植物生物技術(shù)導(dǎo)論復(fù)習(xí)思考題精編

《植物生物技術(shù)導(dǎo)論》復(fù)習(xí)思考題名詞解釋名詞解釋答案植物生物技術(shù)（廣義概念）提高和改良農(nóng)作物產(chǎn)量、品質(zhì)的所有技術(shù)。（狹義概念）利用植物器官、組織、細胞和通過分子水平的操作、促進植物繁殖、有用物質(zhì)生產(chǎn)和植物品種遺傳改良的技術(shù)。離體授粉植物的離體授粉也叫離體受精或試管受精，就是在人工控制條件下使離體的胚珠或子房完成授粉、受精形成種子的過程。植物的離體授粉技術(shù)一般包括“胚珠試管受精”、“離體子房授粉”和“雌蕊離體授粉”3個方面。T-DNA轉(zhuǎn)移-DNA區(qū)。長度大約在15?30kb,是根癌農(nóng)桿菌侵染植物細胞時從Ti質(zhì)粒上切割下來轉(zhuǎn)移并整合到植物基因組的一段DNA。植物細胞組織培養(yǎng)在離體條件下利用人工配制的培養(yǎng)基對植物器官、組織、細胞、原生質(zhì)體等進行培養(yǎng)，在適宜的培養(yǎng)條件下，長成完整植株的過程。同工酶是功能相同的酶的多重分子形態(tài)，它們是特異的基因產(chǎn)物。體細胞胚在愈傷組織表面或內(nèi)部形成類似于合子胚的結(jié)構(gòu)，稱其為體細胞胚，或不定胚，或胚狀體。

植物細胞全能性一個完整的植物細胞擁有形成一個完整植株所必需的全部遺傳信息。在適宜的條件下能夠形成完整植株的能力。細胞培養(yǎng)是指將植物單細胞或細胞團直接在培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方式。細胞懸浮培養(yǎng)是指將游離的單細胞或細胞團按照一定的細胞密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的方法。脫分化脫分化是在植物組織和細胞培養(yǎng)中，一個成熟細胞或分化細胞轉(zhuǎn)變成為分生狀態(tài)的過程，即形成愈傷組織的過程。愈傷組織在植物組織和細胞培養(yǎng)中，愈傷組織則指在人工培養(yǎng)基上，由外植體形成的一團無序生長、無特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細胞?；ǚ叟囵B(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,將從花藥中游離出來的花粉，單獨進行培養(yǎng),獲得完整植株。不定器官在愈傷組織的不同部位分別獨立形成不定根和不定芽。誘發(fā)融合原生質(zhì)體融合過程中，需要使用適當?shù)娜诤蟿┗驒C械方法，將不同的原生質(zhì)體聚集到一起，使其粘連，融合，形成異核體。人工種子指通過植物組織培養(yǎng)的方法獲得具有正常發(fā)育能力的材料，外面包被有特定物質(zhì)，在適宜條件下可以發(fā)芽成苗的植物幼體。

外植體在植物組織培養(yǎng)中，從活體植物上提取下來的，接種在培養(yǎng)基上培養(yǎng)的無菌細胞、組織、器官等統(tǒng)稱為外植體。低溫保存又稱最小生長法，是將外植體所再生的試管苗在低溫條件下，結(jié)合某些特定的培養(yǎng)基如增加蔗糖濃度、添加甘露醇、山梨醇、脫落酸（ABA）等生長延緩因子，輔以培養(yǎng)環(huán)境的調(diào)控，從而抑制或延緩生長，延長壽命，達到保存種質(zhì)的目的。報告基因能快速報告細胞是否被轉(zhuǎn)化的基因，大多是一些水解酶基因如：B-葡萄糖醛酸苷酶基因9枝）、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因（。@1）、8-半乳糖苷酶基因（必。2）、熒光素酶基因（1k）等；農(nóng)桿堿合成酶基因、綠色熒光蛋白基因（gep）等。體細胞雜交指將植物不同種、屬，甚至科間的離體細胞通過一定誘導(dǎo)技術(shù)使質(zhì)膜接觸而融合在一起隨后導(dǎo)致兩個細胞核物質(zhì)融合，通過離體培養(yǎng)，使其再生雜種植株的技術(shù)。又稱原生質(zhì)體融合。超低溫保存將植物的離體材料包括莖尖（芽）、分生組織、胚胎、花粉、愈傷組織、懸浮細胞、原生質(zhì)體等，經(jīng)過一定的方法處理后在超低溫（-196℃）條件下進行保存的方法。細胞懸浮培養(yǎng)是指將游離的單細胞或細胞團按照一定的細胞密度懸浮在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的方法。

