分析方法驗(yàn)證

分析方法驗(yàn)證第1頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、概述1、分析方法驗(yàn)證的定義：分析方法驗(yàn)證是證明一個(gè)分析方法適合于特定產(chǎn)品的某種分析需要的過(guò)程。2、驗(yàn)證的目的：為了得到準(zhǔn)確、精密、可靠的數(shù)據(jù)。分析方法驗(yàn)證第2頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3、分析方法驗(yàn)證相關(guān)的常用指導(dǎo)原則各國(guó)藥典附錄：如USP〈1225〉方法驗(yàn)證，中國(guó)藥典2010年版二部附錄XIXA藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則。FDA：分析方法驗(yàn)證指南SFDA：化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)

指導(dǎo)原則ICH：Q2（R1）分析方法驗(yàn)證第3頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三4、適用范圍：

新建立的分析方法；分析方法出現(xiàn)變更時(shí)；采用藥典及其它法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的分析方法；藥品生產(chǎn)工藝變更，可能引入新的雜質(zhì)時(shí)。5、不適用范圍：對(duì)于僅需按照實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試操作步驟即可測(cè)定的分析項(xiàng)目不需要進(jìn)行驗(yàn)證，如外觀、崩解時(shí)限、密度、重量、pH值、干燥失重、灰分、裝量等等。

第4頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三二、分析方法驗(yàn)證過(guò)程1、準(zhǔn)備工作：人：有可以運(yùn)用該分析方法，經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的人員。儀器：有符合要求的、經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的、穩(wěn)定的儀器。驗(yàn)證方案：有經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)的該待驗(yàn)證分析方法的驗(yàn)證方案，其中有明確的職責(zé)規(guī)定，對(duì)于每一個(gè)步驟都有詳細(xì)的描述，對(duì)于每一個(gè)驗(yàn)證項(xiàng)目都有明確的可接受標(biāo)準(zhǔn)等等第5頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三樣品有質(zhì)量合格的樣品，經(jīng)過(guò)準(zhǔn)用的合適的各種對(duì)照

品。（包括工作對(duì)照品、各雜質(zhì)對(duì)照品）2、嚴(yán)格按照批準(zhǔn)的驗(yàn)證方案進(jìn)行驗(yàn)證工作。如出現(xiàn)異?；蛐柽M(jìn)行適當(dāng)調(diào)整時(shí)，應(yīng)先經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)。3、驗(yàn)證結(jié)束后：對(duì)所得圖譜和數(shù)據(jù)進(jìn)行分析評(píng)價(jià)；得出驗(yàn)證結(jié)論，出具驗(yàn)證報(bào)告。

第6頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三三、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容根據(jù)不同的分析方法的特性及用途確定不同的

驗(yàn)證項(xiàng)目和內(nèi)容。

下表所列是通常情況下不同類(lèi)型分析方法應(yīng)該

進(jìn)行驗(yàn)證的項(xiàng)目：第7頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

第8頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1、專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔

料等）可能存在的情況下，采用的分析方法能

夠正確鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。

一般方法都應(yīng)該證明它的專(zhuān)屬性。如果一個(gè)方

法的專(zhuān)屬性不強(qiáng)，應(yīng)該用其它方法進(jìn)行補(bǔ)充。第9頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

證明專(zhuān)屬性的方式有3種：（1）在雜質(zhì)可以得到的情況下，向樣品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與樣品能夠得到分離和檢出。（2）將樣品用強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿

水解及氧化的方法進(jìn)行破壞，比較破壞前后

檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量。（3）在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可

以通過(guò)與另一種已證明合理但分離或檢測(cè)原

理不同、或具較強(qiáng)分辨能力的方法進(jìn)行結(jié)果

比較來(lái)確定。第10頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2、系統(tǒng)精密度系統(tǒng)精密度是指同一個(gè)樣品溶液在連續(xù)進(jìn)樣的

情況下獲得的結(jié)果之間的接近程度。目的：證明在該分析方法的運(yùn)用上當(dāng)天儀器的

性能。（這也常是系統(tǒng)適應(yīng)性的要求之一）一般情況下，本項(xiàng)驗(yàn)證采用的樣品溶液會(huì)是100%的雜質(zhì)加標(biāo)樣品溶液。采用連續(xù)進(jìn)樣6針后得到的各雜質(zhì)及樣品的峰

