紅細(xì)胞血型及相關(guān)檢測演示文稿

紅細(xì)胞血型及相關(guān)檢測演示文稿當(dāng)前1頁，總共59頁。（優(yōu)選）紅細(xì)胞血型及相關(guān)檢測當(dāng)前2頁，總共59頁。教學(xué)目標(biāo)掌握ABO和Rh血型鑒定、交叉配血試驗(yàn)原理、方法和質(zhì)量控制熟悉紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩查及鑒定方法了解吸收放散試驗(yàn)當(dāng)前3頁，總共59頁。一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)試管法（二）鹽水介質(zhì)玻片法（三）微柱凝膠血型定型檢測卡法（四）質(zhì)量保證：試管法、玻片法、卡式（五）方法學(xué)評(píng)價(jià)（六）臨床應(yīng)用（七）不一致原因及解決方法當(dāng)前4頁，總共59頁。ABO血型鑒定原理正向定型：已知的特異性抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清）檢查紅細(xì)胞的未知抗原反向定型：已知的血型的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢查血清中的未知抗體A抗原B抗原A和B抗原無A和B抗原抗A抗體抗B抗體抗A、抗B抗體無抗A、抗B抗體當(dāng)前5頁，總共59頁。ABO血型鑒定結(jié)果判斷正向定型（標(biāo)準(zhǔn)血清+被檢者紅細(xì)胞）反向定型（標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞+被檢者血清）結(jié)果判斷抗A抗B

A型紅細(xì)胞B型紅細(xì)胞O型紅細(xì)胞

+--+-A-++--B++---AB--++-O當(dāng)前6頁，總共59頁。試管法當(dāng)前7頁，總共59頁。試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前8頁，總共59頁。瓷板法當(dāng)前9頁，總共59頁。結(jié)果判定當(dāng)前10頁，總共59頁。

凝膠技術(shù)的原理

反應(yīng)室外管壁反應(yīng)室底孔內(nèi)套管壁凝膠或玻璃珠親和凝膠試劑或鹽水特殊粘液當(dāng)前11頁，總共59頁。凝膠技術(shù)的原理：A、反應(yīng)室：下端底孔很小，液體在孵育過程中不會(huì)流入下方微柱中。B、試劑或鹽水層：紅細(xì)胞在離心力作用下穿越該層，紅細(xì)胞與反應(yīng)室中的血清分離并與該層液體中的試劑反應(yīng)。C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。當(dāng)前12頁，總共59頁。原理：凝膠分子篩和親和效應(yīng)微柱凝膠柱中填充凝膠（葡聚糖），及相應(yīng)試劑（抗體或抗原）。凝膠分子間的間隙只允許游離紅細(xì)胞通過，分子排阻層析原則將發(fā)生凝集反應(yīng)的紅細(xì)胞阻滯于凝膠之內(nèi)，而未凝集的游離紅細(xì)胞則穿過微孔運(yùn)動(dòng)到管底，從而判定有無凝集反應(yīng)。當(dāng)前13頁，總共59頁。