基因槍法又名微粒轟擊法，通過高速飛行的金屬顆粒將包被其外的目的基因直接導(dǎo)入到受體細胞內(nèi)，從而實現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化的一種方法。二、填空題填空題答案植物組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的主要組分有 、 、 、 等。水、無機成分、有機成分、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)脫分化的細胞再分化出完整植株有兩種途徑： 或 。不定器官形成、器官形成植物組織培養(yǎng)中的發(fā)展簡史三階段是 、 、 。探索、 奠基、迅速發(fā)展植物細胞培養(yǎng)中，震蕩的主要作用有 、 、 等。使愈傷組織破碎成小細胞團或單細胞、使細胞團和單細胞均勻分布于培養(yǎng)基中、促進氣體交換培養(yǎng)細胞活力的測定方法主要有： 、 、等。四唑鹽還原法(TTC)、熒光素二乙酸法(FDA)、噻唑藍法(MTT法)

花粉（小抱子）培養(yǎng)的方法主要有： 、、 等。液體淺層培養(yǎng)、平板培養(yǎng)法、微室懸滴培養(yǎng)法植物細胞組織培養(yǎng)的基本設(shè)備有 、 、等。準備室、無菌操作室、培養(yǎng)室植物組織培養(yǎng)中，外植體的種類有 、 、 、 、 等。根、莖、葉、花、果實植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)主要有 、 、等。脫分化、再分化、試管苗的馴化影響植物組織培養(yǎng)的因素主要有 、、 、 等。光照、溫度、濕度、氣體植物基因克隆的方法有 、 、、 等?；瘜W(xué)法合成、從基因文庫中釣取、PCR擴增、圖位克隆方法愈傷組織形成經(jīng)歷三個階段: 、 和 。誘導(dǎo)、細胞分裂、細胞分化植物生物技術(shù)常用的滅菌方法有 、、 等。高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌或表面消毒滅菌、過濾滅菌植物細胞培養(yǎng)的方法有 、 等?？醋o培養(yǎng)、懸浮

培養(yǎng)外源基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ?、、 、 等?；驑尫?、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、聚乙二醇法、電擊法由花粉培養(yǎng)獲得的再生植株是 。單倍體植株DNA分子標記主要有 、 、 等。RFLP、ALFP、SSR人工種子包括： 、 、 等部分。人造種皮、人造胚孚L、發(fā)芽材料體細胞雜種的鑒定方法有 、 、 、等。形態(tài)學(xué)、細胞學(xué)、同工酶、分子生物學(xué)離體授粉的類型主要有： 、 、 等。離體雌蕊授粉、離體子房授粉、離體胚珠授粉無性系是 。用植物體細胞繁殖所獲得的后代植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法主要有 、 、 、 等。基因槍法、農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、花粉管通道法、電擊法植物細胞增殖的測定指標主要有 、細胞鮮重、細胞干

、 、 等。重、細胞密實體積、細胞植板率等。（其他答案：細胞計數(shù)、細胞有絲分裂指數(shù)）脫去植物病毒常用的方法有： 、 、 等。熱處理脫毒、莖尖培養(yǎng)脫毒、微體嫁接脫毒（其他供選擇的答案有：熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒、抗病毒藥劑脫毒等）植物組織培養(yǎng)中，愈傷組織誘導(dǎo)的三個階段是 、 、 。啟動期、分裂期、分化期植物種質(zhì)資源離體保存的方法主要有：—、 、等超低溫保存、低溫保存、干燥脫水法保存（備選答案有：包埋脫水法保存、玻璃化法保存、常溫保存等）植物小抱子在離體培養(yǎng)條件下的發(fā)育途徑主要有： 、 、 等。營養(yǎng)細胞發(fā)育途徑、生殖細胞發(fā)育途徑、營養(yǎng)細胞和

