細(xì)胞生物學(xué)課件第三章細(xì)胞技術(shù)詳解

細(xì)胞生物學(xué)課件第三章細(xì)胞技術(shù)詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有88頁\編輯于星期三優(yōu)選細(xì)胞生物學(xué)課件第三章細(xì)胞技術(shù)現(xiàn)在是2頁\一共有88頁\編輯于星期三第一節(jié)顯微技術(shù)光學(xué)顯微鏡：以可見光（或紫外線）為光源。電子顯微鏡：以電子束為光源?，F(xiàn)在是3頁\一共有88頁\編輯于星期三—、光學(xué)顯微鏡現(xiàn)在是4頁\一共有88頁\編輯于星期三1.構(gòu)成：①照明系統(tǒng)②光學(xué)放大系統(tǒng)③機(jī)械裝置2.原理：經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成像。（一）普通光學(xué)顯微鏡現(xiàn)在是5頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是6頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是7頁\一共有88頁\編輯于星期三3.分辨力：指分辨物體最小間隔的能力。R=0.61λ/N．A．其中λ為入射光線波長；N．A．為鏡口率

＝ｎsinα/2，n=介質(zhì)折射率；α=鏡口角（樣品對(duì)物鏡鏡口的張角）。如何提高顯微鏡的分辨能力？現(xiàn)在是8頁\一共有88頁\編輯于星期三表一、幾種介質(zhì)的折射率現(xiàn)在是9頁\一共有88頁\編輯于星期三顯微鏡的幾個(gè)光學(xué)特點(diǎn)：制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為1.65~1.78，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。sinα/2的最大值必然小于1；介質(zhì)為空氣，鏡口率一般為0.05~0.95；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可接近1.5。普通光線的波長為400~700nm，分辨力數(shù)值不會(huì)小于0.2μm，人眼的分辨力為0.2mm,因此顯微鏡的最大設(shè)計(jì)倍數(shù)為1000X?，F(xiàn)在是10頁\一共有88頁\編輯于星期三（二）熒光顯微鏡Fluorescencemicroscope特點(diǎn)：光源為紫外線，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；有兩個(gè)特殊的濾光片；照明方式通常為落射式?，F(xiàn)在是11頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是12頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是13頁\一共有88頁\編輯于星期三Fluorescenceimageofepithelialcell(上皮細(xì)胞),DNAinblueandMicrotubulesingreen用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。現(xiàn)在是14頁\一共有88頁\編輯于星期三微管呈綠色、微絲紅色、核藍(lán)色現(xiàn)在是15頁\一共有88頁\編輯于星期三（三）激光共聚焦掃描顯微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描。能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像?，F(xiàn)在是16頁\一共有88頁\編輯于星期三LCSM現(xiàn)在是17頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是18頁\一共有88頁\編輯于星期三microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)現(xiàn)在是19頁\一共有88頁\編輯于星期三聚光鏡中央有擋光片，照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡。因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的?？捎^察4~200nm的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高50倍?，F(xiàn)在是20頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是21頁\一共有88頁\編輯于星期三把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處。環(huán)形光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間，使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標(biāo)本上。相位板（annularphaseplate）：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。（五）相差顯微鏡現(xiàn)在是22頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是23頁\一共有88頁\編輯于星期三用途：觀察未經(jīng)染色的玻片標(biāo)本現(xiàn)在是24頁\一共有88頁\編輯于星期三（六）偏光顯微鏡polarizingmicroscope用于檢測具有雙折射性的物質(zhì)，如纖維絲、紡錘體、膠原、染色體等。光源前有偏振片（起偏器），使進(jìn)入顯微鏡的光線為偏振光，鏡筒中有檢偏器（與起偏器方向垂直的偏振片）。載物臺(tái)是可以旋轉(zhuǎn)。淀粉現(xiàn)在是25頁\一共有88頁\編輯于星期三（七）微分干涉差顯微鏡Differentialinterferencecontrastmicroscope（DIC）1952年，Nomarski發(fā)明，利用兩組平面偏振光的干涉，加強(qiáng)影像的明暗效果，能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影。標(biāo)本可略厚一點(diǎn)，折射率差別更大，故影像的立體感更強(qiáng)。現(xiàn)在是26頁\一共有88頁\編輯于星期三物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺(tái)之下，后者在載物臺(tái)之上，用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，通常具有相差物鏡，有的還具有熒光裝置。

