黃酮的提取及抗氧化的測定

2.3、清除率測定：本實(shí)驗(yàn)中抗氧化活性以清除DPPH自由基能力大小表示。當(dāng)DPPH溶液中加入自由基清除劑時(shí)，溶液顏色變淺，517nm處的吸收光度變小。吸收度變小的程度與自由基被清除的程度呈線形關(guān)系，可用于檢測自由基的清除程度，從而評價(jià)天然產(chǎn)物中活性物質(zhì)的抗氧化能力。其能力用清除率來表示，按照下面公式計(jì)算清除率，清除率越大，抗氧化能力越強(qiáng)。根據(jù)以下公式計(jì)算樣品的清除率：清除率二〔1-(A-A)/Ac〕X100%ij(式中：A樣品與DPPH溶液的吸收度;A樣品與70%乙醇的吸收度;ijAcDPPH溶液與70%乙醇的吸收度)黃酮類化合物的提取及其抗氧化性測定實(shí)驗(yàn)原理黃酮類化合物是一種良好的活性氧自由基清除劑。DPPH是一種穩(wěn)定的自由基,其乙醇溶液呈紫色，在可見光區(qū)最大吸收峰為517nm。當(dāng)DPPH溶液中加入自由基清除劑時(shí)，溶液顏色變淺，517nm處的吸收光度變小。吸收度變小的程度與自由基被清除的程度呈線形關(guān)系，可用于檢測自由基的清除程度，從而評價(jià)天然產(chǎn)物中活性物質(zhì)的抗氧化能力。其能力用抑制率來表示，抑制率越大，抗氧化能力越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)儀器和主要試劑1、組織搗碎機(jī)，分光光度計(jì)，電子分析天平，離心機(jī)，水浴振蕩器2、0.1mg/mL蘆丁標(biāo)液;3、5%NaNO2;4、10%Al(NO3)3;5、1mol/LNaOH；無水乙醇；6、二苯代苦味肼基自由基(DPPH，濃度為2X104)；操作步驟1、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取O.lmg/mL蘆丁標(biāo)液O.O,2.0,4.0,6.0,8.0,lO.OmL于6個(gè)25mL比色管中，用30%的乙醇補(bǔ)至10mL，加入1mL5%NaNO2，搖勻，放置6min,加入1mL10%Al（NO3）3，放置6min后，再加入10mL1moL/LNaOH,搖勻顯色，定容，靜置15min,以零管為空白，在510nm處測定系列吸光度。用最小二乘法做線形回歸，求得蘆丁濃度（Y）與吸光度（A）的關(guān)系曲線。2、黃酮類化合物提取及含量測定稱取樣品粉末1-2g，置于三角燒瓶中，向每個(gè)燒瓶中按1：20加入70%的乙醇溶液，搖勻。將三角燒瓶置于50°C的恒溫水浴振蕩器中，振蕩提取45min；然后取出燒瓶，過濾提取液，同時(shí)提取液以4000r/min離心30min,離心后的清液定容至25ml,取2ml清液，稀釋至25ml后，再取5ml清液于25ml比色管中，用30%的乙醇補(bǔ)至10mL,加入1mL5%NaNO2,搖勻，放置6min,加入1mL10%Al（NO3）3，放置6min后，再加入10mL1moL/LNaOH,搖勻顯色，定容，靜置15min,以零號管為空白，在510nm處測定吸光度。3、抗氧化性測定配制不同黃酮濃度的樣品液。精確吸取樣品溶液2.0mL，加入DPPH溶液2.0mL，搖勻，放置30min,以溶劑（70%乙醇）為空白，分別測定517nm處的吸光度Ai。同時(shí)，測定樣品溶液2.0mL與乙醇2.0mL混合液517nm處的吸光度Ajo再測定DPPH溶液2.0mL與乙醇2.0mL混合液517nm處的吸收度Ac。平行測定3次，取平均值后根據(jù)以下公式（2）計(jì)算樣品的抑制率。五、計(jì)算黃酮含量（％）=（YX25X25X25/1X5X2X1000）X100%（1）式中：Y黃酮濃度（mg/ml）25樣液稀釋后的體積（ml）1原料質(zhì)量（g）5,2——吸取的樣液量（ml）1000——換算系數(shù)樣品中提取出的黃酮化合物黃酮得率（%）黃酮得率（%）=x100%2)樣品中的總黃酮含量3）抑制率=〔1（-Ai-Aj）/Ac〕100%3）式中：Ai——樣品液與DPPH溶液混合液的吸收度;Aj