結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研室當(dāng)前14頁，總共59頁。微孔板法當(dāng)前15頁，總共59頁。（四）質(zhì)量保證試管法標(biāo)記加樣量、加樣順序溶血是一種陽性反應(yīng)玻片法標(biāo)記正定型顯微鏡陰性確認(rèn)當(dāng)前16頁，總共59頁。微柱凝膠血型定型檢測卡血清標(biāo)本應(yīng)完全取出纖維蛋白，血漿標(biāo)本建議EDTA-K2或枸櫞酸鹽康寧先加紅細(xì)胞懸液，再加血漿或抗體試劑紅細(xì)胞懸液和血漿各加50ul按照說明書操作（四）質(zhì)量保證當(dāng)前17頁，總共59頁。（五）方法學(xué)評(píng)價(jià)試管法：常用，廣泛，較玻片法靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確，反應(yīng)時(shí)間短，結(jié)果不能保存，人為因素大玻片法：操作簡單、無需特殊儀器，適用于血型普查；靈敏度差，反應(yīng)時(shí)間長，不能用于反定型，結(jié)果不能保存，人為因素影響大，易發(fā)生血液污染微柱凝膠血型定型檢測卡法：特異性強(qiáng)、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，保持時(shí)間長，標(biāo)本和試劑用量少，操作可以標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化，減少了醫(yī)源性污染，但需要專門離心設(shè)備和試劑卡，成本較高當(dāng)前18頁，總共59頁。輸血治療的首要步驟組織器官移植新生兒溶血病ABO正反定型的臨床意義當(dāng)前19頁，總共59頁。ABO正反定型不符分析基本程序首先重復(fù)試驗(yàn)重新采集獻(xiàn)血者與受血者血液標(biāo)本查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等多次洗滌標(biāo)本紅細(xì)胞應(yīng)用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測紅細(xì)胞當(dāng)前20頁，總共59頁。錯(cuò)加試劑或標(biāo)本技術(shù)和操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一致的原因試劑失效或污染細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)溶血現(xiàn)象未能識(shí)別漏加試劑結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤血清異常紅細(xì)胞致敏近期輸血疾病導(dǎo)致抗原減弱抗體減弱不規(guī)則抗體年齡近期進(jìn)行大量血漿置換治療當(dāng)前21頁，總共59頁。RhD定型及其常見問題1.Rh定型RhD定型，試管法最經(jīng)典，多使用微柱凝膠卡2.RhD陰性確認(rèn)IgM抗-D陰性三個(gè)廠家IgG抗-D進(jìn)行確認(rèn)抗人球蛋白法進(jìn)行確認(rèn)三種IgG抗-D試劑均為陰性，報(bào)RhD陰性一種或一種以上IgG抗-D試劑為陽性，報(bào)弱D當(dāng)前22頁，總共59頁。概念：檢測受血者和供血者血液中是否含有不相配合的成分，是輸血前確保受血者輸血安全必不可少的試驗(yàn)包括：主側(cè)配血和次側(cè)配血主側(cè)是受血者血清與供血者紅細(xì)胞相配的一側(cè)次側(cè)是受血者紅細(xì)胞與供血者血清相配的一側(cè)。三、交叉配血試驗(yàn)當(dāng)前23頁，總共59頁。交叉配血的主次側(cè)當(dāng)前24頁，總共59頁。（一）鹽水介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)本質(zhì)凝集反應(yīng)，直接凝集試驗(yàn)檢測IgM類抗體方法：試管法ABO同型配血，主側(cè)和次側(cè)均無凝集及溶血，表示無輸血禁忌，可以輸血當(dāng)前25頁，總共59頁。鹽水介質(zhì)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)離心看結(jié)果陽性陰性當(dāng)前26頁，總共59頁。（二）抗球蛋白介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)：又稱Coombs試驗(yàn)，是一種檢查不完全抗體的敏感方法分類：直接抗球蛋白試驗(yàn)和間接抗球蛋白試驗(yàn)當(dāng)前27頁，總共59頁。抗球蛋白試驗(yàn)原理Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細(xì)胞凝集。直接試驗(yàn)：是檢查被檢紅細(xì)胞上有無不完全抗體間接試驗(yàn)：是檢查血清中游離的不完全抗體當(dāng)前28頁，總共59頁。直接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白自身抗體當(dāng)前29頁，總共59頁。間接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體當(dāng)前30頁，總共59頁。2不完全抗體可以結(jié)合在紅細(xì)胞表面,但是不能和兩個(gè)紅細(xì)胞同時(shí)結(jié)合（致敏）。3加入抗人球蛋白1紅細(xì)胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時(shí)和兩個(gè)不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細(xì)胞連接在一起抗人球蛋白交叉配血法示意圖當(dāng)前31頁，總共59頁?？骨虻鞍着溲椒ɑ颊攉I(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)37℃37℃水浴30分鐘三洗

