微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)8 酵母菌子囊孢子觀察

實(shí)驗(yàn)八

酵母菌子囊孢子的觀察目的要求學(xué)習(xí)并掌握酵母菌子囊孢子的觀察方法基本原理子囊孢子形成是子囊菌類真菌有性生殖方式。在酵母菌中,能否形成子囊孢子及其形態(tài)是酵母菌分類鑒定的重要依據(jù)之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定條件，所以對不同屬的酵母要選擇適合形成子囊孢子的培養(yǎng)基。麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基有利于釀酒酵母子囊孢子的形成。麥?zhǔn)希∕eclary）培養(yǎng)基的制備用來培養(yǎng)酵母菌，利于釀酒酵母子囊孢子的形成葡萄糖：1gKCl：1.8g酵母浸膏：2.5g醋酸鈉：8.2g瓊脂：20g水：1000mLpH：自然子囊孢子形成過程細(xì)胞（＋）細(xì)胞（－）管狀突起管狀突起接觸、融合質(zhì)配核配減數(shù)分裂4或8個子核結(jié)合原生質(zhì)形成孢子壁子囊孢子兩個鄰近的細(xì)胞各伸出一根管狀原生質(zhì)突起，然后相互接觸并融合形成一個通道，細(xì)胞質(zhì)結(jié)合(質(zhì)配)，兩個核在此通道內(nèi)結(jié)合(核配)，形成雙倍體細(xì)胞，之后進(jìn)行減數(shù)分裂，形成4個或8個子核，每一子核和其周圍的原生質(zhì)形成孢子。含有孢子的細(xì)胞稱為子囊，子囊內(nèi)的孢子稱為子囊孢子。

圖1、S.cerevisiae（釀酒酵母）的生活史

——引自周德慶《微生物學(xué)教程》營養(yǎng)體既可以單倍體，也可以二倍體形式存在

特點(diǎn)：①營養(yǎng)體一般以出芽繁殖

②營養(yǎng)體可以單倍體又可以二倍體形式存在

③特定條件下才可進(jìn)行有性生殖。

不同酵母菌生活史圖2、Schizosaccaromycesoctsporus（八孢裂殖酵母）的生活史

——引自周德慶《微生物學(xué)教程》營養(yǎng)體只以單倍體形式存在

特點(diǎn)：①以無性的裂殖方式繁殖②二倍體不能獨(dú)立生活，此階段很短。

不同酵母菌生活史圖3、Saccharomycodesludwiggi（路德類酵母）的生活史

——引自周德慶《微生物學(xué)教程》營養(yǎng)體只以二倍體形式存在

特點(diǎn)：①營養(yǎng)體為二倍體，且不斷進(jìn)行芽殖；②單倍體的子囊孢子在子囊內(nèi)發(fā)生接合；③單倍體階段以子囊形式存在，不能獨(dú)立生活。

不同酵母菌生活史酵母菌子囊孢子實(shí)驗(yàn)材料菌種：釀酒酵母培養(yǎng)基：豆芽汁瓊脂斜面麥?zhǔn)檄傊泵嫒芤夯蛟噭?%的孔雀綠水溶液0.5%的番紅水溶液95%的乙醇。儀器或其他用具：載玻片顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)方法菌種活化產(chǎn)孢培養(yǎng)制片染色脫色復(fù)染鏡檢菌種活化釀酒酵母菌種用接種環(huán)無菌挑取少許菌種25～28C培養(yǎng)24hr無菌操作接種在新鮮豆芽汁斜面新鮮豆芽汁斜面連續(xù)轉(zhuǎn)接種3次產(chǎn)孢培養(yǎng)活化酵母菌種用接種環(huán)無菌挑取少許菌種25～28C培養(yǎng)1周無菌接種在新鮮麥?zhǔn)檄傊泵嫔消準(zhǔn)檄傊泵娉Ｒ?guī)制片生理鹽水

1、滴生理鹽水

滴半滴生理鹽水在載玻片中央

挑取少量菌苔與生理鹽水混勻均勻涂布2、涂片或電吹風(fēng)吹干3、干燥室溫自然晾干固定、染色、脫色5%孔雀綠染液2、染色滴孔雀綠染液在菌膜上染色3min

95%酒精脫色30s,立即水洗95%酒精3、脫色1、固定通過火焰上方3次復(fù)染0.5%番紅水溶液1、滴番紅水溶液滴