生殖細胞并進發(fā)育途徑（還可以填花粉均等分裂途徑）植物組織培養(yǎng)中，脫毒苗的檢測方法有 、 、 等。指示植物法、顯微鏡鑒定法、抗血清鑒定法三、簡答題簡答題答案簡述植物組織培養(yǎng)過程中的影響因素?？蓮模?）培養(yǎng)基的成分；（2）外植體；（3）培養(yǎng)條件三個方面分析。簡述離體培養(yǎng)條件下小抱子的發(fā)育?？蓮模?）營養(yǎng)細胞發(fā)育途徑；（2）生殖細胞發(fā)育途徑；（3）營養(yǎng)細胞和生殖細胞并進發(fā)育途徑；（4）細胞均等分裂途徑等方面闡述。簡述被微生物污染后的玻璃器皿應(yīng)該如何清洗。被真菌等微生物污染的玻璃器皿，必須在121?C高壓蒸汽滅菌30min后，倒去殘渣，用毛刷刷去瓶壁上的培養(yǎng)液和菌斑后，用水沖液干凈后，浸泡在洗滌液中，洗刷后，再用自來水沖液，蒸餾水沖淋一遍后，晾干備用。非PCR依賴的分子標記主主要有限制性片段長度多態(tài)性標記（AFLP）和染色體原位雜交兩種?？烧归_闡述。

要有幾種?簡述體細胞體細胞雜交（somatichybridization），在植物中亦即原生雜交的意義。質(zhì)體融合（protoplastfusion），利用適當?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)方法，可以將任何兩種原生質(zhì)體融合在一起；利用適宜的培養(yǎng)方法，可以由融合原生質(zhì)體再生出雜種植株即體細胞雜種?？朔参镉行噪s交不親和性、打破物種之間的生殖隔離、擴大遺傳變異等（適當展開論述）。植物組織培滅菌方法主要有蒸汽火菌、高溫空氣滅菌、過濾滅菌、灼養(yǎng)中，滅菌方燒火菌、輻照滅菌等?？珊喴獙⒚糠N方法闡述。法主要有哪些？簡述原生質(zhì)從植物材料的選擇一分離原生質(zhì)體一原生質(zhì)體純化一原生體分離培養(yǎng)質(zhì)體培養(yǎng)這幾個環(huán)節(jié)加以簡述的主要過程。影響細胞懸可從（1）培養(yǎng)基的成分；浮培養(yǎng)的因（2）外植體的選擇；素。（3）植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)；（4）培養(yǎng)條件等方面進行闡述。簡述花藥培（1）花粉培養(yǎng)屬細胞培養(yǎng)；花藥培養(yǎng)為器官培養(yǎng)。養(yǎng)和花粉培（2）花粉培養(yǎng)排除了藥壁、藥隔和花絲的干擾，從小抱

養(yǎng)的異同。子中獲得的材料是純合的；花藥培養(yǎng)存在藥壁等二倍體細胞對小抱子發(fā)育的的干擾，獲得的材料可能是雜合的。（3）花粉培養(yǎng)中小胞子能均勻地接觸化學(xué)和物理誘變因素，是研究吸收、轉(zhuǎn)化和誘變的理想材料；花藥培養(yǎng)中小抱子接觸的誘變因素不均勻。（4）花粉培養(yǎng)可觀察到雄核發(fā)育的全過程，是研究遺傳和發(fā)育的很好材料體系；花藥培養(yǎng)對雄核發(fā)育的全過程難于觀察。（5）花粉培養(yǎng)可以從每個花藥中獲得更多的單倍體；花藥培養(yǎng)獲得的單倍體少。簡述花粉管可從（1）花粉管通道法概念（又名子房注射法，花蘗通道法導(dǎo)入注射法，柱頭涂抹法，蘸花法。它是利用開花植物授粉后外源基因的形成的花粉管通道，直接將外源目的基因?qū)肷胁痪邆湔怼３＜毎诘穆?、合子或早期胚細胞，實現(xiàn)目的基因遺傳轉(zhuǎn)化的一種方法）；（2）花粉管通道法導(dǎo)入外源基因的步驟進行闡述。簡述RAPD的從以下方面敘述：基本實驗步?DNA的提取驟。?模板DNA濃度和質(zhì)量的檢測?PCR擴增?電泳檢測：PCR結(jié)束后每個樣品加4ul凝膠上樣緩沖液，每個泳道點樣20ul。?將凝膠浸于1ug/ml的EB中30min?60min，用水清