當(dāng)前32頁，總共59頁?？骨虻鞍追椒ㄅ溲椒涌骨虻鞍纂x心看結(jié)果陽性陰性抗球蛋白試劑上海市血液中心血當(dāng)前33頁，總共59頁。結(jié)果判讀直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽性陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，被檢管不凝集，需要做陰性確認(rèn)后判定結(jié)果（無凝集的被檢管中加入IgG抗-D致敏紅細(xì)胞后離心，出現(xiàn)凝集判陰性，否則重新試驗(yàn)陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管凝集，結(jié)果不可信不發(fā)報(bào)告，分析原因重做當(dāng)前34頁，總共59頁。間接抗球蛋白試驗(yàn)陽性對(duì)照管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，陰性對(duì)照管未呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，被檢管呈現(xiàn)凝集反應(yīng)為陽性結(jié)果，被檢者血清內(nèi)含有抗體，如果自身對(duì)照無凝集，同種抗體；如果被檢者結(jié)果陰性，被檢者血清中未被查出意外抗體。陽性對(duì)照管不凝集和（或）陰性對(duì)照管出現(xiàn)凝集，實(shí)驗(yàn)失敗。結(jié)果判讀當(dāng)前35頁，總共59頁?？骨虻鞍自噭┎患兗訇栃约訇幮约t細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝標(biāo)本漏加試劑紅細(xì)胞、血清及試劑質(zhì)量洗滌不充分操作過程不連續(xù)離心過度紅細(xì)胞過多或過少血清濃度過大孵育時(shí)間和溫度不當(dāng)前帶現(xiàn)象間接抗球蛋白試驗(yàn)鹽水保存不當(dāng)紅細(xì)胞直抗陽性當(dāng)前36頁，總共59頁。（三）低離子聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)

是一種快速、簡便、紅細(xì)胞不完全抗體的方法多數(shù)IgG抗體能夠被檢出，但I(xiàn)gG抗-K抗體除外漢族至今未發(fā)現(xiàn)K抗原陽性，也未檢出抗-K抗體當(dāng)前37頁，總共59頁。聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)電荷，懸浮在電解質(zhì)溶液中，會(huì)吸引大量陽離子，紅細(xì)胞則被擴(kuò)散的雙層離子云所圍繞，形成zeta電位。當(dāng)前38頁，總共59頁。紅細(xì)胞表面電荷及其相互之間的距離當(dāng)前39頁，總共59頁。原理聚凝胺技術(shù)首先利用低離子溶液（LIM）降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的電子云再加入聚凝胺溶液，溶解后產(chǎn)生很多正電荷，中和紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，紅細(xì)胞zeta電位降低，縮短紅細(xì)胞距離，產(chǎn)生非特異性聚集最后加入懸浮液，具有中和聚凝胺陽離子的作用，使正常紅細(xì)胞的非特異性凝集散開，特異性凝集仍然存在當(dāng)前40頁，總共59頁。1紅細(xì)胞間有一定間距2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集3加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4紅細(xì)胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉當(dāng)前41頁，總共59頁。1紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集3加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4由于不完全抗體的結(jié)合，紅細(xì)胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體當(dāng)前42頁，總共59頁。聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻(xiàn)血者主側(cè)次側(cè)室溫放置1分鐘Polybrene上海市血液中心血主次側(cè)均加聚凝胺當(dāng)前43頁，總共59頁。聚凝胺(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引起紅細(xì)胞非特異性凝集陽性陰性重懸液上海市血液中心血主次側(cè)均加重懸液看結(jié)果當(dāng)前44頁，總共59頁。注意事項(xiàng)不能使用含枸櫞酸鈉和肝素抗凝標(biāo)本按比例加樣，非特異凝集60秒內(nèi)觀察結(jié)果出現(xiàn)不配合試驗(yàn)時(shí)，抗球蛋白重復(fù)，結(jié)果不一致時(shí)以抗球蛋白試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)一般使用血清對(duì)Kell系統(tǒng)檢測不理想按照說明書當(dāng)前45頁，總共59頁。方法學(xué)評(píng)價(jià)鹽水介質(zhì)法：適用于ABO血型交叉配血，操作簡單、快速，不能檢出不相配合的IgG類抗體抗球蛋白試驗(yàn)：結(jié)果準(zhǔn)確，檢測不完全抗體最可靠的方法，操作繁瑣費(fèi)事，試劑較貴低離子聚凝胺介質(zhì)法：應(yīng)用廣泛、快速、準(zhǔn)確，可檢測IgM、IgG類抗體，需特殊試劑，操作復(fù)雜。當(dāng)前46頁，總共59頁。臨床應(yīng)用可以發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定的錯(cuò)誤，如A亞型發(fā)現(xiàn)亞型配血不合的情況發(fā)現(xiàn)其他血型抗體或不規(guī)則抗體當(dāng)前47頁，總共59頁。四、紅細(xì)胞抗體篩查與鑒定《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》

