎癥、毒素等損害使腎小球毛細血管壁通透性增加或電荷屏障作用受損，濾出較多的血漿蛋白，超過了腎小管重吸收能力形成蛋白尿。尿蛋白定性：+++~++++什么是

？選擇性蛋白尿非選擇性蛋白尿根據(jù)濾過膜損傷的程度和蛋白尿的組分分為2種：21222、腎小管性蛋白尿(Tubularproteinuria)

近曲小管損傷，重吸收功能降低，產(chǎn)生的蛋白尿。尿蛋白組分以小分子量蛋白（β2-MG、溶菌酶）為主。尿蛋白定性“+～++”臨床意義①間質(zhì)性腎炎

②中毒性腎間質(zhì)損害：重金屬有機溶劑抗生素

③器官移植排斥反應233、混合性蛋白尿(mixedproteinuria)臨床意義腎臟疾病同時累及腎小球和腎小管所產(chǎn)生的蛋白尿中分子量的清蛋白及低分子量的β2-M同時增多為主①腎小球腎炎晚期②腎盂腎炎后期③全身性疾病侵犯腎小球和腎小管4、溢出性蛋白尿(overflow

proteinuria)臨床意義①多發(fā)性骨髓瘤、輕鏈病、原發(fā)性巨球蛋白血癥②急性血管內(nèi)溶血③急性肌肉損傷血循環(huán)中出現(xiàn)本周蛋白、游離血紅蛋白、肌紅蛋白等尿蛋白定性：+~++，一般不伴有腎臟損傷245、組織性蛋白尿(histic

proteinuria)來源于腎小管代謝、組織破壞、炎癥或藥物刺激泌尿系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)進入尿液形成成分以T-H蛋白為主，常見于尿路感染尿蛋白定性：±~+25（二）尿蛋白測定方法：尿蛋白定性試驗

——過篩試驗

⒈加熱乙酸法

⒉磺基水楊酸法

⒊干化學試帶法尿蛋白定量試驗

⒈沉淀法

⒉比濁法

⒊比色法

⒋染料結(jié)合法

⒌免疫測定法

⒍尿蛋白電泳法26尿蛋白定性試驗

1.加熱乙酸法傳統(tǒng)經(jīng)典方法，蛋白定性的確證實驗【原理】

加熱煮沸使蛋白變性凝固，加酸使尿pH接近蛋白質(zhì)等電點（pH4.7），在含有適量無機鹽狀況下，蛋白質(zhì)更易于變性下沉，同時可消除因加熱引起的某些磷酸鹽和碳酸鹽析出造成的渾濁干擾?！举|(zhì)量控制】1.尿液標本必須新鮮?；煊猩诚到y(tǒng)分泌物時可致假陽性。2.如加酸過少、過多，致遠離蛋白質(zhì)等電點，可使陽性程度減弱。因此實驗前需調(diào)整尿液pH至5~6。3.如尿中鹽類離子濃度過低，可致假陰性，限鹽或無鹽飲食的患者可加飽和氯化鈉溶液1~2滴再檢查。27尿蛋白定性試驗

2.磺基水楊酸法(SSA)

過篩實驗，干化學法檢測尿蛋白的參考方法【原理】在略低于蛋白質(zhì)等電點的酸性環(huán)境中，尿蛋白氨基帶正電荷，與帶負電荷的磺基水楊酸根相結(jié)合，形成不溶性蛋白鹽沉淀，沉淀生成的程度可反映蛋白質(zhì)含量?！举|(zhì)量控制】1.尿液標本必須新鮮?；煊猩诚到y(tǒng)分泌物時可致假陽性。2.應用青霉素鉀鹽、慶大霉素、磺胺、PAS及含碘造影劑等，或高濃度尿酸、草酸鹽、粘蛋白等作用下可呈假陽性反應，但加熱煮沸后消失。3.如PH>9或<3可致假陰性，需調(diào)整尿液pH至5~6。28【結(jié)果判斷】陰性（－）：不顯混濁，尿液外觀仍清晰透明?？梢桑ā溃狠p微混濁，隱約可見，含蛋白量約為0.05-0.20g/L。陽性（＋）：明顯白色混濁，但無顆粒出現(xiàn)，含蛋白量約為0.30g/L。（2＋）：稀薄乳樣混濁，出現(xiàn)顆粒，含蛋白量約為1.0g/L。（3＋）：乳濁，有絮片狀沉淀，含蛋白量約為3.0g/L。（4＋）：絮狀混濁，有大凝塊下沉，含蛋白量≥5.0g/L。29尿蛋白定性試驗

