超聲波在酶催化中的應(yīng)用

關(guān)于超聲波在酶催化中的應(yīng)用第1頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六主講內(nèi)容超聲波的定義及特性超聲波的生物學(xué)效應(yīng)（作用機制）超聲波技術(shù)應(yīng)用于酶催化的研究背景超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲波技術(shù)在酶催化中的研究及應(yīng)用前景展望第2頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波的定義及特性什么是超聲波（ultrasound）：超聲波是聲波大家族中的一員。聲波是物體機械振動狀態(tài)（或能量）的傳播形式。超聲波是指振動頻率大于20KHz以上的,其每秒的振動次數(shù)（頻率）甚高，超出了人耳聽覺的上限（20000Hz），人們將這種聽不見的聲波叫做超聲波。超聲和可聞聲本質(zhì)上是一致的，它們的共同點都是一種機械振動，通常以縱波的方式在彈性介質(zhì)內(nèi)傳播，是一種能量的傳播形式，其不同點是超聲頻率高，波長短，在一定距離內(nèi)沿直線傳播具有良好的束射性和方向性。第3頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波的定義及特性超聲波的特性：（1）超聲波可在氣體、液體、固體、固熔體等介質(zhì)中有效傳播。（2）超聲波可傳遞很強的能量。（3）超聲波會產(chǎn)生反射、干涉、疊加和共振現(xiàn)象。（4）超聲波在液體介質(zhì)中傳播時，可在界面上產(chǎn)生強烈的沖擊和空化現(xiàn)象。

第4頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波的生物學(xué)效應(yīng)（作用機制）作用機制主要包括以下三個：機械力學(xué)作用熱力學(xué)作用空化作用第5頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波的生物學(xué)效應(yīng)（作用機制）機械力學(xué)作用：超聲波在媒質(zhì)中傳播，意味著超聲波在其傳播空間內(nèi)使媒質(zhì)質(zhì)點進(jìn)入振動狀態(tài)。超聲波在生物介質(zhì)中疏密相間的傳播，引起組織細(xì)胞容積變化及細(xì)胞液，反應(yīng)介質(zhì)的流動，產(chǎn)生的沖擊波和微射流等能增加傳質(zhì)速度，提高分子間的碰撞幾率，促進(jìn)酶解反應(yīng)，從而加快組織、細(xì)胞代謝作用。第6頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波的生物學(xué)效應(yīng)（作用機制）熱力學(xué)作用：當(dāng)超聲波束通過機體組織介質(zhì)時，介質(zhì)中的摩擦力可對超聲引起的分子振動發(fā)生阻抗，部分超聲能被吸收并轉(zhuǎn)化為熱。合適強度的超聲波在機體組織內(nèi)傳播時，一部分能量被組織吸收由機械能轉(zhuǎn)變成熱能，由于不同組織細(xì)胞吸收熱量不同可產(chǎn)生局部高溫、高壓，形成胞內(nèi)物質(zhì)的微流、渦流，促進(jìn)物質(zhì)的擴散與傳輸，有利于化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)行，加速細(xì)胞新陳代謝等。強度低、作用時間久的超聲主要產(chǎn)生熱效應(yīng)。第7頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波的生物學(xué)效應(yīng)（作用機制）空化作用：這是超聲波通過暴露介質(zhì)中原先存在的氣體核或微氣泡而產(chǎn)生的作用效應(yīng)，包括:(1)穩(wěn)態(tài)空化或非崩潰性空化;(2)瞬態(tài)空化或崩潰性空化。適宜的超聲波在組織液或液體中傳播時可產(chǎn)生乳化作用或激活氣泡，使物質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)形態(tài)改變，增加細(xì)胞膜、細(xì)胞壁的通透性，利于胞內(nèi)、外物質(zhì)的流通；或使酶的活性中心更加暴露，促進(jìn)酶與底物的結(jié)合，利于酶促反應(yīng)的進(jìn)行。強度高、作用時間短的超聲主要產(chǎn)生空化效應(yīng)。第8頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波的生物學(xué)效應(yīng)（作用機制）

此外，高強度的超聲波的機械作用所產(chǎn)生的強大沖擊波、快速溶液流，可使細(xì)胞破碎；熱學(xué)作用與瞬間空化作用所產(chǎn)生的高溫與高壓，可殺滅細(xì)菌、抑制酶活性或使生物大分子分解、斷裂，形成自由基等。第9頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)應(yīng)用于酶催化的研究背景