第四章第17條：“凡遇以下情況必須按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)定做抗體篩選試驗(yàn)：1.交叉配血不合的；2.對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需接受多次輸血者當(dāng)前48頁，總共59頁。為什么要開展輸血前的“抗體篩選”檢查

1.目前已知紅細(xì)胞有30個(gè)血型系統(tǒng)（近300個(gè)抗原）。紅細(xì)胞抗原的多樣性決定了抗體的多樣性，檢測抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可確保絕大多數(shù)病人的輸血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引發(fā)的溶血。當(dāng)前49頁，總共59頁。2.臨床有的病人出現(xiàn)慢性（遲緩性）溶血反應(yīng)，易忽視或引不起臨床醫(yī)師視。（理論上講，成年人每輸1U的濃縮紅細(xì)胞，在不丟失、不被破壞（溶血）的前提下，應(yīng)能提升Hb5-10g/L(0.5-1g/dl),保持15-30天。如果輸3-4URBC，病人Hb上升不到10g/L，或幾天后（1周內(nèi)）Hb仍舊下降到原來水平，甚至更低。這種情況，就要考慮是否有慢性溶血反應(yīng)存在。）3.利于早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的抗體，充足的時(shí)間來選擇相配合的血，避免患者病情的延誤。當(dāng)前50頁，總共59頁。什么叫“不規(guī)則抗體篩查”檢查？

1.不規(guī)則抗體的含義：除ABO系統(tǒng)外，其它系統(tǒng)產(chǎn)生的抗不符合Landsteiner規(guī)則，稱為不規(guī)則抗體或意外抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M、jk-抗體。

2.“不規(guī)則抗體篩查”的含義：用具備有臨床意義的血型抗原的O型紅細(xì)胞，檢測病人血清（含多種抗體）；如果出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，則提示病人有不規(guī)則抗體存在，可判為“抗體篩選”陽性。當(dāng)前51頁，總共59頁。不規(guī)則抗體的篩查和鑒定患者血清+試劑篩選紅細(xì)胞鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)酶介質(zhì)法當(dāng)前52頁，總共59頁。篩選細(xì)胞要求抗體篩選用紅細(xì)胞懸液（1#、2#、3#）試劑紅細(xì)胞必須含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb，所選用的2-3個(gè)O型紅細(xì)胞的抗原還應(yīng)是互補(bǔ)的，純合子基因所表達(dá)的抗原更有利于相應(yīng)抗體的檢出

當(dāng)前53頁，總共59頁。不規(guī)則抗體鑒定不規(guī)則抗體篩查陽性后，進(jìn)行抗體鑒定，明確抗體的類別譜細(xì)胞與待檢者血清反應(yīng)，反應(yīng)格局，抗