3.干化學試帶法健康普查【原理】利用pH指示劑的蛋白質(zhì)誤差（proteinerror）原理——在一定條件下（pH3.2），指示劑陰離子與蛋白質(zhì)結(jié)合生成復合物，引起指示劑的進一步電離，超過尿液的緩沖能力而發(fā)生顏色變化。顏色的變化與蛋白質(zhì)含量成正比?！举|(zhì)量控制】1.尿液標本必須新鮮，變質(zhì)的尿液會影響尿pH；大劑量青霉素可呈假陰性；大劑量洗必泰可呈假陽性。2.反應時間和標本量嚴格按照試帶法的操作說明來進行，并強調(diào)使用標準化的試帶。3.對清蛋白靈敏，對球蛋白的靈敏度僅為清蛋白的1/100-1/50，與血紅蛋白、肌紅蛋白、本周蛋白基本不反應。30不同PH值尿液，尿蛋白結(jié)果

PH

3.0

5.0

7.0

8.0

9.0

白蛋白

70

100

100

100

200

注：雙縮脲法定值100mg/dL尿液過酸（PH<4）或過堿（PH>8），超過試紙緩沖能力，可出現(xiàn)假陰性或假陽性31青霉素對尿蛋白干化學法的干擾32尿液蛋白質(zhì)定性檢驗的方法學評價方法評價加熱乙酸法尿液蛋白質(zhì)檢驗的經(jīng)典方法。特異性高、干擾因素少，靈敏度較低為0.15g/L。能使所有蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀反應，雖操作繁瑣，但結(jié)果準確。常作為確證試驗磺基水楊酸法操作簡便、快速。與清蛋白、球蛋白、本周蛋白均可發(fā)生反應。靈敏度高，為0.05-0.10g/L，因而有一定的假陽性。作為干化學法檢測尿蛋白的參考方法，手工法尿蛋白定性試驗的過篩試驗干化學法本法既可肉眼觀察，又可用于尿液自動分析儀。對清蛋白靈敏，對球蛋白的靈敏度僅為清蛋白的1/100-1/50，與血紅蛋白、肌紅蛋白、本周蛋白基本不反應。本法快速、簡便、易于標準化，適用于健康普查，尤其是腎臟疾病的篩檢，但不適用于其療效觀察和判斷預后。33341.比色法（雙縮脲法）鎢酸可沉淀尿液中的蛋白質(zhì)，后者復溶于雙縮脲試劑中，其堿性的Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵形成紫色的復合物，呈色的深淺與尿蛋白的含量成正比。雙縮脲法是測定尿蛋白總量的常規(guī)參考方法。顯色穩(wěn)定、重復性好，對白、球蛋白的反應靈敏度較一致（100~150mg/l），但靈敏度低。尿蛋白定量試驗35尿蛋白定量試驗2.沉淀法利用蛋白質(zhì)與生物堿試劑結(jié)合，在酸性條件下形成沉淀物，觀察沉淀物的量，以估計蛋白質(zhì)的含量。費時、準確性差，已淘汰。3.比濁法（磺基水楊酸-硫酸鈉雙濁法）：雖操作簡便，但線性范圍窄，受溫度、pH、時間、混勻方式等多種因素影響，故重復性差?；腔畻钏徇€可與藥物（磺胺、青霉素、有機碘等）及多肽類物質(zhì)結(jié)合導致假陽性，故目前已少用。364.染料結(jié)合法（1）麗春紅S法:蛋白質(zhì)和麗春紅S結(jié)合后，同時被三氯乙酸沉淀，在堿性溶液中沉淀物溶解呈紫色，呈色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。（2）考馬斯亮藍法

