實驗二靜脈注射氨茶堿血藥濃及藥動學參數(shù)的檢測

實驗二靜脈注射氨茶堿血藥濃及藥動學參數(shù)的檢測第1頁/共17頁實驗二靜脈注射氨茶堿血藥濃度測定及藥動學參數(shù)的計算第2頁/共17頁一、實驗目的:1.掌握紫外雙波長法測定氨茶堿血藥濃度的方法；2.熟悉家兔耳緣靜脈注射給藥后藥動學處理原理和方法；3.熟悉血清中藥物提取方法及雙波長測定法在血藥濃度測定中的應用。第3頁/共17頁二、基本原理1.氨茶堿氨茶堿又名茶堿乙烯雙胺，由茶堿與乙二胺縮合而成，氨茶堿能抑制體內磷酸二酪酶，減慢環(huán)磷酸腺苷（cAMP）的分解速度，從而增加其在細胞內的含量，促使支氣管平滑肌舒張，有擴張膽管、冠狀動脈作用；減少腎小管對電解質的再吸收而呈現(xiàn)強心利尿作用，一般應用于支氣管哮喘、膽絞痛、心絞痛等。2.靜脈注射藥物動力學氨茶堿經靜脈進入血液，隨血液循環(huán)進行組織分布，達到平衡后轉入消除相。血藥濃度-時間曲線呈二室藥物動力學模型。3.氨茶堿血藥濃度的測定雙波長法測定原理：在酸性條件下，可用有機溶劑從血清中提取出茶堿，并同時沉淀血清蛋白，再用堿液將茶堿從有機溶劑中提出，然后采用雙波長法進行紫外測定，即測定λ274和λ298處的吸光度（λ274為茶堿和本底，即溶劑、血清的吸收，λ298為本底的吸收），△A=λ274-λ298

，可根據(jù)標準曲線進行濃度換算。第4頁/共17頁家兔耳緣靜脈注射氨茶堿家兔耳緣血管分布第5頁/共17頁二室藥物動力學模型：XcXpX0K10K12K21X0：靜脈注射給藥劑量；Xc：中央室的藥量；Xp：周邊室的藥量；K10：藥物從中央室消除的一級速率常數(shù)；K12：藥物從中央室向周邊室轉運的一級速率常數(shù)；K21：藥物從周邊室向中央室轉運的一級速率常數(shù)；lgCt分布相消除相藥物動力學公式：dxc/dt

=

K21*Xp

–

K12*Xc

–

K10*Xcdxp/dt

=

K12*Xc

–

K21*Xp利用消除相殘數(shù)法求算相關藥物動力學參數(shù)。第6頁/共17頁所用材料日本大耳白或新西蘭兔兔子固定器嬰兒稱1.5

ml

EP管其它:1

ml注射器,1.5

ml

EP管離心機,漩渦振蕩器,離心機,紫外檢測儀,10

ml離心管,三氯醋酸,氫氧化鈉,等.氨茶堿注射液第7頁/共17頁三、實驗操作1.氨茶堿標準曲線的繪制：取5支0.5ml空白家兔血清，分別加入氨茶堿注射液（2.5mg/2ml）使其濃度分別達到

0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，加0.1mol/L鹽酸0.2ml、5%異丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蝸旋混合后，3000r/min離心10min。吸取下層氯仿液4

ml至另一試管中，加入0.1mol/L

NaOH溶液4ml，蝸旋混合后、3000r/min，離心10min。吸取上層堿液，以0.1mol/NaOH溶液做參比，測定其在λ274和λ298的吸收度（A274和A298），計算△A，以茶堿濃度為橫坐標，△A為縱坐標描點繪圖，用Excel軟件求直線回歸方程和相關系數(shù)。2.靜脈注射氨茶堿和血藥濃度的測定①取體重2.5~3.0kg健康雄性家兔1只，于耳緣靜脈（外側）注射氨茶堿10mg/kg（2min內注完），另一耳用銳利刀片切割耳緣靜脈取血。分別在給氨茶堿后5、10、20、30、60、120、180

