HPV基因診斷試劑盒

一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W研究進(jìn)展二、HPV的生物學(xué)研究三、宮頸癌的早期篩查四、宮頸病變的治療第一頁，共51頁。一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W研究進(jìn)展第二頁，共51頁。宮頸癌－－最常見的婦科惡性腫瘤據(jù)世界范圍內(nèi)統(tǒng)計(jì)，每年大約有50萬左右的宮頸癌新發(fā)病例，占所有癌癥新發(fā)病例的5%，其中80%的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。我國每年宮頸癌新發(fā)病例約13.15萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的28.8%，發(fā)病率僅次于乳腺癌位居第二。隨著篩查制度的建立，世界宮頸癌的發(fā)病率和死亡率已經(jīng)大幅下降。我國由70年代的10.28/10萬下降到90年代的3.25/10萬，但在高發(fā)病區(qū)，死亡率仍高居不下。地區(qū)死亡率(/10萬）世界8.00中國3.25北京2.54上海3.8山西陽城36.00第三頁，共51頁?；疾∧挲g更趨于年輕化（發(fā)病年齡提前到45歲），發(fā)病史縮短。如吉林省在80年代統(tǒng)計(jì)宮頸癌患者中小于35歲的婦女占4.8％，而2000年已經(jīng)占到34.1％第四頁，共51頁。子宮頸癌的危險(xiǎn)因素：行為危險(xiǎn)因素：如性生活過早、多個(gè)性伴侶、多孕多產(chǎn)、社會(huì)經(jīng)濟(jì)地位低下、營養(yǎng)不良及性混亂等；生物學(xué)因素：如細(xì)菌、病毒和衣原體等各種微生物的感染。目前僅有少量研究表明宮頸癌可能存在著家族聚集現(xiàn)象。第五頁，共51頁。宮頸癌的生物學(xué)病因研究進(jìn)展：

*早在十九世紀(jì)四十年代，一位意大利醫(yī)生RegoniStern最早提出結(jié)婚與否與宮頸癌的發(fā)生可能有關(guān)；

*60－70年代，人們的主要研究對象是HSV,HCMV等病原體；

*1974年zurHausen首次提出HPV感染與宮頸腫瘤有密切關(guān)系；

*1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭狀瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）顆粒；

*1995年IARC專題討論會(huì)：高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌的主要病因。

---99.7％的宮頸癌患者都能發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染。

第六頁，共51頁。二、HPV的生物學(xué)研究第七頁，共51頁。人乳頭瘤病毒（HumanPapillomaviruses,HPV）雙鏈DNA無包膜病毒環(huán)狀DNA，約8Kb；病毒顆粒直徑為50～55nm；依靠宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。

HPV病毒電鏡圖第八頁，共51頁。

型別：已發(fā)現(xiàn)100多種不同的亞型（如果DNA序列同源性小于90％，則定為新的亞型）。其中超過35種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關(guān)。

1）低危型：宮頸上皮內(nèi)低度病變，引起外生殖器濕疣等良性性?。℉PV6、11、42）；

2）高危型：宮頸上皮內(nèi)高度病變，與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)（HPV16、18、31、33、35、39

、45、51、52、53、56、58、59、66及68）；

分布：有些亞型和地區(qū)、宮頸癌的病理類型有關(guān)。

HPV45在非洲西部很常見，HPV39和59在美洲中部和南部常見，HPV52，58在中國常見。

在宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鱗癌中HPV18分別占56％和39％。型別與分布第九頁，共51頁。表HPV型別與宮頸病變常見HPV型別宮頸病變6，11濕疣，CINI16CIN,18CIN30，40，58，69CIN31，33，35，39CIN45，51，52，56CINI42，43，44CINI53正常宮頸上皮54尖銳濕疣55鮑溫樣丘疹病59VIN61，62，64，67VaIN66鱗癌70外陰乳頭狀瘤第十頁，共51頁。HPV在歐洲的常見分型和感染率最常見的低危型（HPV6、11）最常見的高危型（HPV16、18、31、33、45、58）HPV16HPV18HPV45HPV31HPV33Other宮頸癌患者中高危型HPV感染率(歐州2000年資料)第十一頁，共51頁。深圳不同HPV亞型的檢出頻率統(tǒng)計(jì)（WHO項(xiàng)目）

注：1.本表統(tǒng)計(jì)樣本數(shù)為1153例，其中陽性樣本數(shù)為119例；由于檢測樣本中存在復(fù)合感染，故亞型的檢出頻率＝（該亞型的檢出次數(shù)/所有亞型的檢出次數(shù)）×100％，所有亞型檢出次數(shù)為226。2.本表統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)由WHO深圳項(xiàng)目提供，HPV分型基因檢測試劑由亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司提供。第十二頁，共51頁。浙江12000例HPV檢測初步結(jié)果分型情況：16型占26%左右，其他依次為58、33、52、45、18。與其他地區(qū)的統(tǒng)計(jì)有明顯差異。高危人群陽性率在30%左右，普通人群在11%左右。溫州地區(qū)麗水地區(qū)陽性率明顯高于省內(nèi)其他地區(qū)。進(jìn)一步的研究正在進(jìn)行中。第十三頁，共51頁。HPV基因結(jié)構(gòu)按功能可分為早期區(qū)(E區(qū))、晚期區(qū)(L區(qū))和非編碼區(qū)（LCR）三個(gè)區(qū)域。E區(qū)分為E1～E7開放閱讀框架，主要編碼與病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、調(diào)控和細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)的蛋白（HPV無E3）。L區(qū)分L1和L2，分別編碼主要衣殼蛋白和次要衣殼蛋白。LCR是E區(qū)與L區(qū)間-6.4～1.0Kb的DNA片段，可負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的調(diào)控第十四頁，共51頁。HPV的致癌機(jī)理HPV以游離態(tài)感染上皮細(xì)胞后，可以持續(xù)存在于染色體外，不引起任何病變，或引起良性病變和低度病變，如尖銳濕疣或輕度不典型增生等。而癌變則與病毒DNA整合入宿主染色體密切相關(guān)。高危型HPVDNA鏈通常在E1或E2的開放讀碼框內(nèi)斷裂，使HPVDNA整合入染色體脆弱區(qū)。E6和E7具有促進(jìn)和維持整合狀態(tài)的功能。HPVE6蛋白間接抑制p53活性，阻礙細(xì)胞對DNA損傷的反應(yīng)。（負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和分化）HPVE7蛋白與pRb結(jié)合后使其功能失活，改變細(xì)胞周期的正常調(diào)控。第十五頁，共51頁。國內(nèi)對不同亞型感染致病性研究近況北京大學(xué)第一臨床醫(yī)院趙健等對1715例患者研究表明：在高危型中，致癌性最強(qiáng)的是16型，其次是33和31型。（十五攻關(guān)資助項(xiàng)目）。在北京中日友好醫(yī)院進(jìn)行的591例研究中，發(fā)現(xiàn)多重感染患者發(fā)生宮頸癌的危險(xiǎn)性明顯高于單一感染者，對放療敏感性差，無進(jìn)展生存期和帶瘤生存期比單一感染者明顯縮短。第十六頁，共51頁。HPV感染途徑及危險(xiǎn)因素感染途徑：主要為性傳播和直接皮膚接觸特別案例：母親分娩過程中傳播至嬰兒的口腔危險(xiǎn)因素：1、年齡因素：30歲以后HPV感染率下降，但危險(xiǎn)性提高。2、性行為的影響：初次性交年齡越小，性伴侶數(shù)量越多，感染率越高；3、避孕方法：尚無一致意見；4、免疫抑制狀態(tài)使HPV感染的危險(xiǎn)性增加：如HIV感染后、腎移植等。第十七頁，共51頁。三、宮頸癌的早期篩查第十八頁，共51頁。未見上皮內(nèi)病變－－鱗狀上皮細(xì)胞異常－－腺上皮細(xì)胞異常ASC（AtypicalSquamousCells)：非典型鱗狀上皮細(xì)胞ASC-US（ASCofUndeterminedSignification）:意義不明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞ASC-H（ASCcannotexcludeHSIL）：意義不明確的非典型鱗狀上皮細(xì)胞不除外高度鱗狀上皮內(nèi)病變L-SIL（Low－gradeSquamousIntraepithelialLesion）：低度鱗狀上皮內(nèi)病變－－－HPV感染、CINIH-SIL（High－gradeSIL）：高度鱗狀上皮內(nèi)病變－－－與CINII、CINIII或原位癌含義一致SCC（SquamousCellCarcinoma）：鱗狀細(xì)胞癌AGC（AtypicalGlandularCells)：非典型腺上皮細(xì)胞AIS（AdenocarcinomaInSitu)：腺原位癌ACA（Adenocarcinoma）：腺癌組織學(xué)檢查的分類：CIN（CervicalIntraepithelialNeoplasm)：宮頸上皮內(nèi)瘤變CINI：輕度不典型增生CINII：中度不典型增生CINIII：重度不典型增生、原位癌2001年版TBS（TheBethesdaSystem)報(bào)告分類中常見的細(xì)胞學(xué)診斷宮頸癌前病變的幾個(gè)術(shù)語解釋：第十九頁，共51頁。正常婦女HPV暴露主要是性傳播感染幾率：>40％HPV年齡<30歲一過性，80％平均8個(gè)月年齡>30歲平均8~24個(gè)月CINI（組織學(xué)）CINII/III（組織學(xué)）無細(xì)胞學(xué)改變/HPV消除子宮頸浸潤癌機(jī)體免疫機(jī)制輔助致癌因素圖HPV感染與宮頸病變的自然過程潛伏感染期亞臨床感染期臨床癥狀期HPV相關(guān)腫瘤期8－10年第二十頁，共51頁。

臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要8-10年。因此，必須采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防和篩查措施，才能夠阻止宮頸癌的發(fā)生并有望最終消滅宮頸癌。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的支持下，婦科醫(yī)生應(yīng)該大有作為。篩查是早診早治關(guān)鍵第二十一頁，共51頁。篩查間隔時(shí)間（年）1233～55～10>10陽性病變風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)122.5349備注：1～3年篩查間隔比較安全，隨著篩查間隔的增加，風(fēng)險(xiǎn)大幅度增加。表：篩查間隔時(shí)間與陽性病變風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)表第二十二頁，共51頁。表：不同的篩查頻率，可以降低的宮頸癌的累積發(fā)病率

篩查頻率累積發(fā)病率的降低（％）每年篩查一次90-93每兩年篩查一次86-91每三年篩查一次75-88一生篩查5次61-74一生篩查3次35-55一生篩查2次29-42一生篩查一次17-32摘自：GoldieSJ,etal.2001.13；篩查策略所應(yīng)用方法包括：1-VIA檢查，2-HPV檢測，3-巴氏涂片。第二十三頁，共51頁。篩查對象：三年以上性行為或21歲以上有性行為的婦女。起始年齡：經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)：25～30歲，經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)：35～40歲，高危人群起始年齡應(yīng)相應(yīng)提前。終止年齡：65歲以上危險(xiǎn)性極低。篩查間隔：每年一次，若連續(xù)兩次HPV和細(xì)胞學(xué)篩查均為正常，可延長篩查間隔時(shí)間至5～8年。發(fā)達(dá)國家：16—68歲，HPV+TCT，間隔3—5年。中國癌癥研究基金會(huì)（CCRF）宮頸癌篩查及早診早治指南第二十四頁，共51頁。中國癌癥研究基金會(huì)（CCRF）

宮頸癌篩查及早診早治指南篩查方案：基本方案：肉眼觀察＋冰醋酸試驗(yàn)（碘液試驗(yàn)）（農(nóng)村普查）一般方案：HPV+papsmear檢測（二級(jí)及以上醫(yī)院）最佳方案：HPV+TCT檢測（發(fā)達(dá)地區(qū)）檢查后隨訪對象：細(xì)胞學(xué)低度病變、CINI以上者、“特殊職業(yè)”婦女人群、年齡>30歲以上的高危HPV感染者，每年定期隨訪檢查。注意事項(xiàng)：1、月經(jīng)來潮后10～18天為最佳檢查時(shí)間2、檢查前48h內(nèi)不要做陰道沖洗，不用使用陰道內(nèi)用藥物3、檢查前48h內(nèi)不要行性生活第二十五頁，共51頁。第二十六頁，共51頁。宮頸癌的常規(guī)臨床檢測方法臨床檢查：如肉眼觀察、陰道鏡等

操作簡便，但準(zhǔn)確率和特異性有待提高（50-70％）細(xì)胞學(xué)檢測：觀察宮頸上皮細(xì)胞的變異，常見方法有：巴氏涂片、LCT、TCT等（70%以上）

1）長期宮頸糜爛可導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞形態(tài)變異，但非HPV引起的細(xì)胞形態(tài)異常與宮頸癌病變沒有直接聯(lián)系。2）在感染早期，細(xì)胞往往不會(huì)出現(xiàn)形態(tài)變化，但此時(shí)HPV對細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)的損傷可能已經(jīng)產(chǎn)生。

病毒學(xué)檢測：HPVDNA檢測（PCR方法），常見方法有：基因芯片分型檢測、HC-2、熒光PCR等特異性強(qiáng)、靈敏度高，操作簡便快捷(98%)第二十七頁，共51頁。宮頸分泌物HPV結(jié)果注：亞能和凱普均以13種高危型別統(tǒng)計(jì)若以23種型別計(jì)算，亞能HPV陽性129例，陽性率為11.3％。共剔除18例13種型別以外的型別第二十八頁，共51頁。HPV基因分型快速診斷試劑應(yīng)用膜雜交技術(shù)建立的敏感、特異、簡便的檢測方法，可同時(shí)對23種HPV亞型(18種高危型及5種低危型)進(jìn)行檢測。第二十九頁，共51頁。

