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對流免疫電泳對流免疫電泳免疫學(xué)實驗專家講座第1頁一、基本原理在pH值8.6瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱負(fù)電荷，而且它分子又較大，所以泳動慢，受電滲作用影響也大，往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時，反而向負(fù)極倒退。而普通抗原蛋白質(zhì)常帶較強(qiáng)負(fù)電荷，分子又較小，所以泳動快，即使因為電滲作用泳動速度減慢，但仍能向正極泳動。如將抗原置陰極，抗體置陽極，電泳時，兩種成份相對泳動，一定時間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，并在百分比適當(dāng)?shù)胤叫纬扇庋劭梢姵恋砭€。這么因為電泳作用，不但幫助抗體定向移動，因而加速了反應(yīng)出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴(kuò)散時，抗原抗體向四面自由擴(kuò)散傾向，因而也提升了敏感性，本法比瓊脂擴(kuò)散法靈敏度要高10～16倍，而且反應(yīng)時間短，可用于各種蛋白定性和半定量測定。對流免疫電泳免疫學(xué)實驗專家講座第2頁

二、對流免疫電泳

即雙擴(kuò)+電泳技術(shù)

用途：同雙擴(kuò)

優(yōu)點：快、敏感性高

缺點：分辨力低對流免疫電泳免疫學(xué)實驗專家講座第3頁三、操作方法1．制瓊脂板以pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液配成1%～1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm。2．打孔瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成正確小孔數(shù)列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。3．加樣一對孔中，一孔加抗原，另一孔加抗體。4．電泳將抗原孔置于負(fù)極端。電流強(qiáng)度3mA/cm～6mA/cm，電泳時間30min～90min。對流免疫電泳免疫學(xué)實驗專家講座第4頁對流免疫電泳免疫學(xué)實驗專家講座第5頁四、結(jié)果觀察斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密白色沉淀線。如沉淀線不清楚，可把瓊脂板放在濕盒中37℃數(shù)小時或置電泳槽過夜再觀

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