面積的RSD作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。第11頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3、方法精密度方法精密度是指在同樣的操作條件下，在較短的時(shí)間間隔內(nèi)，對(duì)同一批樣品，由同一分析人員稱取數(shù)份樣品，平行測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。證明方法精密度的方式有兩種：（1）制備6份100％濃度的試樣，用各自測(cè)得的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；（2）制備3個(gè)不同濃度的試樣，用各測(cè)定3次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。第12頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

我們常用的是第1種方式。對(duì)測(cè)得的各份結(jié)果用RSD來(lái)評(píng)價(jià)。雜質(zhì)一般可接受標(biāo)準(zhǔn)為≤10.0%，含量一般可接受標(biāo)準(zhǔn)為≤2.0%（基本上和系統(tǒng)適應(yīng)性中要求一致）第13頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三4、中間精密度中間精密度是指在同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變時(shí)測(cè)定結(jié)果的接近程度。驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動(dòng)因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。中間精密度的驗(yàn)證方式及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和方法精密度完全相同。第14頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三方法精密度和中間精密度的結(jié)果之間也要有一個(gè)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：（1）各自測(cè)得結(jié)果之間的絕對(duì)差值應(yīng)符合要求，比如:含量差值≤1.0%，雜質(zhì)差值≤0.05%，殘留溶劑差值≤（濃度的25%）等。

（2）所有結(jié)果的RSD應(yīng)符合要求（與方法精密度的要求基本一致）。第15頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三5、檢測(cè)限和定量限

檢測(cè)限是指樣品中的被分析物能夠被檢測(cè)到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。檢測(cè)限是為了考察分析方法是否具備靈敏的檢測(cè)能力。定量限是指樣品中的被分析物能夠被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測(cè)能力。第16頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三當(dāng)用GC和HPLC法時(shí)，一般以信噪比為3：1時(shí)的相應(yīng)濃度作為檢測(cè)限，以信噪比為10：1時(shí)的相應(yīng)濃度作為定量限。其它方法：也可以用工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法得到檢測(cè)限和定量限。第17頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三6、線性和范圍線性是指在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（量）直接呈線性關(guān)系的程度。范圍是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量試驗(yàn)和含量測(cè)定均需驗(yàn)證線性。

第18頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三驗(yàn)證方式：可用一貯備液經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱樣，制備一系列被測(cè)物質(zhì)濃度系列進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)濃度。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)（如峰面積、吸光值等）作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，計(jì)算線性回歸方程。線性驗(yàn)證范圍：含量：80～120%

雜質(zhì)：LOQ～150%第19頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：相關(guān)系數(shù)R。如HPLC、GC色譜法：含量線性，R＞0.999

雜質(zhì)線性，R＞0.995第20頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三7、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度是指用該分析方法測(cè)得的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。用于定量測(cè)定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。證明方式：

制備3個(gè)不同濃度的樣品溶液，各測(cè)定3次，即

測(cè)定9次。（也可以3個(gè)濃度，每個(gè)濃度配制3份樣品）

第21頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一般用已知加入量的被分析物的回收率(％)作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。含量的回收率要求：98～102%；雜質(zhì)的回收率要求：80～120%；各份樣品測(cè)得回收率的RSD≤10.0%準(zhǔn)確度和精密度的作用不同。第22頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三8、耐用性耐用性是指測(cè)定條件發(fā)生小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。耐用性主要考察方法本身對(duì)于可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力，為使方法用于常規(guī)檢測(cè)提供依據(jù)。經(jīng)耐用性試驗(yàn)證明，如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫(xiě)明。第23頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性等。液相色譜法：流動(dòng)相的組成比例或pH值，不

同廠牌或不同批號(hào)的同類(lèi)型色譜柱，柱溫，流

速及檢測(cè)波長(zhǎng)等。氣相色譜法：不同廠牌或批號(hào)的色譜柱、柱溫，

進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。薄層色譜法：不同廠牌的薄層板，薄層展開(kāi)時(shí)