上個世紀(jì)20年代，人們首次發(fā)現(xiàn)了超聲波可以加速化學(xué)反應(yīng)。隨后產(chǎn)生了研究在超聲波作用下物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的一門新興交叉學(xué)科一聲化學(xué)(Sonochemistry)。自聲化學(xué)誕生以來，化學(xué)工作者們對超聲場在化學(xué)各個領(lǐng)域中的研究工作從未間斷。尤其是近年來，隨著功率超聲設(shè)備的普及與應(yīng)用，使得聲化學(xué)的研究工作蓬勃開展，國際及國內(nèi)的研究論文驟然增多，學(xué)術(shù)交流非?；钴S。為促進(jìn)這一學(xué)科的發(fā)展，國際聲化學(xué)界于1994年創(chuàng)辦了《超聲化學(xué)》(UltrasonicsSonochemistry)雜志。

第10頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)應(yīng)用于酶催化的研究背景

眾所周知，對化學(xué)反應(yīng)過程當(dāng)有催化劑加入時，可以加速化學(xué)反應(yīng)，縮短反應(yīng)時間，降低反應(yīng)條件。但是即便如此，有些催化反應(yīng)過程所需的環(huán)境仍較為苛刻，如高溫、高壓、反應(yīng)時間長，產(chǎn)率較低。眾多實驗結(jié)果表明，將超聲波應(yīng)用于催化反應(yīng)過程，可進(jìn)一步提高其反應(yīng)速度、縮短反應(yīng)時間、提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)率、使反應(yīng)在溫和的條件下進(jìn)行。第11頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)應(yīng)用于酶催化的研究背景

早期研究發(fā)現(xiàn),較高強度的超聲波會導(dǎo)致酶失活。新西蘭白兔腦組織勻漿中的超氧化物歧化酶(SOD)經(jīng)超聲波處理后活性下降,過氧化脂質(zhì)大幅度升高,而K-NaATP酶及Ca-MgATP酶活性也大幅度下降?？莶輻U菌蛋白酶在50mmol/L、pH7.8的磷酸緩沖液中,以波長2～10μm、功率150W的超聲波處理2h,酶活性下降了50%第12頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)應(yīng)用于酶催化的研究背景

然而近年來的研究則表明,適當(dāng)?shù)某暡ㄌ幚聿坏粫姑甘Щ?反而可促進(jìn)酶的生物催化活性,并可在酶生產(chǎn)中提酶產(chǎn)量。用超聲波處理有機溶劑中堿性蛋白酶催化N-乙酰-苯丙氨酸乙酯的轉(zhuǎn)酯反應(yīng),發(fā)現(xiàn)超聲波可增強該酶的活性,其結(jié)果與超聲波的作用頻率和強度有關(guān)。用微超聲波處理酵母過氧化氫酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO),結(jié)果表明,在一定參數(shù)范圍內(nèi)CAT和PPO的活性都升高。對CAT來說,其最適當(dāng)?shù)某暡▍?shù)是13.5kHz、40W/cm2、處理10min;對PPO來說,其最適當(dāng)參數(shù)是13.5kHz、25W/cm2、處理10min。此外還有不少研究表明,超聲波對于固定化酶的影響是很大的。對固定化菊糖酶的研究表明,20kHz、20W超聲波可促進(jìn)該酶的催化作用,以蔗糖為底物時酶活性提高了60%;在以菊糖為底物的反應(yīng)中,超聲波使水解效率提高了70%。第13頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲波影響酶活性的機理超聲對酶的作用來源于機械傳質(zhì)作用、加熱作用和空化作用。酶的反應(yīng)速度主要取決于2個因素：傳質(zhì)效率和酶分子的構(gòu)象。超聲通過機械傳質(zhì)、加熱和空化3種作用影響著這2個因素。第14頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用Vulfson認(rèn)為超聲波對酶的影響主要取決于超聲波的波長(頻率)、反應(yīng)介質(zhì)中的水含量及介質(zhì)的疏水性。由于超聲波強大的輻射和熱能可以改變生物大分子(如DNA和蛋白質(zhì))的結(jié)構(gòu),往往會導(dǎo)致某些敏感的胞外酶活性的損失。而在低強度及適宜的頻率條件下,因其具有的空穴作用、磁致伸縮作用和機械振蕩作用,又表現(xiàn)出對溶液化學(xué)反應(yīng)、結(jié)晶成核的促進(jìn)功能及對酶催化的協(xié)同加速作用。超聲波在介質(zhì)中傳播時,加速了介質(zhì)中的質(zhì)量傳遞作用,這種微流效應(yīng)促進(jìn)底物迅速進(jìn)入酶的催化部位及產(chǎn)物進(jìn)入介質(zhì),表現(xiàn)出酶催化活性的提高第15頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用