5.免疫測定法

6.尿蛋白電泳法尿蛋白定量試驗37尿液蛋白質(zhì)定量檢驗的方法學評價方法評價沉淀法費時、準確性差，已淘汰比濁法操作簡便，對清蛋白、球蛋白有相同的靈敏度，但線性范圍窄，影響因素多（溫度、pH、時間、混勻方式等），因而精密度低比色法雙縮脲比色法為蛋白質(zhì)定量測定的經(jīng)典方法染料結(jié)合法考馬斯亮藍法和鄰苯三酚紅鉬酸絡合法靈敏度高、操作簡便快速、呈色穩(wěn)定、干擾因素少，但易污染。麗春紅S法需用三氯乙酸沉淀，操作繁瑣，離心沉淀不完全也影響結(jié)果免疫法及電泳法具有更高的靈敏度和特異性，臨床普遍采用的新技術(shù)381、生理性蛋白尿：

功能性、直立性、攝入性、偶然性、老年性、妊娠性蛋白尿2．病理性蛋白尿：可分為腎前性、腎性及腎后性蛋白尿【臨床意義】39【臨床意義】（1）腎前性蛋白尿：尿蛋白種類病因常見疾病本周蛋白漿細胞病多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、漿細胞白血病血紅蛋白血管內(nèi)溶血性疾病陣發(fā)性血紅蛋白尿肌紅蛋白大面積肌肉損傷擠壓綜合征、電灼傷、多發(fā)性肌炎、進行性肌肉萎縮溶菌酶淀粉酶酶類增高急性單核細胞白血病胰腺炎40（2）腎性蛋白尿：腎小球性蛋白尿腎小管性蛋白尿【臨床意義】41【臨床意義】

腎小球性蛋白尿常見疾病類型病因尿蛋白類型定性試驗定量試驗（g/d）選擇性蛋白尿腎病綜合征相對分子量4-9萬（清蛋白為主）+++～++++3.5～

10非選擇性蛋白尿原發(fā)性腎小球疾病急慢性腎炎膜性腎炎腎功能衰竭大中分子量蛋白質(zhì)同時存在（清蛋白、免疫清蛋白）+～++++0.5～3.0繼發(fā)性腎小球疾病糖尿病腎病狼瘡腎病妊娠中毒癥42【臨床意義】腎小管性蛋白尿腎小管間質(zhì)病變：如間質(zhì)性腎炎、腎盂腎炎、Fanconi

綜合征、腎小管性酸中毒重金屬中毒：汞、鎘、鉍、砷、鈾藥物中毒：抗生素類慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素中藥馬兜鈴、木通器官移植排斥反應43（3）腎后性蛋白尿：泌尿生殖系統(tǒng)炎癥：如膀胱炎、尿道炎、前列腺炎、精囊炎泌尿系結(jié)石、結(jié)核、腫瘤泌尿系鄰近器官疾病：如急性闌尾炎、慢性盆腔炎、宮頸炎、盆腔腫瘤【臨床意義】44動態(tài)觀察尿蛋白結(jié)果對上述疾病的診斷、病情觀察、判斷療效和及時了解是否出現(xiàn)藥物副作用等均有一定意義。4546尿蛋白圓盤電泳(SDS—PAGE)

【檢測原理】又稱SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳。聚丙烯酰胺凝膠柱中各種蛋白質(zhì)都向正極移動，按其分子量的大小順序彼此分離，分子量越大，泳動越慢；反之則越快。將病人尿蛋白定性試驗陽性的尿液進行圓盤電泳，并與已知分子量的標準蛋白質(zhì)一起電泳，對照比較以判斷蛋白尿組分的性質(zhì)與分子量范圍。47凝膠上主要的尿蛋白的電泳條帶區(qū)域分析起源于腎小管的各類蛋白(分子量<67kDa)起源于腎小球的各類蛋白(分子量>67kDa)白蛋白(分子量:67kDa)a1-微球蛋白