洗約10min,觀察、拍照。?統(tǒng)計分析：記錄條帶清晰的RAPD條帶，計算帶紋相似率；計算帶頻率、群內(nèi)遺傳純度；DNA片段大小。簡述幾種轉(zhuǎn)基因植物材料的檢測方法。對轉(zhuǎn)基因植物材料中目的基因的表達主要采用分子生物學(xué)方法和生物化學(xué)方法檢測。主要有：報告基因檢測法、Southern雜交法、Northern雜交法、Western雜交法、PCR方法、生物學(xué)鑒定等。（1）報告基因檢測法：利用報告基因能快速報告細胞是否被轉(zhuǎn)化的特點，來檢測轉(zhuǎn)基因植物材料的方法。（2）Southern雜交法：主要是利用兩條單鏈DNA互補性，來檢測外源DNA的轉(zhuǎn)化結(jié)果，該方法Southern于1975年發(fā)明的。該方法只能驗證轉(zhuǎn)化基因是否存在于被檢測植株中，但不能得到基因是否表達的信息。（3）Northern雜交法：用于檢測外源基因轉(zhuǎn)錄出來的mRNA，i^法是Alwine于1977年發(fā)明的。該方法能檢測轉(zhuǎn)化基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,在轉(zhuǎn)錄水平上基因的表達和調(diào)控。（4）Western雜交法：是將外源基因轉(zhuǎn)錄并翻譯的蛋白質(zhì)從SDS聚丙烯酰胺凝膠性移到固相支持體上，然后對固定化蛋白質(zhì)進行免疫學(xué)測定。該方法只能驗證轉(zhuǎn)化基因是否存在在蛋白質(zhì)水平上的正常表達。（5）PCR方法：在一種耐高溫的DNA聚合酶作用下，通過引物和模板DNA進行多聚酶鏈式反應(yīng)（PCR）來擴增DNA°i^法只能驗證轉(zhuǎn)化基因是否存在于被檢測植株中，但不能得到基因是否表達的信息。該方法比Southern雜交法簡單。（6）生物學(xué)鑒定：對轉(zhuǎn)基因植物的生物學(xué)性狀進行觀察，鑒定基因的功能和表型，是否穩(wěn)定地遺傳給后代。該方法能驗證基因是否能正常地表達，是否穩(wěn)定遺傳給后代。四、論述題論述題答案簡述DNA分子標記在植物研究中的應(yīng)用。（1）比較生物的遺傳變異性，從而研究親緣、進化關(guān)系。

（2）構(gòu)建遺傳連鎖圖，進行分子標記輔助選擇。（3）構(gòu)建遺傳圖譜，進行基因定位、克隆。例如：RFLP-（restrictionfragmentlengthpolymorphism）限制性片段長度多態(tài)性標記。特定生物類型的基因組DNA經(jīng)某一種限制性內(nèi)切酶完全酶解后，會產(chǎn)生分子量不同的同源等位片段，或稱限制性等位片段，通過電泳的方法分離和檢測這些片段。凡是可以引起酶解位點變異的突變，如點突變（新產(chǎn)生和去除酶切位點）和一段DNA的重新組織（如插入和缺失造成酶切位點間的長度發(fā)生變化）等均可導(dǎo)致限制性等位片段的變化，從而產(chǎn)生RFLP。植物細胞培養(yǎng)的應(yīng)用可從（1）篩選突變體；有哪些？（2）生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物；（3）其他應(yīng)用（克服遠緣雜種的不育性，用于植物代謝生理學(xué)、生物化學(xué)等的研究）等方面展開闡述。在培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)部分培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)部分培養(yǎng)材料被污染，可能的原因培養(yǎng)材料被污染，試分主要如下：（需要展開討論，根據(jù)情況加分或扣分）析原因。（1）植物材料本身內(nèi)生菌的生長；（2）培養(yǎng)基滅菌不徹底；（3）培養(yǎng)基火菌后，微生物從器皿的封口處進入；

（4）培養(yǎng)材料表面消毒不徹底；（5）無菌接種操作不規(guī)范；（6）接種室或超凈工作臺空氣不潔凈；（7）培養(yǎng)室空氣不潔凈或濕度較大。夏季，在培養(yǎng)室中發(fā)現(xiàn)可從外植體、培養(yǎng)基、無菌操作、培養(yǎng)環(huán)境等方大量培養(yǎng)物進菌，試分面進行闡述。（要詳細展開）析可能的原因。將一個抗病基因?qū)耄?）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進行DNA水平分了改良的目的植物（如析（PCR或雜交分析）（3分）水稻或玉米），如何分（2）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進行RNA水平分析基因的功能？析（RT-PCR）（3分）（3）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進行蛋白質(zhì)水平分析（雜交分析）（3分）（4）對導(dǎo)入抗病基因的目的植物進行抗病性鑒定。（6分）每一點要做適當展開論述。種質(zhì)離體保存的意義?？蓮模?）種質(zhì)離體