溫度及相對(duì)濕度的變化等第24頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

溶液穩(wěn)定性（1）用來(lái)證明根據(jù)相應(yīng)方法制備的樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液在規(guī)定的儲(chǔ)存條件下在一定時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。（2）驗(yàn)證方式：在規(guī)定條件下儲(chǔ)存適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔后檢測(cè)。含量測(cè)定：用新鮮配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液測(cè)定樣品溶液的含量，各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的RSD應(yīng)符合要求。

雜質(zhì)測(cè)定：不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的峰面積與0時(shí)相比較，偏差不得大于5%。（根據(jù)雜質(zhì)大小設(shè)定）

第25頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三以上是一般定量的分析方法在驗(yàn)證過(guò)程中都需要的驗(yàn)證項(xiàng)目。如果是HPLC、GC方法，則都還應(yīng)該有系統(tǒng)適應(yīng)性要求。當(dāng)在兩個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室之間已經(jīng)驗(yàn)證了方法的重現(xiàn)性時(shí)，可以不驗(yàn)證中間精密度。第26頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、概述1、分析方法確認(rèn)的目的：證明該分析方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性。2、分析方法確認(rèn)的范圍：（1）藥典方法；（2)其他法定方法。分析方法確認(rèn)第27頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3、不適用范圍實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試操作步驟不需要進(jìn)行方法確認(rèn)，如干燥失重、熾灼殘?jiān)?、pH值等等。4、需確認(rèn)的因素：人；設(shè)備；試劑；其它因素。第28頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三5、確認(rèn)方式:

分析方法確認(rèn)沒(méi)有固定的方案，需要根據(jù)不同的方法來(lái)確定需要確認(rèn)的內(nèi)容。如雜質(zhì)的定量測(cè)定方法：國(guó)外：專(zhuān)屬性、方法精密度、中間精密度、定量

限、檢測(cè)限、溶液穩(wěn)定性。國(guó)內(nèi)：方式1，由兩名實(shí)驗(yàn)人員分別對(duì)同一批產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，比較兩人的檢測(cè)結(jié)果。方式2，確認(rèn)專(zhuān)屬性、精密度、定量限。第29頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三強(qiáng)降解試驗(yàn)是指將原料藥置于比較強(qiáng)烈的試驗(yàn)條件下，考察其穩(wěn)定性的一系列試驗(yàn)。一般包括酸降解、堿降解、氧化、高溫、高濕、光照六個(gè)條件。在國(guó)外，這六個(gè)條件都稱為強(qiáng)降解試驗(yàn)。在國(guó)內(nèi)，前三個(gè)條件稱為強(qiáng)降解試驗(yàn)，后三個(gè)則稱為影響因素試驗(yàn)。強(qiáng)降解試驗(yàn)第30頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三強(qiáng)降解試驗(yàn)的目的：（1）通過(guò)考察藥品在一系列劇烈條件下的穩(wěn)定性，了解該藥品內(nèi)在的穩(wěn)定特性及其降解途徑與降解產(chǎn)物。為初步確定貯存條件提供依據(jù)。（2）對(duì)有關(guān)物質(zhì)分析方法用于檢查降解產(chǎn)物的專(zhuān)屬性進(jìn)行驗(yàn)證。國(guó)內(nèi)外相關(guān)的指導(dǎo)原則，均未對(duì)破壞性試驗(yàn)的具體項(xiàng)目與試驗(yàn)條件作明確的規(guī)定。第31頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三具體的降解條件：酸降解：一般選擇0.1N的鹽酸。酸液的濃度、降解的時(shí)間均可根據(jù)具體品種，在前期預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上靈活確定。堿降解：一般選擇0.1N的氫氧化鈉溶液。堿液的濃度、降解的時(shí)間均可根據(jù)具體品種，在前期預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上靈活確定。第32頁(yè)，共36頁(yè)，2023年，2月20日，星期三氧化降解：一般采用市售的雙氧水。雙氧水的濃度、降解的時(shí)間均可根據(jù)具體品種，在前期預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上靈活確定。高溫降解：根據(jù)ICH規(guī)定，結(jié)合中國(guó)藥典附錄要求，我們一般確定高溫條