min取血約1.5ml，室溫下靜置60

min。②分離血清：等EP管中血液凝固后，10000

r/min離心15

s分離血清，各管均取血清0.5ml于10ml試管中，加0.1mol/L鹽酸0.2ml、5%異丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蝸旋混合后，3000r/min離心10min。③吸取下層氯仿液4

ml至另一試管中，加入0.1mol/L

NaOH溶液4ml，蝸旋混合后、3000r/min，離心10min。④吸取上層堿液，以0.1mol/NaOH溶液做參比，測定其在λ274和λ298的吸收度（A274和A298），計算△A。⑤將測得血清樣品的△A代入標準曲線的方程，求得相應的C，C×10即為茶堿的血藥濃度。以時間（T）為橫坐標，濃度對數(shù)（logC）為縱坐標，進行相應的藥動學數(shù)據(jù)處理。第8頁/共17頁3.藥動學參數(shù)的計算作時間t-濃度C-lgC表，畫lgC

–

t圖，求算Vc、K21、K10、K12（按課本P229例1處理）。4.本實驗3人一組

每組進行家兔耳緣靜脈給藥及家兔氨茶堿血藥濃度藥物動力學數(shù)據(jù)的計算。第9頁/共17頁四、實驗結果：T(min)510203060120180△AC(μg/ml)二、氨茶堿血藥濃度-時間表一、氨茶堿血藥濃度與△A的標準曲線C=1.84*△A-0.00002C單位：mg/ml,r=12第10頁/共17頁三、藥物動力學參數(shù)的計算結果作時間t-濃度C-lgC表，畫lgC

–

t圖，求算Vc、K21、K10、K12（按課本P229例1處理）。第11頁/共17頁五、討論與思考1.氨茶堿家兔體內的藥時曲線呈幾室模型，如何解釋？有幾種判斷是二室模型的方法，判斷的依據(jù)是什么？2.為什么要測定兩個波長下氨茶堿的吸光度并取其差值？第12頁/共17頁二、氨茶堿血藥濃度-時間表一、氨茶堿血藥濃度與△A的標準曲線六、參考結果：序號時間（min）不同波長下吸光度△A濃度（mg/ml）274nm298nm150.2740.1740.10.18412100.1680.0980.070.12893200.1390.0750.0640.11784300.1550.0930.0620.11415600.2630.2070.0560.103161200.1480.0920.0560.103171800.2740.1740.10.184182400.1680.0980.070.1289C單位：mg/mlC=1.84*△A-0.00002第13頁/共17頁T(min)510203060120180240C(mg/ml)1.841.291.1781.1411.0311.0311.8411.289lgC0.2650.1100.0710.0570.01330.0130.2650.110二、氨茶堿靜脈注射后時間t

–

C

-

lgC表第14頁/共17頁七、注意事項：一、注射時不宜快速注射，也不宜過多，否則會引起兔子心悸死亡。藥液注射入血管時，原來紅色的血管充滿無色的藥液則說明注射成功，若藥液未進入血管，表現(xiàn)在推注時阻力較大，且在注射部位藥液會流出。二、血液最好自然滴入EP管中，一般不宜刮取，否則血細胞將破裂，血清顏色變紅，也不要用注射器抽取、用吸管吸取。三、計算濃度時，計算出△A后，所求得的C需×10，才是真正血清中的藥物濃度，因為我們在處理樣品時稀釋10倍。四、血清樣品要放置1h以上再處理才較好，最好120

min后其充分凝結，少于1h則離心得到的是血漿，其中纖維蛋白較多，對樣品的后處理不佳。五、用注射器吸取血清0.5ml，最后一個時間點最好超過1h，否則血清中蛋白質會凝固，導致血清移取困難。第15頁/共17頁生物藥劑學與藥物動力學實驗課件七、注意事項：六、取血時不要用涼水潤濕取血部位。七、若離心用10000

r/min離心血清，當轉速顯示到達10000r/m