現(xiàn)在是27頁\一共有88頁\編輯于星期三（九）比較顯微鏡屬特種顯微鏡：用一組目鏡同時(shí)觀察到左右兩個(gè)光學(xué)系統(tǒng)物方物體的像。并通過對(duì)接、切割、重疊、旋轉(zhuǎn)等手段，對(duì)兩個(gè)或兩個(gè)以上物體進(jìn)行宏觀或微觀上的比較，以檢查、分析和鑒別它們的微小差別：形式、組織、結(jié)構(gòu)、色彩或材料。

簡單的比較顯微鏡可由兩臺(tái)普通顯微鏡加一個(gè)可共享兩臺(tái)顯微鏡物鏡的目鏡系統(tǒng)（比較橋）組成。

專業(yè)的比較顯微鏡采用一體化結(jié)構(gòu)，光學(xué)系統(tǒng)、載物臺(tái)等依照特殊需求進(jìn)行專門設(shè)計(jì)，功能十分強(qiáng)大?，F(xiàn)在是28頁\一共有88頁\編輯于星期三比較顯微鏡是刑偵技術(shù)、檢察技術(shù)和法醫(yī)鑒定的主要科學(xué)技術(shù)手段之一，在比較顯微鏡里，一顆子彈的兩截可以在同樣的鏡頭下連成一體，使得觀察者可以借兩者的異?？拷鼇肀容^分析每顆子彈上的痕跡。近年來在化學(xué)、物理、冶金、醫(yī)藥、材料、環(huán)境、微電子研究等方面也有廣泛應(yīng)用。

現(xiàn)在是29頁\一共有88頁\編輯于星期三（十）當(dāng)代顯微鏡的發(fā)展趨勢組合模式：集普通光鏡加相差、熒光、暗視野、DIC、攝影裝置于一體。自動(dòng)化與電子化。現(xiàn)在是30頁\一共有88頁\編輯于星期三

明暗偏現(xiàn)在是31頁\一共有88頁\編輯于星期三二、電子顯微鏡（一）透射電子顯微鏡transmissionelectronmicroscope,TEM現(xiàn)在是32頁\一共有88頁\編輯于星期三以電子束作光源，電磁場作透鏡。電子束的波長短，并且波長與加速電壓(通常50~120KV)的平方根成反比。由電子照明系統(tǒng)、電磁透鏡成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)、電源系統(tǒng)等5部分構(gòu)成。分辨力0.2nm，放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍。用于觀察超微結(jié)構(gòu)（ultrastructure），即小于0.2μm、光學(xué)顯微鏡下無法看清的結(jié)構(gòu)，又稱亞顯微結(jié)構(gòu)（submicroscopicstructures）。1.原理現(xiàn)在是33頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是34頁\一共有88頁\編輯于星期三透射電子顯微鏡TRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPE，TEM現(xiàn)在是35頁\一共有88頁\編輯于星期三表二、不同光線的波長現(xiàn)在是36頁\一共有88頁\編輯于星期三2、制樣技術(shù)1）超薄切片電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機(jī)（ultramicrotome）制作。通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級(jí)脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色?，F(xiàn)在是37頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是38頁\一共有88頁\編輯于星期三2）負(fù)染技術(shù)用重金屬鹽(如磷鎢酸)對(duì)鋪展在載網(wǎng)上的樣品染色；吸去染料，干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸的出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)1.5nm左右。NegativeStainedActin肌動(dòng)蛋白纖維的負(fù)染電鏡照片現(xiàn)在是39頁\一共有88頁\編輯于星期三3）冰凍蝕刻freeze-etching亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，即為復(fù)膜（replica）。AYeastCell現(xiàn)在是40頁\一共有88頁\編輯于星期三20世紀(jì)60年代問世，用來觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu)。分辨力為6~10nm，由于人眼的分辨力（區(qū)別熒光屏上距離最近兩個(gè)光點(diǎn)的能力）為0.2mm，掃描電鏡的有效放大倍率為0.2mm/10nm=20000X。（二）掃描電子顯微鏡現(xiàn)在是41頁\一共有88頁\編輯于星期三Scanningelectronmicroscope（SEM）現(xiàn)在是42頁\一共有88頁\編輯于星期三工作原理：用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級(jí)電子，次級(jí)電子的多少與樣品表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級(jí)電子由探測器收集，信號(hào)經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束的強(qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。為了使標(biāo)本表面發(fā)射出次級(jí)電子，標(biāo)本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬膜，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級(jí)電子信號(hào)?，F(xiàn)在是43頁\一共有88頁\編輯于星期三掃描電子顯微鏡原理現(xiàn)在是44頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是45頁\一共有88頁\編輯于星期三酵母細(xì)胞現(xiàn)在是46頁\一共有88頁\編輯于星期三（三）掃描隧道顯微鏡

