微生物的分離純化和培養(yǎng)技術(shù)

微生物的分離純化和培養(yǎng)技術(shù)第1頁(yè)/共24頁(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微生物的分離純化及培養(yǎng)吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心第2頁(yè)/共24頁(yè)

分離與純化：從混雜的微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過(guò)程。為什么要進(jìn)行純培養(yǎng)：平板上的單一菌落并不一定保證是一種菌。

常用的分離、純化方法：?jiǎn)渭?xì)胞挑取法、稀釋涂布平板法稀釋混合平板法、平板劃線法

微生物的分離、純化及培養(yǎng)技術(shù)第3頁(yè)/共24頁(yè)目的要求實(shí)驗(yàn)原理微生物培養(yǎng)技術(shù)結(jié)果觀察第4頁(yè)/共24頁(yè)1

.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>

1.1

了解微生物分離和純化的原理。

1.2

掌握常用的分離純化微生物的方法。第5頁(yè)/共24頁(yè)

2

.實(shí)驗(yàn)原理:

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物分離與純化。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化。其基本原理是選擇適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求,或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)，而抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。

第6頁(yè)/共24頁(yè)

微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落，通常是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。獲取單個(gè)菌落的方法可通過(guò)稀釋涂布平板或平板劃線等技術(shù)完成。值得指出的是，從微生物群體中經(jīng)分離生長(zhǎng)在平板上的單個(gè)菌落并不一定保證是純培養(yǎng)。因此，純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列分離與純化過(guò)程和多種特征鑒定才能得到。土壤是微生物生活的大本營(yíng)，它所含微生物無(wú)論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。因此土壤是微生物多樣性的重要場(chǎng)所，是發(fā)掘微生物資源的重要基地，可以從中分離、純化得到許多有價(jià)值的菌株。本實(shí)驗(yàn)將采用不同的培養(yǎng)基從土壤中分離不同類型的微生物。第7頁(yè)/共24頁(yè)稀釋涂布平板法：步驟：1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，高氏I號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基冷卻至55-60℃時(shí)，混勻后倒平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒4皿，高氏I號(hào)培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基各倒3皿。

2、制備污水稀釋液：10g土樣，加入90ml無(wú)菌水中，在三角瓶中振搖20min。取0.5ml加入盛有4.5ml無(wú)菌水的試管中，以此類推，制成不同稀釋度。

3、涂布：將上述每種培養(yǎng)基平板底面標(biāo)記稀釋度，然后用無(wú)菌吸管從最后三種稀釋度，即10-4、10-5和10-6的試管中吸取0.1ml對(duì)號(hào)放入平板上，用玻棒涂布。

4、培養(yǎng)：高氏I號(hào)和查氏倒置培養(yǎng)于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5days，牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)1-2days。

5、挑菌落：轉(zhuǎn)至斜面，檢查是否一致，保存。第8頁(yè)/共24頁(yè)倒平板第9頁(yè)/共24頁(yè)菌懸液的配制第10頁(yè)/共24頁(yè)菌液的稀釋第11頁(yè)/共24頁(yè)接種第12頁(yè)/共24頁(yè)培養(yǎng)第13頁(yè)/共24頁(yè)微生物的純化培養(yǎng)第14頁(yè)/共24頁(yè)第15頁(yè)/共24頁(yè)

平板劃線法：

1、倒平板，標(biāo)記培養(yǎng)基名稱，編號(hào)和實(shí)驗(yàn)日期。

2、劃線方法稀釋混合平板法：1、先加菌2、倒平板時(shí)注意培養(yǎng)基溫度3、混合均勻第16頁(yè)/共24頁(yè)

微生物培養(yǎng)技術(shù)：1、斜面接種2、液體培養(yǎng)基接種3、穿刺接種

第17頁(yè)/共24頁(yè)（一）斜面接種：由已長(zhǎng)好微生物的斜面中挑取少量菌種接種至另一空白斜面培養(yǎng)基上。（1）接種前用記號(hào)筆在距試管口2~3cm位置上，注明菌名、接種日期等。（2）將試管放于手掌中，并用手指夾住，使兩支試管呈“V”字形。（3）用火焰將接種環(huán)燒紅，然后將接種環(huán)來(lái)回通過(guò)火焰數(shù)次。（4）用小指、無(wú)名指和手掌拔下試管塞，并持于手中。（5）將試管口在火焰上微燒一周。（6）將燒過(guò)的接種環(huán)伸入菌種管內(nèi)，先將環(huán)接觸一下沒(méi)有長(zhǎng)菌的培養(yǎng)基部分，使其冷卻，以免燙死菌體，然后用環(huán)在菌苔上輕輕地接觸，刮下少許培養(yǎng)物，并將接種環(huán)慢慢的從試管中抽出，并迅速地伸入另一試管中，在斜面上劃線（波浪或直線），使菌體沾附在培養(yǎng)基上。（7）將接種環(huán)抽出，灼燒管口。（8）塞上棉塞。（9）將接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌。第18頁(yè)/共24頁(yè)（二）液體接種：由斜面菌種接種在液體培養(yǎng)基中（1）接種前用記號(hào)筆在距試管口2~3cm位置上，注明菌名、接種日期等。（2）將試管放于手掌中，并用手指夾住，使兩支試管呈“V”字形。（3）用火焰將接種環(huán)燒紅，然后將接種環(huán)來(lái)回通過(guò)火焰數(shù)次。（4）用小指、無(wú)名指和手掌拔下試管塞，并持于手中。（5）將試管口在火焰上微燒一周。（6）參照?qǐng)D（7-1）（7）將接種環(huán)抽出，灼燒管口。（8）塞上棉塞。（9）將接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌。

第19頁(yè)/共24頁(yè)（三）穿刺接種：這是常用來(lái)接種厭氧菌，檢查細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性，或保藏菌種的一種接種方法，接種工具用接種針。（1）接種前用記號(hào)筆在距試管口2~3cm位置上，注明菌名、接種日期等。（2）將試管放于手掌中，并用手指夾住，使兩支試管呈“V”字形。（3）用火焰將接種環(huán)燒紅，然后將接種環(huán)來(lái)回通過(guò)火焰數(shù)次。（4）用小指、無(wú)名指和手掌拔下試管塞，并持于手中。（5）將試管口在火焰上微燒一周。（6）參照?qǐng)D（7-1）（7）將接種環(huán)抽出，灼燒管口。（8）塞上棉塞。（9）將接種環(huán)經(jīng)火焰灼燒滅菌。第20頁(yè)/共24頁(yè)

將已接種的斜面、半固體和液體培養(yǎng)基放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)將生長(zhǎng)好的菌種用牛皮紙包好，置4℃冰箱中保存。第21頁(yè)/共24頁(yè)第22頁(yè)/共24頁(yè)

結(jié)果與觀察：1.檢查接種后培養(yǎng)物的生長(zhǎng)情況和染菌