流式細胞術(shù)在臨床中的應用

流式細胞術(shù)20世紀60年代末發(fā)展起來的細胞定性和定量的技術(shù)。通過收集激光照射到細胞后的散射光信號和熒光信號反映細胞的物理化學特征，并且根據(jù)細胞的物理化學特征分選得到感興趣的細胞。當前1頁，總共41頁。流式細胞儀構(gòu)造模式圖液流系統(tǒng)光學系統(tǒng)電子系統(tǒng)分選系統(tǒng)當前2頁，總共41頁。細胞與分子生物學、流體力學、電磁理論和生物技術(shù)、激光技術(shù)、熒光技術(shù)、光電子技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、計算機技術(shù)、納米技術(shù)等。流式細胞術(shù)是現(xiàn)代科學技術(shù)發(fā)展的綜合交叉的產(chǎn)物，是集多種技術(shù)發(fā)展于一體的“大成者”。涉及多種學科及技術(shù)當前3頁，總共41頁。當前4頁，總共41頁。當前5頁，總共41頁。當前6頁，總共41頁。流式在腫瘤學中的應用1、JY細胞周期與DNA倍體分析標本類型：胸水和腹水血液標本組織塊標本當前7頁，總共41頁。原理細胞周期G2MG0G1s02004006008001000G0G1sG2MDNA分析細胞數(shù)量2N4N當前8頁，總共41頁。臨床意義：腫瘤的早期診斷與鑒別良惡性胸腔積液和腹水的鑒別診斷用于臨床腫瘤治療效果監(jiān)測用于臨床抗腫瘤治療時藥物的選擇用于早期淋巴瘤的診斷用于良性腫瘤與中低度惡性腫瘤的鑒別用于腫瘤患者的預后判斷當前9頁，總共41頁。流式在腫瘤學中的應用2、JY細胞凋亡分析標本類型：胸水和腹水血液標本組織塊標本當前10頁，總共41頁。原理PI-FluorescenceEvents調(diào)亡細胞正常G0/G1期細胞當前11頁，總共41頁。當前12頁，總共41頁。臨床意義：用于臨床抗腫瘤療效監(jiān)測早期凋亡細胞百分數(shù)是臨床抗腫瘤治療有效的較早期評價指標當前13頁，總共41頁。流式在腫瘤學中的應用3、JY腫瘤多藥耐藥基因CD243檢測標本類型：胸腔積液腹水組織標本貼壁培養(yǎng)細胞當前14頁，總共41頁。原理：化療藥物對腫瘤細胞的殺傷作用，依賴于進入細胞內(nèi)部的藥物濃度的高低。多藥耐藥基因-1是一種糖蛋白，編號為CD243。這種糖蛋白可以大量捕獲進入細胞內(nèi)部的化療藥物，并將其“搬出”細胞。使細胞內(nèi)部化療藥物濃度降低，造成藥物對瘤細胞的殺傷作用降低或消失，最終出現(xiàn)耐藥性現(xiàn)象。當前15頁，總共41頁。臨床意義：了解瘤細胞CD243表達水平，如果是高表達，提示化療療效可能很差，宜采取放療。如果瘤細胞CD243表達水平很低或不能檢出，化療過程中建議定期監(jiān)測瘤細胞CD243水平。輔助判斷預后。當前16頁，總共41頁。流式在免疫學中的應用4、JY淋巴細胞亞群標本類型：靜脈血臨床意義可將淋巴細胞分類為淋巴細胞（CD45high）T淋巴細胞（CD3+）B淋巴細胞(CD19+)NK淋巴細胞(CD16+CD56+)當前17頁，總共41頁。臨床意義B細胞減少見于原發(fā)及繼發(fā)性免疫功能低下、嚴重的病毒感染等情況。B細胞增高，提示機體體液免疫功能被增強，見于臨床各種細菌性感染。及B細胞白血病。NK細胞數(shù)量是腫瘤臨床病情判斷、療效監(jiān)測的指標。NK細胞減少見于腦心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、柯薩奇病毒等。當前18頁，總共41頁。流式在免疫學中的應用5、JY總T、T4、T8淋巴細胞標本類型：靜脈血當前19頁，總共41頁。臨床意義T4增高，主要見于臨床各種細菌性感染性疾病。T4降低，主要見于臨床各種病毒感染性疾病。有助于艾滋病的診斷、疾病分期判斷和療效監(jiān)測。正常人HIV感染者AIDS病人當前20頁，總共41頁。T8增高，多見于HBV、巨細胞病毒（CMV）、人類皰疹病毒（EB）及結(jié)核桿菌感染。CD8+CD38+亞群是疾病進展和病毒復制的預測指標。T8減低，多見于r免疫球蛋白缺乏癥、胸腺發(fā)育不良和糖尿病等。AIDS病人HIV感染者正常人當前21頁，總共41頁。流式在免疫學中的應用6、JY輔助性T細胞（Th）和誘導性T細胞（Ti）檢測臨床意義：Th細胞（CD4+CD29+）減少見于免疫缺陷、嚴重感染、腫瘤患者，可作為腫瘤診斷及療效監(jiān)測的指標。增多見于各種感染。Ti細胞（CD4+CD29-）具有誘發(fā)免疫應答的功能。當前22頁，總共41頁。流式在免疫學中的應用7、JY效應T細胞（Th1、Th2）檢測8、JY調(diào)節(jié)性T細胞檢測9、JY輔助性T細胞17(Th17)檢測當前23頁，總共41頁。發(fā)育分化趨化因子受體產(chǎn)生所需細胞因子和轉(zhuǎn)錄因子表達細胞因子正常免疫功能異常時發(fā)生疾病抗胞內(nèi)病原體