scanningtunnelingmicroscope，STM原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計(jì)，當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個(gè)納米的高度上掃描樣品時(shí)，此處電子云重疊，外加一電壓（2mV~2V），針尖與樣品之間形成隧道電流。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài)。分辨率：橫向?yàn)?.1~0.2nm，縱向可達(dá)0.001nm。用途：三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察?，F(xiàn)在是47頁\一共有88頁\編輯于星期三掃描隧道顯微鏡原理現(xiàn)在是48頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是49頁\一共有88頁\編輯于星期三STMimage,BenzenemoleculesaccumulateatstepedgesonCu現(xiàn)在是50頁\一共有88頁\編輯于星期三三、顯微操作技術(shù)

micromanipulationtechnique在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法。顯微操作器是用以控制顯微注射針在顯微鏡視野內(nèi)移動(dòng)的機(jī)械裝置。顯微操作技術(shù)包括細(xì)胞核移植、顯微注射、嵌合體技術(shù)、胚胎移植以及顯微切割等。細(xì)胞核移植技術(shù)已有幾十年的歷史，Gurdon等人（1962）對(duì)非洲爪蟾進(jìn)行核移植獲得成功。我國著名學(xué)者童第周等上個(gè)世紀(jì)70年代在魚類細(xì)胞核移植方面進(jìn)行了許多工作，并取得了豐碩成果?，F(xiàn)在是51頁\一共有88頁\編輯于星期三顯微操作儀現(xiàn)在是52頁\一共有88頁\編輯于星期三第二節(jié)生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)一、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)現(xiàn)在是53頁\一共有88頁\編輯于星期三組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法（histochemicalandcytochemicalstainingmethod）用于對(duì)某些細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究。（一）固定物理固定：血膜空氣快速干燥、冷凍干燥?；瘜W(xué)固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑。顯示多糖常用乙醇固定，顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定。現(xiàn)在是54頁\一共有88頁\編輯于星期三（二）顯示方法金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應(yīng)產(chǎn)物最終生成CoS或PbS有色沉淀，而顯示出酶活性。Schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色。用于顯示糖和脫氧核糖核酸（Feulgen反應(yīng)）。聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化酶分解H202。產(chǎn)生新生氧，后者再將無色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變成棕色化合物。脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì)?，F(xiàn)在是55頁\一共有88頁\編輯于星期三二、免疫細(xì)胞化學(xué)根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù)。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。免疫熒光法（immunofluorescenttechnique）：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。酶標(biāo)免疫法（enzyme-labeledantibodymethod）：常用的酶有辣根過氧化物酶，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。現(xiàn)在是56頁\一共有88頁\編輯于星期三三、顯微光譜分析技術(shù)細(xì)胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線?？衫蔑@微分光光度計(jì)對(duì)某些成分進(jìn)行定位、定性和定量測定?，F(xiàn)在是57頁\一共有88頁\編輯于星期三四、放射自顯影術(shù)用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時(shí)間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。一般用14C和3H標(biāo)記。常用3H-TDR來顯示DNA，用3H-UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。14C半衰期為5730年，3H為12.5年。現(xiàn)在是58頁\一共有88頁\編輯于星期三五、分子雜交技術(shù)具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合和堿基配對(duì)，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA雜交的雙鏈分子?？捎脕頊y定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系。（一）原位雜交（insituhybridization）。用于檢測染色體上的特殊DNA序列。最初是使用帶放射性的DNA探針，后來發(fā)明了免疫探針法?，F(xiàn)在是59頁\一共有88頁\編輯于星期三（二）Southern雜交是體外分析特異DNA序列的方法，操作時(shí)先用限制性內(nèi)切酶將核DNA或線粒體DNA切成DNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用探針雜交，通過放射自顯影，即可辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列。將RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上，用探針雜交，則稱為Northern雜交?，F(xiàn)在是60頁\一共有88頁\編輯于星期三EdwinSouthern1975年發(fā)明核酸雜交技術(shù)（Southernblot）。

