動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程

其它動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體

學(xué)習(xí)目標(biāo)：【知識(shí)能力】1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程、條件及應(yīng)用2、應(yīng)用細(xì)胞的基礎(chǔ)知識(shí)，分析細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)

【情感態(tài)度與價(jià)值觀】1、討論細(xì)胞工程技術(shù)的社會(huì)意義2、認(rèn)同細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)理論研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)之間的關(guān)系

重點(diǎn)難點(diǎn)【重點(diǎn)】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程及條件。用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過(guò)程?！倦y點(diǎn)】用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆動(dòng)物的過(guò)程。

–思考與回憶：1、動(dòng)物細(xì)胞全能性特點(diǎn)？

隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄。細(xì)胞核仍具有全能性。

2、能否用植物組織培養(yǎng)的方法使動(dòng)物細(xì)胞發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體？

不能。動(dòng)物細(xì)胞和組織在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，伴隨一定的組織分化，不管采用什么手段和培養(yