酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品農(nóng)藥殘留檢測課件

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測食品農(nóng)藥殘留

成員：霍利婷黃橋姜帥李文劉朋孔祥斌

民以食為天，隨著經(jīng)濟的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們對食品的質(zhì)量安全要求也逐漸提高。隨著全球經(jīng)濟一體化發(fā)展和貿(mào)易國際化，食品安全問題已延伸為全球性公共問題。尤其是近年來，食品安全事件大量發(fā)生，嚴(yán)重影響了大眾對社會的看法。所以，綜合考慮食品對經(jīng)濟效益和社會效應(yīng)的影響，如何確保食品的安全性成為食品行業(yè)面臨的重要課題。藥物殘留分析從20世紀(jì)50年代就開始應(yīng)用,至今經(jīng)歷了氣相色譜法、高效液相色譜法、高效薄層色譜法、超臨界流體色譜法、毛細(xì)管區(qū)域電泳法和免疫分析法。藥物殘留分析是復(fù)雜的混合物中痕量組分的分析技術(shù),既需要精細(xì)的微量操作手段,又需要高靈敏度的痕量檢測技術(shù),難度大、儀器化程度和分析成本高,為藥物殘留分析帶來一定難度。隨著科技的發(fā)展,更多的新技術(shù)和方法也將應(yīng)用于生產(chǎn)實踐,如生物傳感器方法和熒光免疫法,納米科技、遠(yuǎn)紅外和中紅外也將應(yīng)用于藥物殘留的檢測中。但所有的這些方法都需要有精密的大型儀器,只能適合于中心實驗室或作為確證。因此,在生產(chǎn)中靈敏、準(zhǔn)確、簡便、快速的ELISA檢測方法倍受青睞。1

ELISA測定原理

抗原抗體的特異免疫反應(yīng)待測抗原(抗體)的定量與有色產(chǎn)物量成正比可借助吸光度值計算抗原(抗體)的量在上述反應(yīng)中,酶促反應(yīng)只進行一次,而抗原-抗體的免疫反應(yīng)可進行一次或多次。方法

間接法測定抗原和雙抗體夾心法測抗原這兩種方法主要用于測定抗體和大分子抗原,通常用于臨床診斷,而競爭法測抗原是測定小分子抗原的方法,適用于食品安全的檢測。由于食品安全檢測需測定的物質(zhì)大都是低分子量的,但免疫動物產(chǎn)生抗體的抗原分子量要大(至少50000Da)。因此,本文采用競爭法測農(nóng)藥殘留所制備的抗原。抗原制備農(nóng)藥屬于小分子物質(zhì)，是一種半抗原，無免疫原性。檢測時首先要根據(jù)農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)選擇合成路線，人工合成抗原。通過DNA重組技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)可以快速有效篩選具有高度免疫性的重組抗原，從而擴大ELISA檢測范圍。ELISA檢測（競爭法測抗原）結(jié)果預(yù)測

空白陽性待測顯色—++注：“+”無色或極淺；“—”深色。討論樣品中的抗原和酶標(biāo)抗原可競爭與固相抗體結(jié)合,待測樣品中抗原含量越高,則與固相抗體結(jié)合的越多,使得酶標(biāo)抗原與固相抗體結(jié)合的機會就越少,甚至沒有機會結(jié)合,這樣加入底物后就不顯色或顯色很淺為陽性,顯色深者為陰性[8]。ELISA與其他技術(shù)相比,具有靈敏度高,特異性強,儀器設(shè)備要求不高,測定成本低,方法快速、簡便,試劑保存時間較長,自動化程度高,無放射性同位素污染等優(yōu)勢;但同時也存在局限性,比如不能同時分析多種成分,對試劑的選擇性高,對結(jié)構(gòu)類似的化合物有一定程度的交叉反應(yīng)。所以未來的發(fā)展趨勢就在于開發(fā)高度免疫原性的重組抗原,研究多項標(biāo)記快速測定方法,將酶體外定向進化應(yīng)用到檢測中以及研發(fā)種類更多的全自動酶聯(lián)免疫測定儀這樣將擴大檢測的范圍,提高檢測