超聲波產(chǎn)生的空化作用是酶活性提高的另一主要原因。空化作用產(chǎn)生的沖擊波改變了酶分子的構(gòu)象,使其折疊更合理,更易于與底物結(jié)合形成中間產(chǎn)物,從而影響酶促反應(yīng)的進(jìn)程,提高了酶催化效率。也有人認(rèn)為,超聲波是對酶活性部位的接觸殘基施加影響,使失去活性的酶復(fù)活或有活性的酶失活。第16頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲對酶活力的影響目前利用超聲技術(shù)對酶進(jìn)行處理主要有兩種方式：一種是超聲預(yù)處理，即首先在超聲介質(zhì)中對酶進(jìn)行超聲處理，酶干燥后再在反應(yīng)介質(zhì)中催化酶促反應(yīng)；另一種是直接對反應(yīng)介質(zhì)中的酶進(jìn)行超聲處理，超聲處理同酶促反應(yīng)同時進(jìn)行。大量的研究表明，不管采取何種方式，適宜的超聲可提高酶促反應(yīng)速度。第17頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用

目前普遍認(rèn)為，在較低強度的超聲作用下，超聲強度同酶活力呈正相關(guān)；隨著強度的增大，酶逐漸被激活，強度越高，酶的催化活力越高。若進(jìn)一步加大強度，酶催化活力反而降低，酶變性失活，強度越高，失活率越高第18頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用介質(zhì)性質(zhì)與超聲對酶的影響研究發(fā)現(xiàn)，介質(zhì)性質(zhì)不同時，超聲對酶活力的促進(jìn)效果不同。

Vulfson等認(rèn)為，超聲可提高枯草蛋白酶在丁醇、己醇、辛醇中的酯交換反應(yīng)活力。第19頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用第20頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用Vulfson指出經(jīng)超聲處理，在丁醇中酯交換反應(yīng)速度提高了50%，而在辛醇中提高了6—8倍。同時指出，在癸醇中，未經(jīng)超聲處理幾乎測不到酶活性，而經(jīng)超聲處理后酶活大幅度提高。結(jié)果表明，超聲對酶活性提高的幅度與有機溶劑的鏈長正相關(guān)。非極性介質(zhì)的極性越小，疏水性越強，超聲對酶活的促進(jìn)作用就越明顯。第21頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用水含量對超聲作用的影響邱樹毅等研究了非極性介質(zhì)中水含量對超聲作用的影響。他們認(rèn)為，在水飽和的有機溶劑中，水分子進(jìn)入酶分子周圍，補充了酶分子的必需水，因此水飽和非極性介質(zhì)中酶催化反應(yīng)的初速度比脫水非極性介質(zhì)中的初速度要高。他們比較了在脫水正辛烷和水飽和正辛烷中脂肪酶催化1-三甲基-1-丙醇與戊酸的酯交換反應(yīng)中超聲的促進(jìn)作用，結(jié)果卻表明非極性介質(zhì)水含量的影響甚小。他們對這一現(xiàn)象的解釋為超聲使酶反應(yīng)的初速度大大提高，從而使非極性介質(zhì)水含量對酶催化反應(yīng)初速度的影響可以忽略不計。第22頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用介質(zhì)性質(zhì)與酶在超聲作用下的穩(wěn)定性大量的實驗表明，與水溶液相比，酶在非極性介質(zhì)中對超聲作用有較大的抗性。例如枯草蛋白酶經(jīng)超聲處理2h后，水相中酶活損失50%，而戊醇中酶活幾乎不變.第23頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用