過高引起器官特

(病毒、細菌)免疫

異性自身免疫病初始T細胞IL-12IFN-IL-4TGF-IL-2TGF-IL-6IL-23IL-6IL-21抗原刺激后T細胞CCR7CXCR5Th1Th2TregTh17TfhIFN-IL-2LTCXCR3CCR5IL-4,5,10IL-13,25TGF-IL-35IL-10IL-17IL-21IL-22CCR4,6IL-21IL-10CXCR5免疫負調(diào)節(jié)

過高或過低與腫瘤和免疫耐受

或自身免疫病相關(guān)

抗胞外病原體

過高引起過敏性

(寄生蟲)免疫

炎癥和哮喘抗胞外細菌和

過高引起炎癥性真菌免疫和炎癥

疾病(EAE、CIA等)輔助B細胞

過高引起抗體相關(guān)產(chǎn)生抗體

自身免疫病

過低引起免疫缺陷CrTh2根據(jù)KingC(AnnuRevImmunol2008)修改Bcl-6STAT-3RORtFoxp3GATA-3STAT-6T-betCD4+T細胞亞群的分化與細胞因子的關(guān)系當前24頁，總共41頁。TH1/TH2自身免疫病參與拮抗當前25頁，總共41頁。Th1亢進Th2亢進惡性腫瘤（非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗癌、絨膜癌、腦膠質(zhì)瘤、胃癌、卵巢癌、宮頸癌、黑色素瘤、結(jié)直腸癌、淋巴瘤等）√良性腫瘤√感染寄生蟲?。ɡ猜　⑷湎x病、絲蟲病和血吸蟲病等）√真菌√病毒感染-丙肝√病毒感染-HIV√細菌感染-結(jié)核√細菌感染-麻風√自身免疫病克隆氏病、胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、自身免疫性甲狀腺炎、多發(fā)性硬化√系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫性淋巴細胞增殖綜合征(ALPS)、自身免疫性心臟病√過敏性疾?。ㄊ人嵝粤＜毎装Y反應-哮喘）√婦科-流產(chǎn)√GVHD慢性√急性√當前26頁，總共41頁。天然TREG細胞在免疫系統(tǒng)中的作用平衡狀態(tài)：既可有效清除外來病原體，又可避免過度的炎癥反應。缺乏調(diào)節(jié)性T細胞：免疫反應過度，造成自身免疫病、哮喘、過敏反應、移植排斥、流產(chǎn)等。過多的調(diào)節(jié)性T細胞：免疫反應低下，無法有效清除病原體及腫瘤，造成感染及癌癥。當前27頁，總共41頁。Th17細胞參與炎性反應和宿主抗胞外病原體反應。作為可分泌IL-17A的Th的一個亞群，Th17在自身免疫病發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。臨床意義Th17細胞釋放的IL-17可引發(fā)自身免疫性腦炎(EAE)、哮喘、類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等自身免疫性疾病。當前28頁，總共41頁。流式在細菌感染疾病中的應用10、JY中性粒細胞膜表面CD64檢測標本類型：靜脈血原理：無論胞內(nèi)或胞外細菌感染，都會引起CD64特異性增高。臨床意義：查閱中、外文獻，發(fā)現(xiàn)中性粒細胞膜表面CD64檢測與CRP、PCT、中性粒細胞計數(shù)相比，可以提高對感染和膿毒血癥的檢出率，且具有早期診斷價值，靈敏度和特異性均較高。當前29頁，總共41頁。