DB23T 2605-2020化學(xué)誘導(dǎo)玉米單倍體技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20B05黑龍DB23江省地方標(biāo)準(zhǔn)DBT0黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T2605-2020前言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009編寫規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院耕作栽培研究所、黑龍江榮玉農(nóng)業(yè)科技有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：宮秀杰、來永才、錢春榮、于洋、馬寶新、馬延華、李梁、郝玉波、李昕、王俊強(qiáng)、王秋菊、姜輝、何長(zhǎng)安、姜宇博、呂國(guó)依、葛選良、楊忠良、馬軍韜、趙楊、王陽、童淑媛、杜振宇、孫丹、侯國(guó)強(qiáng)、孟凡迪。1DB23/T2605-2020化學(xué)誘導(dǎo)玉米單倍體技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)誘導(dǎo)玉米單倍體技術(shù)的術(shù)語和定義、材料和備品、誘導(dǎo)處理、誘導(dǎo)后代種植和田間調(diào)查、誘導(dǎo)率統(tǒng)計(jì)及注意事項(xiàng)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于化學(xué)誘導(dǎo)玉米單倍體技術(shù)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。DB23/T017玉米生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程DB62/T1060農(nóng)作物種子生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程玉米自交系3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1Pa1代化學(xué)誘導(dǎo)孤雌生殖獲得的籽粒及其生長(zhǎng)植株(不包括后代籽粒)。3.2Pa2代Pa1經(jīng)自交結(jié)實(shí)后的籽粒及生長(zhǎng)植株(不包含后代籽粒)。4材料和備品4.1實(shí)驗(yàn)材料和備品準(zhǔn)備500ml燒杯、玻璃棒、100ml容量瓶、25ml量筒、封口瓶、廢液缸、試劑匙、移液管、0.001g天平、猴頭噴霧器、蒸餾水、無水乙醇(EA)。剪刀、膠皮手套、一次性口罩、眼罩、白大褂、硫酸紙、小硫酸紙袋、大硫酸紙袋大頭針、標(biāo)簽、記號(hào)筆、棉花、鑷子、網(wǎng)袋。4.2誘導(dǎo)材料準(zhǔn)備4.2.1誘導(dǎo)材料選擇符合育種目標(biāo)的玉米優(yōu)良雜合種質(zhì)或遺傳背景廣泛的群體材料。4.2.2化學(xué)試劑誘導(dǎo)試劑包括：二甲基亞砜(DMSO)、馬來酰肼(MH)、秋水仙堿(Col)、甲醇(MT)。2DB23/T2605-2020配制方法：取70mgMH加入燒杯，再加入70mlMT，充分?jǐn)嚢?。待MH完全溶解后，加入0.1mlDMSO、1.0gCol和500ml蒸餾水，攪拌，轉(zhuǎn)移入1000ml容量瓶中，定容至1000ml。放置安全處待用。4.2.3誘導(dǎo)材料種植及田間管理選擇地勢(shì)平坦、肥水一致、排灌方便地塊，每份被誘導(dǎo)材料種植不少于100株。田間管理參照DB23/T017執(zhí)行。5誘導(dǎo)處理5.1誘導(dǎo)時(shí)期和誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)材料雌穗吐絲3cm~5cm時(shí)。5.1.2誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)材料雌穗吐絲前，用硫酸紙袋將雌穗罩上，去除雌穗。誘導(dǎo)處理時(shí)間選擇在清晨4:00-7:30，操作人員須用75%乙醇將手和剪刀消毒，用剪刀將被誘導(dǎo)材料雌穗頂端剪平，然后用手再修出一個(gè)凹槽，用猴頭噴霧器噴施化學(xué)藥劑，每穗噴施化學(xué)藥劑2ml，噴施后迅速罩上硫酸紙袋，然后再罩上一個(gè)大硫酸紙袋，用大頭針固定，掛標(biāo)簽，標(biāo)記噴施藥劑日期。間隔3天后再噴施一次，噴施方法同上。記錄化學(xué)藥劑處理的果穗數(shù)量。5.2誘導(dǎo)材料的收獲籽粒成熟及時(shí)收獲，單穗分裝編號(hào)，待干燥后，脫粒。記錄每個(gè)果穗雌穗小花數(shù)和結(jié)實(shí)數(shù)。6誘導(dǎo)后代種植和田間調(diào)查6.1Pa1種植和田間調(diào)查選擇地勢(shì)平坦、肥水均一、病蟲害發(fā)生低、排灌方便地塊種植。收獲的Pa1種子全部播種，人工單粒播種，播深3cm~5cm，播后鎮(zhèn)壓，單株插牌標(biāo)記。6.1.2Pa1田間管理采用人工除草，禁止使用化學(xué)藥劑除草。其它田間管理方法參照DB23/T017執(zhí)行。6.1.3Pa1田間調(diào)查6.1.3.1Pa1苗期調(diào)查調(diào)查未出苗、白化苗和早夭幼苗數(shù)量。6.1.3.2Pa1花期調(diào)查調(diào)查雄穗育性、雌穗育性和雌雄開花間隔時(shí)間。6.1.4Pa1自交授粉DB23/T2605-2020雌穗吐絲前用硫酸紙袋將雌穗罩上，對(duì)雌雄穗外觀正常、花期相遇的植株進(jìn)行自交授粉。授粉方法參照DB62/T1060執(zhí)行。6.1.5Pa1收獲單穗收獲并編號(hào)。6.2Pa2種植及田間調(diào)查6.2.1Pa2種植按穗行種植。穗行插牌標(biāo)記，種植方式同6.1.1。6.2.2Pa2田間管理田間管理方法參照DB23/T017執(zhí)行。6.2.3Pa2田間調(diào)查6.2.3.1Pa2苗期調(diào)查調(diào)查幼苗色、莖色澤及葉色，進(jìn)行一致性調(diào)查。6.2.3.2Pa2花期調(diào)查調(diào)查株型、雄穗分枝、雌穗花絲顏色、株高、穗位、抽穗期、吐絲期。6.2.4Pa2自交授粉田間所有植株均進(jìn)行自交授粉，授粉方法參照DB62/T1060執(zhí)行。6.2.5Pa2收獲記錄成熟期，同一穗行植株表現(xiàn)整齊一致，所有性狀無分離，即認(rèn)為是純合二倍體。同一穗行性狀有分離的，則淘汰。按穗行收獲，并編號(hào)。7誘導(dǎo)率統(tǒng)計(jì)式中：M1為誘導(dǎo)材料結(jié)實(shí)率；Gi為Pa1結(jié)實(shí)粒數(shù)；Ei為處理雌穗小花數(shù)；式中：M2為誘導(dǎo)材料誘導(dǎo)率；Ri為Pa2純合穗行數(shù)；Ei為處理雌穗小花數(shù)；128注意事項(xiàng)4DB23/