宗敏華老師等在研究固定化脂肪酶水解三乙酸甘油酯時，探討了反應(yīng)介質(zhì)對脂肪酶穩(wěn)定性的影響。較大功率下（140W），超聲對正己烷中脂肪酶催化三乙酸甘油酯水解活力的影響甚小：超聲時間少于20min時，幾乎未出現(xiàn)酶的失活現(xiàn)象；超聲處理時間達(dá)到40min時，酶活力損失僅為11.8%。而在水溶液中，超聲處理使酶迅速失活，10min時失活率就達(dá)到了58.4%，處理40min后失活率高達(dá)93.3%。而以四氫呋喃為介質(zhì)時，失活率介于水和正己烷之間。這表明介質(zhì)疏水性越強，抗超聲變性能力越強。其他條件相同時，在正己烷中，140W的超聲作用對酶活的影響較??；而在水中，即使超聲的功率只有20W，酶也表現(xiàn)出明顯失活。第24頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用

他們推測，可能是由于酶在疏水性強的非極性介質(zhì)中具有較大的剛性，不易發(fā)生構(gòu)象變化而失活的緣故。第25頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用非極性介質(zhì)的含水量和酶的穩(wěn)定性之間關(guān)系非極性介質(zhì)的含水量和酶的穩(wěn)定性之間也存在著一定的聯(lián)系。水含量對酶活力影響很大。用水含量分別為0%，1%，2%，5%和10%的四氫呋喃作為超聲介質(zhì)，脂肪酶活力隨水含量的增加而急劇下降。含水量為10%時，酶活力僅存4.8%。因此，在利用超聲提高酶反應(yīng)速度時需要嚴(yán)格控制非極性介質(zhì)的含水量第26頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲波對固定化酶活性的影響用超聲波處理時，固定化酶的適應(yīng)性強，酶失活少。有關(guān)超聲波激活固定化酶的研究已有報道。

1981年Ishimorietal發(fā)現(xiàn)，利用超聲處理固定化葡萄糖氧化酶時，活性表現(xiàn)出來，而當(dāng)停止超聲處理時，活性則消失。用20kHz聲場處理固定于瓊脂膠上的。a-胰凝乳蛋白酶(以酪蛋白作底物)，活性提高2倍。用7MHz超聲波輻照固定于多孔聚苯乙烯上的a-淀粉酶時，酶活力也有提高。用頻率0.88kHz、聲強0.05-1W/cm2的聲波對肌酸激酶、乳酸脫氫酶、己糖激酶、丙酮酸激酶所催化的反應(yīng)進(jìn)行多次，結(jié)果對反應(yīng)速率均沒有明顯直接影響。但將酶固定化以后，超聲波處理使固定化酶反應(yīng)速率明顯增加。第27頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用

種種研究結(jié)果表明，適宜的超聲波處理固定化酶，可以在一定程度上提高酶活性。但超聲波對酶活性的改善依不同的酶而有不同。某些酶可能對超聲波的作用較為敏感，在一定的超聲波作用下，就會改變酶活性而另一些酶可能就不太敏感，用超聲波處理時，其活力的改變就不會太大。第28頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲波作用于固定化酶的影響因素超聲波功率的影響許多研究表明超聲波的功率強度對酶活性有較重要的影響。適當(dāng)強度的超聲波可以使酶活力的表現(xiàn)達(dá)到最仕狀態(tài)。相反，不適當(dāng)強度的超聲波處理不但不會增強酶活力，甚至可以降低酶的活力當(dāng)然，超聲波對不同的酶有一不同的作用效果，因而不同的酶對超聲波功率的要求是不同的。第29頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲連續(xù)輻照時間對酶活的影響劉耘等研究表明，對有機相中Lipozyme進(jìn)行超聲輻照處理時(蔗糖為底物)，酶活力隨著連續(xù)超聲輻照時間的延長而大幅度提高。其他條件相同情況下，將120s/30s和30s/30s(均為輻射時間/間歇時間)兩種作用方式進(jìn)行比較表明，在120s/30s的形式下，相對酶活力高達(dá)247.7%。而在適宜的超聲功率下，總超聲時問對酶活力影響甚少第30頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲介質(zhì)的特性對固定化酶活性的影響一般酶都在水溶液中催化反應(yīng)，但很多酶還能在非水溶劑中催化反應(yīng)。研究結(jié)果揭示，超聲能量對處于不同溶劑中的酶分子的作用效果是有差別的。一般來說，酶在不同的溶劑系統(tǒng)中有不同的活力表現(xiàn)。超聲波對在不同溶劑系統(tǒng)中的酶分子的催化特性有不同的影響效果，這是很容易理解的。第31頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用

