No體外孵育的小白鼠肝臟切片對(duì)戊巴比妥鈉的代謝作用

No體外孵育的小白鼠肝臟切片對(duì)戊巴比妥鈉的代謝作用第1頁/共23頁【目的】

通過肝組織與戊巴比妥鈉體外孵育，以睡眠開始及維持時(shí)間為指標(biāo)，了解肝臟對(duì)戊巴比妥鈉的代謝作用【原理】

肝組織內(nèi)含有細(xì)胞色素P450,可致戊巴比妥鈉代謝失活，從而影響其催眠作用第2頁/共23頁【器材與藥品】

剪刀天平小鑷子10ml移液管培養(yǎng)皿注射器

10ml離心管/試管離心機(jī)試管架恒溫水浴箱

95%氧氣和5%二氧化碳混合氣體

0.4%戊巴比妥鈉溶液玻棒【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

小白鼠第3頁/共23頁

【肝損傷模型】

硫代乙酰胺（TAA）其原理是TAA入肝后延長肝細(xì)胞有絲分裂過程，并阻礙RNA從胞核到胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移，進(jìn)而影響依賴酶的代謝過程，最終形成肝細(xì)胞壞死.肝實(shí)質(zhì)的破壞引起間質(zhì)內(nèi)織締組織的生成增多，從而引起纖維組織在局部的沉積，其形成的動(dòng)物模型在血流動(dòng)力學(xué)、形態(tài)學(xué)及功能上的改變均與人肝硬化相似.

方法：每組取4只小白鼠，稱重，分別腹腔注射硫代乙酰胺0.15ml/10g，造肝損傷模型第4頁/共23頁【步驟與方法】1.取離心管及試管各5支，分別標(biāo)記為A、B、C、D、E2.取正常小鼠和肝損傷小鼠各兩只，頸椎脫臼處死，置方盤內(nèi)剖腹暴露肝臟，注意保持膽囊的完整，先去除膽囊，再取肝臟第5頁/共23頁【步驟與方法】3.用鑷子小心取出肝臟，置于生理鹽水中漂洗，并將膽囊摘除，濾紙吸干，放在天平上稱取1克肝組織（一只小鼠的肝臟）4.將稱好的肝組織放在離心管口，用小剪刀剪碎5.A、B、C、D、E各管中均準(zhǔn)確加入0.4%戊巴比妥鈉溶液5ml。同時(shí)置于37℃恒溫水浴中孵育，A、C管孵育30min，B、D、E管孵育1h，培養(yǎng)期間每10min通入氣體一次第6頁/共23頁【步驟與方法】6.將上述孵育液3000r/min離心5min，然后將上清液移至相應(yīng)的A、B、C、D、E試管內(nèi)7.取小白鼠10只，分為A、B、C、D、E五組，每組2只，稱重后均按0.1ml/10g分別腹腔注射相應(yīng)A、B、C、D、E管內(nèi)上清液第7頁/共23頁【流程圖】ABCDE正常肝

1g正常肝

1g受損肝

1g受損肝

1g0.4%戊巴比妥鈉溶液5ml37℃孵育通氣30mim60mim30mim60mim60mim3000r/mim5mim取上清液2只2只2只2只2只記錄給藥時(shí)間、翻正反射消失及恢復(fù)時(shí)間腹腔注射第8頁/共23頁【注意事項(xiàng)】肝分離操作應(yīng)迅速，以免延誤時(shí)間影響藥酶活性肝切片孵育過程中，應(yīng)經(jīng)常用玻璃棒攪動(dòng)離心管中的內(nèi)容物，以使肝切片與藥物充分發(fā)揮作用培養(yǎng)液內(nèi)通氣時(shí)氣泡需小而均勻，勿超過培養(yǎng)液的液面第9頁/共23頁【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】組別處理給藥時(shí)間翻正反射消失時(shí)間翻正反射恢復(fù)時(shí)間睡眠潛伏期/min睡眠持續(xù)時(shí)間/minABCDE正常肝孵育30min正常肝孵育60min受損肝孵育30min受損肝孵育60min未處理第10頁/共23頁【預(yù)測(cè)結(jié)果】睡眠潛伏時(shí)間

E<C<D<A<B睡眠持續(xù)時(shí)間

E>C>D>A>B第11頁/共23頁【討論】

戊巴比妥鈉經(jīng)肝、受損肝組織孵育后，對(duì)小鼠的睡眠有什么影響？為什么？第12頁/共23頁【結(jié)論】1.戊巴比妥鈉經(jīng)肝臟代謝2.戊巴比妥鈉有鎮(zhèn)靜、催眠作用第13頁/共23頁藥物代謝藥物作為一種異物進(jìn)入體內(nèi)后，機(jī)體要?jiǎng)訂T各種機(jī)制使藥物發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)的改變，即藥物的轉(zhuǎn)化或稱生物轉(zhuǎn)化又稱藥物代謝，從體內(nèi)消除，代謝是藥物在體內(nèi)消除的重要途徑體內(nèi)各種組織均有不同程度的代謝藥物的能力，但肝臟是最主要的的藥物代謝器官體內(nèi)藥物代謝有一部分不經(jīng)酶促而自動(dòng)發(fā)生，但絕大多數(shù)藥物是通過特異性細(xì)胞酶催化的第14頁/共23頁巴比妥類藥物的抗驚厥作用第15頁/共23頁【目的和原理】了解大劑量中樞興奮藥尼可剎米的中毒表現(xiàn)－－驚厥觀察巴比妥類的抗驚厥作用第16頁/共23頁【實(shí)驗(yàn)步驟】取體重相近的小白鼠2只，分別編號(hào)、標(biāo)記兩只分別腹腔注射生理鹽水和0.5%戊巴比妥鈉溶液0.15ml/10g15min后，分別皮下注射5%尼可剎米溶液0.1ml/10g，蓋好籠蓋，觀察現(xiàn)象第17頁/共23頁【流程圖】1號(hào)2號(hào)0.15ml/10g生理鹽水i.p.0.15ml/10g0.5%戊巴比妥鈉i.p.15min后0.1ml/10g尼可剎米s.c.觀察現(xiàn)象第18頁/共23頁【結(jié)果】

注射生理鹽水的小鼠出現(xiàn)驚厥注射戊巴比妥鈉的小鼠沒有出現(xiàn)驚厥第19頁/共23頁

尼可剎米：對(duì)延腦呼吸中樞有直接興奮作用，可提高中樞對(duì)CO2的敏感性。還可通過刺激頸動(dòng)脈體和主動(dòng)脈體化學(xué)感受器而反射性的興奮呼吸中樞，使呼吸加深加快。本品在呼吸抑制時(shí)興奮作用尤為明顯。臨床用于中樞性呼吸抑制及循環(huán)衰竭、各類繼發(fā)的呼吸抑制

【討論】第20頁/共