基因芯片（GeneChip）就是將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上，然后與已做標(biāo)記的樣本進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號(hào)的強(qiáng)度和分布來進(jìn)行分析。高度的靈敏性和準(zhǔn)確性快速簡便同時(shí)檢測多種疾病第三十頁，共51頁。HPV基因分型快速診斷試劑操作流程采集樣本提取DNAPCR擴(kuò)增雜交顯色第三十一頁，共51頁。第三十二頁，共51頁。結(jié)果判斷檢測結(jié)果：HPV16、HPV43檢測結(jié)果：HPV33、HPV35第三十三頁，共51頁。（一）宮頸病變的篩查1、HPV檢測的最大優(yōu)勢之一在于發(fā)現(xiàn)高危型HPV陽性而細(xì)胞學(xué)涂片正常的婦女，因?yàn)檫@一人群中10％會(huì)在四年內(nèi)發(fā)展成CINⅢ。2、篩查并濃縮高風(fēng)險(xiǎn)人群，便于進(jìn)行有效監(jiān)控，早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌。3、HPV檢測的陰性預(yù)測值為99％，可將篩查間隔延長至3年一次，大大地降低了檢查成本。敏感性：88－100％特異性：98％陰性預(yù)測值：幾乎100％HPV檢測的臨床意義第三十四頁，共51頁。圖：德、法、英三個(gè)國家研究數(shù)據(jù)總概HPV（＋）是宮頸病變的重要依據(jù)，持續(xù)的HPV感染是CINII/CINIII的重要條件，相對于TCT檢測，HPV檢測敏感度更高，更有臨床意義，在歐洲已經(jīng)作為首選篩查方法。第三十五頁，共51頁。GC-HPV與TCT的差異GC-HPVTCT兩種檢測的差異病原學(xué)檢測細(xì)胞學(xué)檢測兩種檢測對宮頸癌篩查的提示全程提示即時(shí)提示臨床意義提示有患癌的可能，確定已經(jīng)發(fā)生細(xì)胞形態(tài)改變者的病因判斷是否進(jìn)入亞臨床期或臨床期第三十六頁，共51頁。（二）ASCUS和低度病變的分流1、HPV檢測通過排除可疑的或低度病變，從而提高診斷的可信度，降低漏診的風(fēng)險(xiǎn)。

2、把具有潛在宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)的婦女從低風(fēng)險(xiǎn)的婦女中區(qū)分出來，指導(dǎo)陰道鏡的合理使用。3、比起復(fù)查細(xì)胞學(xué)，HPV檢測提供了更快捷的結(jié)果，從而很有信心地把HPV陰性的婦女重新放回常規(guī)篩查人群中。

第三十七頁，共51頁。病例數(shù)：3000例，圖顯示HPV的相對風(fēng)險(xiǎn)隨CIN的級(jí)別上升而明顯增加第三十八頁，共51頁。（三）HPV檢查提供了CIN治療后隨診手段1、可預(yù)測病變惡化或術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，有效指導(dǎo)術(shù)后追蹤。

2、術(shù)后6個(gè)月、12個(gè)月檢測HPV陰性，提示病灶切除干凈，可最大限度減少病人的焦慮。3、若術(shù)后HPV檢測陽性，提示有殘留病灶及有復(fù)發(fā)的可能。

CIN患者：成功治療率達(dá)90～95％，復(fù)發(fā)率10％；但比正常人發(fā)生浸潤癌的幾率仍高4－5倍；危險(xiǎn)期：8年左右；

第三十九頁，共51頁。病變進(jìn)展（惡化）持續(xù)（穩(wěn)定）消退（逆轉(zhuǎn)）級(jí)別單純HPVCINICINIICINIII風(fēng)險(xiǎn)率(%)5153045持續(xù)率(%)15373556消退率(%)80574332CIN級(jí)別發(fā)展為CC的風(fēng)險(xiǎn)評估說明：CIN級(jí)別越高，其消退和逆轉(zhuǎn)的機(jī)會(huì)越小。各型CINⅢ和宮頸癌中高危型HPV感染率達(dá)98%以第四十頁，共51頁。四、宮頸病變的治療“治病”即“治毒”----郎景和教授語錄第四十一頁，共51頁。一、物理治療：電凝、冷凍、微波、激光等。二、手術(shù)治療：LEEP、子宮頸錐切術(shù)等。三、藥物治療：抗生素、干擾素、HPV疫苗（預(yù)防型和治療型）第四十二頁，共5