實(shí)驗(yàn)二植物細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中染色體行為的觀察

實(shí)驗(yàn)二植物細(xì)胞有絲分裂觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)和掌握根尖細(xì)胞壓片技術(shù)2.觀察有絲分裂過(guò)程中染色體的形態(tài)特征和動(dòng)態(tài)變化二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞分裂是生物個(gè)體生長(zhǎng)和生命延續(xù)的基本特征。有絲分裂是植物個(gè)體生長(zhǎng)和分化的基礎(chǔ)，是植物細(xì)胞增殖的主要方式，在有絲分裂過(guò)程中，每次核分裂前必須進(jìn)行一次染色體的復(fù)制。在分裂時(shí)，每條染色體分裂為兩條子染色體，平均地分配給兩個(gè)子細(xì)胞，這樣就保證了每個(gè)子細(xì)胞具有與母細(xì)胞相同數(shù)量和類型的染色體。

有絲分裂期在整個(gè)細(xì)胞周期中所占的時(shí)間相對(duì)較短，有絲分裂制片的主要目的是進(jìn)行染色體鑒定，希望觀察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要對(duì)材料進(jìn)行不同的預(yù)處理。預(yù)處理主要通過(guò)抑制和破壞紡錘絲的形成來(lái)獲得更多的中期分裂相；同時(shí)，預(yù)處理還可改變細(xì)胞質(zhì)的粘度，促使染色體縮短和分散，便于壓片和觀察。常用的預(yù)處理有物理法、化學(xué)法、混合處理法等。植物細(xì)胞的細(xì)胞壁對(duì)細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)起支撐和保護(hù)作用，分生組織的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)將分生細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)整體，因此在壓片之前需要采用適當(dāng)方法軟化或部分分解細(xì)胞壁使細(xì)胞間易于分離，這一操作稱為解離。同時(shí)，解離也可適當(dāng)清除部分細(xì)胞質(zhì)，使細(xì)胞質(zhì)背景趨于透明化，便于觀察染色體。常用的解離方法主要有酸解法和酶解法。三、實(shí)驗(yàn)材料大蒜(Aillumsativum,2n=2x=16)根尖四、實(shí)驗(yàn)器具、試劑顯微鏡、小燒杯、載玻片、蓋玻片、鑷子、刀片、吸水紙0.1％秋水仙堿，或飽和對(duì)二氯苯溶液，卡諾氏固定液，改良石炭酸品紅染液，離析液五、實(shí)驗(yàn)步驟1．根尖培養(yǎng)

將大蒜置于盛清水的小燒杯口上，使根莖部與水接觸，然后轉(zhuǎn)移到25~28℃的條件下培養(yǎng)。待根尖長(zhǎng)到2cm左右時(shí)，在上午9:00~10:00剪取根尖約1cm備用。

2．預(yù)處理

將剪下的根尖立即放入0.1％秋水仙堿或飽和對(duì)二氯苯水溶液中，以藥液浸沒(méi)根尖為度，處理3~4h。抑制和破壞紡錘絲的形成，使根尖細(xì)胞延遲其染色體的分離，增加中期分裂相，并使染色體分散于細(xì)胞中，以便觀察計(jì)數(shù)。4．解離

常用酸解法：從70％乙醇中取出固定好的根尖→流水沖洗5min→吸水紙吸干→放入盛有適量離析液的小燒杯中→解離1.5min。5．沖洗、改良石炭酸品紅染色：

解離后材料水洗5min并吸干，取1個(gè)根尖的乳白色分生組織于載玻片上夾碎搗爛，滴加1~2滴染液，染色10~15min，壓片。6．壓片

在經(jīng)染色的材料上加一滴染液，蓋上蓋玻片，覆一層吸水紙，用帶橡皮頭的鉛筆垂直敲打，或以拇指垂直緊壓蓋片(注意勿使蓋片搓動(dòng))，使材料分散壓平，便于觀察。7．鏡檢

通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少數(shù)，因此壓片后要認(rèn)真仔細(xì)地進(jìn)行鏡檢。先在低倍鏡下尋找有分裂相的視野，再用高倍鏡仔細(xì)觀察、記數(shù)或拍照。調(diào)節(jié)可變光欄與反光鏡，使光線明暗合適，視場(chǎng)亮度適中。（注意觀察有絲分裂全過(guò)程的染色體形態(tài)變化，找出染色體分散好的中期細(xì)胞進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)，對(duì)好的分裂圖像作上標(biāo)記，以便再觀察。）

取材

固定

70%乙醇保存取2-3個(gè)根尖

實(shí)驗(yàn)步驟沖洗2-3次（約5min）置于離析液中離析1.5min沖洗2-3次（水中浸泡約5min）切根尖分生組織，置于載玻片上，并將