(MW:33kDa)游離輕鏈

(MW25kDa)轉(zhuǎn)鐵蛋白

(MW:80kDa)Cystatin

(MW:11kDda)b2-微球蛋白

(MW:12kDa)溶菌酶

(MW:15kDa)視黃醇結(jié)合蛋白(MW:21kDa)游離輕鏈的二聚體(MW50kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)結(jié)合珠蛋白加樣位置a2-巨球蛋白

(MW:900kDa)尿蛋白電泳4849>67kDa<67kDa腎小管損傷<67kDa>67kDa5051>67kDa<67kDa混合性損傷5253【臨床意義】判斷蛋白質(zhì)組分的性質(zhì)與相對分子質(zhì)量大小，從而了解尿蛋白的形成原因和病變部位。中分子和大分子的蛋白尿——白蛋白及白蛋白以上附近——腎小球損傷；如急性腎炎、腎病綜合征、慢性腎炎早期等；小分子量蛋白尿——白蛋白以下附近——腎小管及其間質(zhì)病變；如急性和慢性腎盂腎炎、腎小管酸中毒、慢性間質(zhì)性腎炎、重金屬中毒等；混合性蛋白尿——腎小管、腎小球和間質(zhì)病變；如慢性腎炎晚期、嚴重間質(zhì)性腎炎、急性腎功能衰竭、尿毒癥等?！咀⒁狻磕虻鞍锥ㄐ栽凇?”以上才需測定。54三、尿糖檢查（diabeticurine，glucosuria）【定義】血糖濃度超過腎糖閾8.88mmol/L時，尿中開始出現(xiàn)葡萄糖，尿糖定性試驗呈陽性的尿液稱為糖尿?！拘纬蓹C制】尿中是否出現(xiàn)葡萄糖取決于三個因素：①血糖濃度②腎血流量③腎糖閾（renalglucosethreshold）：當血糖濃度超過8.88mmol/L時，尿液中即開始出現(xiàn)葡萄糖，這時的血漿葡萄糖濃度水平稱為腎糖閾。55

糖尿的原因及分類56尿糖測定方法（一）尿糖定性檢驗干化學法班氏定性法薄層層析法（二）尿糖定量檢驗葡萄糖氧化酶法己糖激酶法【標本要求】1.尿液標本不宜久置，以免細菌繁殖分解尿液中葡萄糖使結(jié)果偏低。2.24小時尿糖定量時，應加甲苯防腐。3.檢測糖尿病患者的尿糖，要求空腹或餐后2小時留取標本送檢。57（一）尿糖定性檢驗1．干化學試帶法

【檢測原理】尿液葡萄糖在試帶中葡萄糖氧化酶的催化作用下，生成葡萄糖酸內(nèi)酯和過氧化氫。在過氧化物酶的催化下，過氧化氫使色原物氧化而呈色?！痉椒▽W評價】特異性強，靈敏度高，簡便快速，定性或半定量，可目測或用于尿自動分析儀。58592．班氏定性法【檢測原理】葡萄糖或其他還原性糖類的醛基在熱堿性溶液中，能將班氏試劑中藍色的CuSO4還原為Cu2O，出現(xiàn)黃色至磚紅色沉淀物?！痉椒▽W評價】敏感性較高，特異性差，凡尿中其它糖類（果糖、乳糖、戊糖等）及其它還原性物質(zhì)（肌酐、尿酸、VitC等）可呈假陽性。

【質(zhì)量控制】

①VitC、青霉素等還原性物質(zhì)可使本法產(chǎn)生假陽性，應停藥3天，或煮沸除去VitC。②大量銨鹽及蛋白質(zhì)（＞0.5g/L）可妨礙Cu2O沉淀，應預先加堿煮沸去氨后再檢驗或加熱