實(shí)驗(yàn)果蠅唾腺染色體

實(shí)驗(yàn)果蠅唾腺染色體1第1頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四果蠅的染色體2第2頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四唾腺染色體3第3頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察果蠅的唾腺染色體形態(tài)特征；2.練習(xí)果蠅幼蟲(chóng)唾腺分離技術(shù)；3.掌握果蠅唾腺染色體的制片方法。4第4頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四二、實(shí)驗(yàn)材料果蠅三齡幼蟲(chóng)越肥越好：多加酵母膏，低溫18℃培養(yǎng)5第5頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四三、儀器藥品解剖鏡顯微鏡鑷子、解剖針載玻片、蓋玻片吸水紙生理鹽水(0.7)、1mol/L鹽酸、改良苯酚品紅6第6頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四四、原理果蠅幼蟲(chóng)期唾腺的細(xì)胞核非常大，唾腺染色體比其他細(xì)胞染色體大200多倍。它們是通過(guò)核內(nèi)有絲分裂形成的多線染色體，是由于重復(fù)分裂后的眾多染色線沒(méi)有分開(kāi)的結(jié)果，一條染色體內(nèi)含有染色體線多達(dá)千條以上。一般來(lái)說(shuō)，多線染色體是處于永久性前期中的一種體細(xì)胞染色體配對(duì)形式。它普遍存在于雙翅目昆蟲(chóng)某些物種的幼蟲(chóng)唾腺細(xì)胞內(nèi)，是研究唾腺染色體常用的材料。7第7頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四四、原理果蠅的體細(xì)胞中有4對(duì)染色體。果蠅（三齡）幼蟲(chóng)唾腺細(xì)胞的染色體叫做唾腺染色體。這種染色體比正常的處于有絲分裂期的染色體大得多，因而又稱為巨大（多線）染色體。巨大染色體上有許多橫紋，這些模紋的數(shù)目和位置是相對(duì)恒定的。由于果蠅唾腺細(xì)胞中的同源染色體兩兩配對(duì)時(shí)總是緊密結(jié)合在一起，當(dāng)其中一條染色體發(fā)生結(jié)構(gòu)變異時(shí)，就很容易被識(shí)別出來(lái)。因此，果蠅唾腺染色體是觀察染色體形態(tài)、研究染色體結(jié)構(gòu)變異的好材料。8第8頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四四、原理通常認(rèn)為果蠅唾腺染色體處于體細(xì)胞同源染色體的配對(duì)狀態(tài)，所以染色體看上去只有半數(shù)(n)。它們的巨大性是染色體多次復(fù)制而不分開(kāi)的結(jié)果。每條染色體大約有1000～4000條復(fù)制成的染色體細(xì)絲組成，因而又叫做多線染色體。9第9頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四果蠅唾腺染色體果蠅唾腺染色體10第10頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四果蠅唾腺染色體11第11頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟1.選取三齡幼蟲(chóng)2.拉唾腺3.低滲水解4.染色5.壓片6.鏡檢7.永久片的制作12第12頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟1、辨別頭尾選取肥大的果蠅三齡幼蟲(chóng)作為實(shí)驗(yàn)材料。在一塊潔凈的載玻片的中央滴一滴0.75%的NaCl溶液，將爬到瓶壁上的肥大并行動(dòng)遲緩的三齡幼蟲(chóng)放在載玻片上的NaCl溶液中，在放大鏡下辨認(rèn)幼蟲(chóng)的頭部和尾部，可以看到幼蟲(chóng)的頭部有一個(gè)小黑點(diǎn)（神經(jīng)節(jié)）。13第13頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟14第14頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟2、幼蟲(chóng)的解剖將幼蟲(chóng)置于生理鹽水內(nèi)，一手（左手）持解剖針按住幼蟲(chóng)末端的1/3處，以固定幼蟲(chóng)。另一手（右手）持針撳住幼蟲(chóng)頭部正中，用力向前拉，把頭部從身體拉開(kāi)，腺體即隨之而出。如果頭部被拉斷，腺體沒(méi)有拉出，可以用右手持解剖針從左手的解剖針附近的腹部緩緩向頭部擠壓，這樣也可以壓出唾液腺。唾腺為半透明的小囊狀，低倍鏡下為兩層規(guī)則排列的細(xì)胞組成。其上附有白色的脂肪帶，食道兩側(cè)各有一個(gè)。找到唾腺后盡可能把腺體上的脂肪剔除。15第15頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟16第16頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟17第17頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟

解剖針解剖針18第18頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟19第19頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟3、染色前處理清除殘?bào)w，使載片上只留下唾腺。4、低滲處理往唾液腺上滴一滴0.4%的NaCl溶液，低滲處理2min，使唾液腺膨脹。5、水解用小片吸水紙吸除水分及破碎組織（當(dāng)心切勿將唾液腺吸走）在唾液腺上滴兩滴7%的鹽酸（1mol/LHCl），水解2min（不超過(guò)3min）。然后用清水反復(fù)滴洗幾次,洗去鹽酸（一邊滴清水，一邊用吸水紙從材料旁邊吸水），再用吸水紙吸干周圍的水分。20第20頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟21第21頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟加入鹽酸后的唾腺22第22頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟6、染色滴上幾滴改良苯酚品紅于唾腺上，染色8~12分鐘。7、壓片在載片上加蓋玻片，蓋片上覆蓋一吸水紙，然后以母指適當(dāng)用力壓片，要求將唾腺細(xì)胞核壓破，染色體伸展開(kāi)來(lái)而不破碎為好。23第23頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟8、顯微鏡下觀察壓好的玻片標(biāo)本，用顯微鏡可以看到四對(duì)染色體，第一對(duì)染色體（X-）組成一個(gè)長(zhǎng)條，第二和第三對(duì)各自組成了具有左右兩臂的染色體對(duì)，它們都以中部的著絲區(qū)聚集，而第四對(duì)染色體很小，分布在著絲區(qū)呈點(diǎn)狀或盤狀。這樣，從壓好的較為模式的片子中便可看到五條彎曲展開(kāi)的染色體臂（X-、ⅡL、ⅡR、ⅢL、ⅢR），和一個(gè)點(diǎn)狀的第四染色體對(duì)，它們?cè)谥z區(qū)構(gòu)成染色中心并向四周伸開(kāi)。24第24頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四果蠅唾腺染色體25第25頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四果蠅唾腺染色體果蠅唾腺染色體26第26頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟9、永久片的制作（方法一）（1）使蓋片向下放入盛有45%醋酸+95%酒精（1:1）的培養(yǎng)皿中。一端墊上一玻棒，使玻片稍為傾斜，約過(guò)5~10分鐘，可見(jiàn)蓋片與載片分離。用鑷子輕輕取出蓋片于吸水紙上。（2）有材料的一面向上，放入盛有95%酒精+叔丁醇（1:1）的培養(yǎng)皿中三分鐘。（3）換入純叔丁醇中三分鐘。（4）用中性樹(shù)膠封片。27第27頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四五、實(shí)驗(yàn)步驟9、永久片的制作（方法二）依此將具有叫好圖象的片子移入下列染色缸中：Carnoy固定液（在固定液中的時(shí)間以蓋片脫下為標(biāo)準(zhǔn)）100%乙醇，1min100%乙醇，1min二甲苯，5min加一滴加拿大樹(shù)膠封片，封膠干后觀察，貼上標(biāo)簽。28第28頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四六、注意事項(xiàng)1.在整個(gè)裝片制作過(guò)程中應(yīng)防止唾液腺干燥（加生理鹽水，但不可太多，否則幼蟲(chóng)會(huì)漂浮而且活躍，吸水時(shí)勿將唾腺一起吸走）。2.為了得到更好的染色體標(biāo)本，應(yīng)在20~25℃和營(yíng)養(yǎng)良好的條件下飼養(yǎng)果蠅，這樣可以得到較大的幼蟲(chóng)。3.染色時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)，否則背景也著色。4.染色完以后，將舊的染色液吸去，加新的染色液，再壓片。5.用搖蚊幼蟲(chóng)（即魚(yú)餌紅蟲(chóng)子）可以代替果蠅三齡幼蟲(chóng)做實(shí)驗(yàn)材料。29第29頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告繪出你所觀察到的唾腺和唾腺染色體圖像，注意繪出唾腺細(xì)胞排列及唾腺染色體顯示的明暗帶。30第30頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四八、思考題唾腺染色體有哪些特點(diǎn)？為什么選用三齡蟲(chóng)？試分析。31第31頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四唾腺染色體唾腺染色體salivaryglandchromosomealivarychromosome雙翅類昆蟲(chóng)唾腺細(xì)胞的間期核中所看到的巨型染色體。E.G.Balbiani（1881）首次看到了它的帶狀結(jié)構(gòu)，但到后來(lái)，E.Heitz和H.Bauer（1933）以及T.S.Parnter（1933）才指出它在細(xì)胞學(xué)上的意義。小知識(shí)32第32頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期四唾腺染色體唾腺染色體的顯著特征是：（1）形狀為帶狀，寬達(dá)5毫微米，長(zhǎng)達(dá)400毫微米它相當(dāng)于普通染色體的100～150倍；（2）核不分裂，由于染色體不斷復(fù)制，形成了多線性染色體，寬度增加，同時(shí)長(zhǎng)度也增加，成為巨型染色體；（3）帶的全長(zhǎng)幾乎都有明顯的嗜堿性的橫紋，橫紋的寬度有大