骨髓細胞微核實驗

關于骨髓細胞微核實驗第1頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日機理：1有絲分裂毒物的作用使個別染色體或帶著絲點的染色體環(huán)和斷片在細胞分裂后期被滯留在細胞質(zhì)中2斷片或無著絲點染色體在細胞分裂后期不能定向移動，從而遺留在細胞質(zhì)中結論：

微核試驗能檢測化學或其他物質(zhì)因素誘導產(chǎn)生的染色體完整性改變和染色體分離改變這兩種遺傳學終點實驗原理第2頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日無核細胞紅細胞有核細胞中微核難與正常核分葉及核突出物區(qū)別微核實驗第3頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日紅細胞的分化成熟過程第4頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日第5頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的形成第6頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日7環(huán)磷酰胺（CTX）最常用的烷化劑類抗腫瘤藥。在體外無抗腫瘤活性，進入體內(nèi)經(jīng)轉化、分解，生成酰胺氮芥對腫瘤細胞有細胞毒作用。副作用明顯，有惡心、食欲減退、脫發(fā)、白細胞減少、中毒性膀胱炎、肝功能損傷等。具有顯著的遺傳、生殖毒性：停經(jīng)或精子缺乏，妊娠初期時給予可致畸胎。用藥后24-30小時，骨髓中微核形成達峰。第7頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日8結果示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中一個微核示小鼠骨髓正常嗜多染紅細胞第8頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日9示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中兩個微核第9頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日10示小鼠骨髓嗜多染紅細胞中多個微核第10頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日Giemsa染色PCE胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，染色呈灰藍色；MCN多數(shù)為圓形，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍紫色NCE的核糖體已消失，被染成淡桔紅色。NCEPCE&MCN第11頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日實驗目的用化療藥（環(huán)磷酰胺）制備突變模型觀察小鼠骨髓嗜多染紅細胞（PCE）微核第12頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日【Animal】小鼠是微核試驗的常規(guī)動物，通常用7～12周齡，體重18～20g的小鼠。【Reagents】小牛血清Giemsa染液環(huán)磷酰胺實驗動物及試劑第13頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日實驗分組和染毒方法環(huán)磷酰胺40mg/kg

模型組等體積溶劑對照組染毒方法（30h兩次給藥法）：兩次給受試物間隔24h，第二次給藥后6h取材第14頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日處死：小鼠頸椎脫臼處死；取股骨：防止出血；取骨髓：小牛血清1滴推片：30度角；晾干：一定要干；固定：甲醇固定10min,需要晾干；染色：Gimesa染液染色（10~15min）沖洗：蒸餾水沖洗，晾干閱片:

觀察微核。

染毒后操作步驟第15頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日推片方法第16頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日觀察與計數(shù)：低倍鏡下選擇分布均勻，染色較好的區(qū)域油鏡下觀察計數(shù)多染紅細胞（PCE）呈灰藍色，正染紅細胞（NCE）呈橘黃色。典型的微核多為單個、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍紫色。計數(shù)1000個PCE中含微核的PCE數(shù)，并且計數(shù)200個細胞中PCE與NCE的比值。微核率（‰）=含微核PCE細胞數(shù)PCE細胞總數(shù)×1000實驗方法和步驟第17頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日實驗結果組別動物數(shù)受檢PCE總數(shù)含微核PCE數(shù)微核率陰性對照組模型組第18頁，共20頁，2023年，2月20日，星期日結果分析與評價本試驗中只計數(shù)PCE中微核，微核率以千分率表示.PCE/NCE為評價細胞毒性的指標：正常PCE/NCE比值約為l(正常范圍為0.6～1.2)；如PCE/NCE＜0.1，則表示PCE形成受到嚴重抑制；如P