CD64分析可以更好區(qū)分感染性與非感染性炎癥反應，診斷急性感染和全身感染的靈敏度和特異性較高門、急診患者細菌感染的篩查和預后判斷細菌性感染與非細菌性感染的鑒別診斷術(shù)后感染與應激反應的鑒別診斷感染患者的抗生素治療監(jiān)測，指導抗生素用藥當前30頁，總共41頁。流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷11、JY紅細胞表面相關(guān)免疫球蛋白（EAIg）檢測臨床意義：陽性見于臨床免疫性溶血性貧血（IHA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病。用于IHA的鑒別診斷與亞型分類用于新生兒溶血性疾病的監(jiān)測當前31頁，總共41頁。流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷12、JY粒細胞表面相關(guān)免疫球蛋白（GAIg）檢測臨床意義：用于自身免疫性白細胞減少癥的鑒別診斷與亞型分類當前32頁，總共41頁。流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷13、JY血小板表面相關(guān)免疫球蛋白（PAIg）檢測臨床意義：用于臨床特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）的篩查與診斷當前33頁，總共41頁。流式在強直性脊柱炎鑒別診斷中的應用14、JY強直性脊柱炎相關(guān)抗原HLA-B27檢測標本類型：靜脈血（2~3ml）原理：HLA-B27是脊柱關(guān)節(jié)病病因及發(fā)病機制的關(guān)鍵已經(jīng)被廣泛認同，各種假說均支持患者由于存在HLA-B27的高表達引起了體內(nèi)異常的免疫應答，從而導致了脊柱關(guān)節(jié)病的發(fā)生。臨床意義：用于強直性脊柱炎的輔助診斷與鑒別診斷用于臨床強制性脊柱炎高危人群的篩查當前34頁，總共41頁。流式在造血干細胞移植中的應用15、JY靜脈血造血干細胞計數(shù)標本類型：靜脈血2ml原理：造血干細胞表達CD34而不表達CD38，造血祖細胞既表達CD34也表達CD38。利用單克隆抗體，臨床流式技術(shù)可以很輕松對造血干細胞計數(shù)。臨床意義：用于臨床進行干細胞采集前，對捐獻者動員后外周血干細胞的動員效果進行監(jiān)測和是否實施單采的時機判斷。用于貧血的鑒別。再障屬于干細胞受累，其靜脈血中的干細胞數(shù)量明顯減少。而缺鐵性等貧血干細胞數(shù)量正常。當前35頁，總共41頁。流式在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥中的應用16、JY陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥單克隆檢測標本類型：靜脈血（2~3ml）原理：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）是一種補體介導的以血管內(nèi)溶血為主要特征的獲得性造血干細胞克隆性疾病。主要特征是血細胞膜上的錨蛋白減少甚至消失。通過測定紅細胞表面標志物CD235a、錨蛋白CD59和能與中性粒細胞膜表面錨蛋白結(jié)合的FLAER，發(fā)現(xiàn)百分之一的PNH細胞克隆，是一種非常靈敏、特異的方法。臨床意義：用于PNH的診斷與鑒別診斷用于貧血的鑒別診斷當前36頁，總共41頁。鑒別