隨后，人們將RNA和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上的技術(shù)分別命名為Northernblot和Westernblot。

90年代初，Southern和他的科研團(tuán)隊(duì)在DNA芯片方面的工作：開發(fā)了在固相的玻璃表面合成特定核苷酸短序列的方法，為DNA及RNA雜交的熒光檢測鋪平了道路。這項(xiàng)技術(shù)和先進(jìn)的工藝相結(jié)合，最終產(chǎn)生了DNA芯片。

現(xiàn)在是61頁\一共有88頁\編輯于星期三六、PCR技術(shù)PCR即：polymerasechainreaction。反應(yīng)體系：①樣品DNA；②引物（primer），約15-20個(gè)核苷酸；③4種dNTP；④TagDNA聚合酶，來自于嗜熱水生菌Thermusaquaticus，最適作用溫度75~80℃，短時(shí)間在95℃下不失活。⑤緩沖體系和Mg2+。反應(yīng)過程：①變性：約90-95℃；②復(fù)性：約60℃左右；③延伸：70-75℃；④重復(fù)“變性——復(fù)性——延伸”過程20-30次循環(huán)?，F(xiàn)在是62頁\一共有88頁\編輯于星期三PCR原理現(xiàn)在是63頁\一共有88頁\編輯于星期三第三節(jié)細(xì)胞分離技術(shù)現(xiàn)在是64頁\一共有88頁\編輯于星期三一、離心技術(shù)離心是分離細(xì)胞器（如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體）及各種大分子基本手段。高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速為10~25kr/min。超速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速>25kr/min，離心力>89Kｇ者。目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min，離心力超過500Kg?，F(xiàn)在是65頁\一共有88頁\編輯于星期三（一）差速離心Differentialcentrifugation特點(diǎn)：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級(jí)離心。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核—線粒體—溶酶體與過氧化物酶體—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體—核蛋白體?？蓪⒓?xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化。現(xiàn)在是66頁\一共有88頁\編輯于星期三LowspeedHighspeedDifferentialcentrifugation現(xiàn)在是67頁\一共有88頁\編輯于星期三（二）密度梯度離心用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過離心力場的作用使細(xì)胞分層、分離。類型：速度沉降、等密度沉降。常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時(shí)，粘度不高；2）PH中性或易調(diào)為中性；3）濃度大時(shí)滲透壓不大；4）對(duì)細(xì)胞無毒。現(xiàn)在是68頁\一共有88頁\編輯于星期三1、速度沉降velocitysedimentation