宗敏華等研究表明，Lipozyme在不同介質(zhì)中經(jīng)超聲輻照處理不同時間后，活性不同;他們發(fā)現(xiàn)，溶劑的疏水性越強，酶抗超聲輻射變性作用的能力越強。在正己烷中，處理對酶活影響甚小，處理時間小于20min，幾乎未出現(xiàn)酶的失活;處理40min后，活力損失僅11.8%。在水相中，超聲輻照處理使酶迅速失活，處理l0min后，酶的失活率為58.4%，處理40min后，酶失活率高達(dá)93.3%。在四氫峽喃中，酶對超聲輻射變性作用的抗性介于正己烷和水之間。劉耘等研究表明，超聲介質(zhì)中水的含量對Lipozyme活力影響很大。在脫水四氫呋喃中，超聲輻照60min，酶活力損失24.6%，到含水量10%時，酶活力僅存4.8%。第32頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用固定化酶顆粒大小和反應(yīng)系統(tǒng)的影響林影等研究超聲波對固定化菊糖酶作用的影響時，以純菊糖為底物，選擇不同直徑范圍的固定化酶顆粒反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)隨著固定化酶顆粒的增大，超聲波的促進(jìn)作用增大。他們發(fā)現(xiàn)靜止反應(yīng)的超聲波作用比振蕩反應(yīng)的作用效果更加顯著。第33頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用底物和載體顆粒大小對超聲作用效果的影響

P.Schmidt等和林影等都發(fā)現(xiàn)隨著底物相對分子質(zhì)量增大，超聲波對固定化酶促進(jìn)作用增大。

P.Schmidt等采用底物流動系統(tǒng)反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)底物流速越大，酶促反應(yīng)速度越小。他們還發(fā)現(xiàn)超聲波對酶的影響跟載體顆粒有關(guān)，但并不呈線性關(guān)系。第34頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用超聲波影響固定化酶活性的機理P.Schmidt等認(rèn)為超聲波引起固定化酶活力增強的可能機理是，活力在固體載體表面附近的總體積中的運輸過程中增加，并提出以下事實進(jìn)行支持:1.超聲效果隨著分子量增加而增大。小分子物質(zhì)比大分子更容易穿過固體基質(zhì)，因而受聲場影響較小。2.超聲效果隨流速增加而減小。隨著底物溶液流經(jīng)載體顆粒速度增加，每一顆粒周圍的靜止層尺寸變小，底物擴散加快，因而超聲效率降低。3.超聲效率大小與載體顆粒大小有關(guān)。但由于隨著顆粒直徑增加，擴散限制也增加，因而顆粒最大時超聲增加效應(yīng)不一定最大。4.超聲效應(yīng)增加是頻率平方的函數(shù)。第35頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用

高大維等認(rèn)為可能的機理是，在適當(dāng)?shù)某晥鰲l件下的底物和產(chǎn)物分子在超聲波的驅(qū)使下，以較高的頻率振動，固定化酶與底物和反應(yīng)物的接觸次數(shù)大大增加，同時產(chǎn)物釋放也加快，從而使得固定化糖化酶的表觀米氏常數(shù)減少，反應(yīng)速率增加，而在一定條件下超聲波對酶的微細(xì)結(jié)構(gòu)活性部位影響不大，表現(xiàn)為酶的最適作用pH和溫度不變。第36頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用林影等認(rèn)為，超聲波對酶催化反應(yīng)的促進(jìn)機理中，超聲波對促進(jìn)反應(yīng)物質(zhì)的擴散和傳輸起主導(dǎo)作用，它對改善固定化酶對大分子物質(zhì)傳輸阻礙有著很大的應(yīng)用前景。另外，也有人認(rèn)為超聲提高固定化酶酶活力的機理是超聲促進(jìn)底物透入載體或主要是聲流的作用。第37頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用可見，對于超聲波影響酶促反應(yīng)的機理，不同的作者有不同的理解和解釋。也許在不同的條件下有不同的作用效果，或者可以說超聲波對固定化酶活性的影響是各種機理影響的綜合效果。因此，要對其作用機理作出更加合理的解釋，還要進(jìn)行更加深入的研究。固定化酶己成功地工業(yè)化了，如何利用超聲波的促進(jìn)傳質(zhì)作用，克服固定化技術(shù)中存在的傳質(zhì)障礙，以提高酶固定化技術(shù)在工業(yè)上的應(yīng)用度，是亟待深入探討的問題。第38頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用一些應(yīng)用實例第39頁，共47頁，2023年，2月20日，星期六超聲波技術(shù)在酶催化中的應(yīng)用第40頁，共47頁，202