微生物平板劃線法

STEPSTEP1細菌的培養(yǎng)第一頁，共17頁。細菌的培養(yǎng)細菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細菌生長繁殖的技術(shù)。細菌在自然界中分布極廣，數(shù)量大，種類多，它可以造福人類，也可以成為致病的原因。大多數(shù)細菌可用人工方法培養(yǎng)，即將其接種于培養(yǎng)基上，使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。細菌培養(yǎng)是一個復(fù)雜的技術(shù)。第二頁，共17頁。STEPSTEP2培養(yǎng)基第三頁，共17頁。在土壤、水、食品、空氣以及人和動、植物中，不同種類的細菌混雜地生活在一起。若要研究其中某種細菌，就必須將各種細菌進行分離，以得到只含有這一種細菌的純培養(yǎng)。當細菌分離成純種后，常需要接種到有關(guān)的培養(yǎng)基中，以測試其各種生物學性狀，不同的細菌需要不同的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。第四頁，共17頁。培養(yǎng)基的種類按其物理性狀分為：

固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基

半固體培養(yǎng)基按用途分為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基第五頁，共17頁。STEPSTEP3細菌接種方法第六頁，共17頁。常見的幾種細菌的培養(yǎng)和基接種方法舉例

平板劃線接種法斜面培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法穿刺接種法菌種葡萄球菌和大腸桿菌的混合菌液大腸桿菌培養(yǎng)物大腸桿菌培養(yǎng)物枯草桿菌培養(yǎng)物變形桿菌培養(yǎng)物痢疾桿菌培養(yǎng)物培養(yǎng)基普通瓊脂平板瓊脂斜面培養(yǎng)基普通肉湯培養(yǎng)基半固體瓊脂培養(yǎng)基第七頁，共17頁。平板劃線法平板劃線法主要是借劃線而將細菌在瓊脂平板表面分散開，使單個細菌能固定在某一點，生長繁殖后形成單個的菌落從而達到分離純種的目的。常用于分離單個菌落，也可用于觀察細菌的生長狀況和觀察某些生化反應(yīng)。第八頁，共17頁。平板劃線法——接種方法（一）標記在培養(yǎng)皿底面，用記號筆注明接種的菌名、接種者姓名、日期等。

第九頁，共17頁。平板劃線法——接種方法（二）滅菌接種環(huán)點燃酒精燈，右手以持筆式握持接種環(huán)，并放置火焰中燒灼滅菌，先將接種環(huán)的接種絲部分置于火焰中，待金屬絲燒紅并蔓延至金屬端，再直接燒灼金屬環(huán)直至燒紅，然后由金屬環(huán)至金屬桿方向快速通過火焰，隨后再反方向通過火焰，如此2~3次。然后將接種環(huán)移開火焰，待其冷卻。第十頁，共17頁。平板劃線法——接種方法（三）取菌種左手持裝有金黃色葡萄球菌或大腸桿菌菌液的試管，用持有接種環(huán)的右手手掌及小指拔取試管塞，將試管管口迅速通過火焰2~3次進行滅菌。將已滅菌且已冷卻的接種環(huán)伸入菌種管中，取一接種環(huán)的菌液，然后退出菌種管，將菌種管管口及試管塞再次通過火焰2~3次滅菌，塞好試管塞，放至原來的位置。第十一頁，共17頁。平板劃線法——接種方法（四）分離劃線接種細菌（四區(qū)接種法）

（1）左手手掌持瓊脂平板培養(yǎng)基，大拇指與中指輕輕將平皿蓋子拿起，右手持接種環(huán)在瓊脂平板上端來回劃線，涂成一細菌薄膜（約占平板的1/10），視為一區(qū)。劃線時使接種環(huán)與接種平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行輕而快地來回滑動動作。

第十二頁，共17頁。平板劃線法——接種方法

（2）旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，燒灼接種環(huán)，以殺滅環(huán)上的殘留細菌，將接種環(huán)觸及培養(yǎng)基表面以使其冷卻。滅菌接種環(huán)通過薄膜處作連續(xù)平行劃線（約占平板1/5），此視為二區(qū)。第十三頁，共17頁。平板劃線法——接種方法

（3）旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，灼燒接種環(huán)滅菌并使之冷卻。將滅菌接種環(huán)接二區(qū)連續(xù)平行劃線（約占平板1/4），此為三區(qū)。（4）旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，接種環(huán)不必再滅菌，接三區(qū)連續(xù)平行劃線，劃滿平板其余部分，此視為四區(qū)。各區(qū)接種線間盡量互不交接，以達到細菌逐漸稀釋的目的。第十四頁，共17頁。平板劃線法——接種方法第十五頁，共17頁。平板劃線法——接種方法（5）劃線完畢，將瓊脂平板放進皿蓋，將培養(yǎng)皿倒放，送進37℃溫箱培養(yǎng)。（6）