島津LC-20AT液相色譜操作步驟

島津LC-20AT高效液相色譜操作步驟1、流動相的處理共有5個流動相儲液瓶。一般RP-HPLC中，A〔無機相〕、B〔有機相〕為分析流動相；C〔水〕、D〔甲醇〕用于柱子后處理清洗；50%甲醇-水用于清洗自動進樣針流動相體積VAB=100+總流速x比例系數(shù)x分析時間〔mL〕；Vc＞300mL；、VD-350mL；V50細『300mL〔根據(jù)有機相和無甲機醇相選用相應濾膜〕，清洗儲液瓶，不能在清洗過程中留下污跡，并超聲30min，超聲完成后禁止劇烈搖晃2、開機開啟插座電源一＞電腦開機翻開儀器電源〔LC—20AT最后翻開，等待數(shù)秒后“control”指示燈亮〕翻開軟件［Labsolution—＞儀器一＞LC—20A〕，假設連接正常那么軟件顯示LC就緒3、自動排氣將各流動相過濾頭緩慢放入流動相中在簡單設置界面設置總流速為0.2mL/min；在自動排氣界面設置自動排氣參數(shù)［A、B、C、D各流動相＞5min,自動進樣器＞25min］，不勾選“排氣結(jié)束后運行控制器”“下載〃一?“執(zhí)行自動排氣〃等待排氣結(jié)束4、樣品處理稀釋后的樣品〔濃度約1mg/mL,不宜過高〕用注射器經(jīng)過濾器注入樣品瓶樣品應＞2/3樣品瓶體積［1.5mL樣品瓶〕按序號依次將樣品瓶放入自動進樣器的樣品架上切記：將樣品架推到底！5、系統(tǒng)平衡及設置分析條件自動排氣完成后，設置柱溫、檢測波長等參數(shù)（建議柱溫高于環(huán)境10℃），用梯度洗脫初始流動相平衡柱子［流動相比例與梯度洗脫初始比例一致〕“下載〃--“激活/取消激活儀器〃，此時系統(tǒng)顯示：等待柱溫穩(wěn)定緩慢增加總流速至樣品分析所需流速，V=1ml/min〔每隔1分鐘增大0.2mL/min,注意每次增大都點擊“下載〃及'在時間程序界面設置梯度洗脫條件假設要保存方法文件：文件一＞方法文件另存等待基線平穩(wěn)〔留意泵壓力是否穩(wěn)定〕，待系統(tǒng)顯示：LC就緒，右擊，進行基線測試斜率〔一般＜3000即可〕開始測樣6.“單次分析開始〞或“批處理〞依次輸入樣品名〔樣品ID可有可無〕、樣品瓶、瓶架〔1〕、進樣體積等注意數(shù)據(jù)文件所在文件夾，輸入數(shù)據(jù)文件名一翻開確定“向?qū)Ж暋靶陆è?，樣品組號〔1〕，選擇“未知樣品〞，依次輸入文件名及其他注意批處理文件所在文件夾，勾選“數(shù)據(jù)文件名自動遞增〞、不勾選“自動創(chuàng)立文件名〞完成選中全部序列開始批處理:先用易溶解樣品的流動相清洗（一般用高比例有機相洗15min），10%甲醇洗30min，再用90%甲醇洗30min；長期不使用保存于純甲方法一：在簡單設置界面設置：流動相C-90%；流動相D-10%一^下載切換柱溫箱off30min后設置：流動相C-10%；流動相D-90%一下載方法二〔推薦〕：設置洗柱程序“下載〞“單次分析開始〃一?樣品瓶輸入“-1〃文件名“洗柱〃系統(tǒng)提示“禁用采集〃一?確定（翻開Labsolution 再解柝”?準曲線數(shù)據(jù)處理一＞翻開文件一＞“向?qū)Аü催x特征峰、外標法依次輸入最大級別數(shù)〔標曲的點數(shù)〕、單位、化合物名、濃度等一＞完成應用到方法一?方法另存為主工程一?批處理一?翻開批處理文件填寫表格：首行〔標準、初始化標準點〕，〔標準樣數(shù)與前面的最大級別數(shù)相對應，剩下的為未知〕、〔文件方法為先前保存的方法，向下填充〕、〔標準樣品級別號分別未知樣品0〕批處理再解析開始一?批處理文件另存主工程一?校準曲線〔可找到已做成的標曲〕8.2生成報告翻開要生成報告的數(shù)據(jù)文件視圖一?手動積分欄，處理數(shù)據(jù)文件生成報告右擊“屬性〞進行調(diào)整，預覽、打印8.3檢測限、定量限確實定、扣除背景〔略〕.實驗結(jié)束后，切換泵ON/OFF〃確認泵泵壓力降為零一關軟件一再關儀器.電腦關機一關閉插座電源。＞考前