用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。特點(diǎn)：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度。原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離。現(xiàn)在是69頁\一共有88頁\編輯于星期三2.等密度沉降isopycnicsedimentation用途：分離密度不等的顆粒。特點(diǎn)：介質(zhì)密度較高，陡度大，介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度。所需的力場通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離?，F(xiàn)在是70頁\一共有88頁\編輯于星期三Velocity(A)andEquilibrium(B)sedimentation現(xiàn)在是71頁\一共有88頁\編輯于星期三二、流式細(xì)胞術(shù)用途：對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選。原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個(gè)細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，這些熒光信號(hào)的強(qiáng)度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，

經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，送入計(jì)算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%。流式細(xì)胞儀作為一種先進(jìn)的細(xì)胞定量分析檢測儀器，設(shè)計(jì)上采用了許多獨(dú)特的技術(shù)，其中涉及到液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、信號(hào)測量和細(xì)胞分選等4個(gè)方面?，F(xiàn)在是72頁\一共有88頁\編輯于星期三現(xiàn)在是73頁\一共有88頁\編輯于星期三細(xì)胞的分選通過分離含有單細(xì)胞的液滴而實(shí)現(xiàn)的。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測定細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。

現(xiàn)在是74頁\一共有88頁\編輯于星期三應(yīng)用范圍

用于白血病的分型、腫瘤細(xì)胞染色體的異倍性測定，以及免疫學(xué)研究，并已開始用于細(xì)菌鑒定，病毒感染細(xì)胞的識(shí)別和愛滋病感染者T4、T8細(xì)胞的記數(shù)。

70年代以來，隨著流式細(xì)胞技術(shù)水平的不斷提高，其應(yīng)用范圍也日益廣泛。流式細(xì)胞術(shù)已普遍應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

現(xiàn)在是75頁\一共有88頁\編輯于星期三三、細(xì)胞電泳原理：在一定pH值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電荷，能在外加電場的作用下發(fā)生泳動(dòng)。各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量有所不同，故在一定的電場中的泳動(dòng)速度不同。用途：檢測細(xì)胞生理狀態(tài)和病理狀態(tài)、分離不同種類的細(xì)胞，如分離哺乳動(dòng)物的X和Y精子?，F(xiàn)在是76頁\一共有88頁\編輯于星期三第四節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交一、細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)在是77頁\一共有88頁\編輯于星期三（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)群體培養(yǎng)（massculture）：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長，匯合（confluence）后形成均勻的單細(xì)胞層；克隆培養(yǎng)（clonalculture）：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液，細(xì)胞貼壁生長，每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落，稱為克隆。轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法：為制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計(jì)，大容量旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，使培養(yǎng)的細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài)之中。

現(xiàn)在是78頁\一共有88頁\編輯于星期三原代培養(yǎng)（primaryculture）：培養(yǎng)直接來自動(dòng)物機(jī)體的細(xì)胞群。將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶稱為傳代或傳代培養(yǎng)（Passage）。細(xì)胞株（cellstrain）：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。細(xì)胞系（cellline）：從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，可無限繁殖。克隆（clone）：亦稱無性系。指由同一個(gè)祖先細(xì)胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群?，F(xiàn)在是79頁\一共有88頁\編輯于星期三表三、實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞HenriettaLacks

BHK21成纖維細(xì)胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細(xì)胞袋鼠L6成肌細(xì)胞大鼠PCI2嗜鉻細(xì)胞大鼠SP2漿細(xì)胞小鼠SP2／0骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠CHO卵巢細(xì)胞中國地鼠**HenriettaLacks,Americanblack,diedofcancerofuterinecervixin1951

現(xiàn)在是80頁\一共有88頁\編輯于星期三（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)：①比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如DNA；②便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞；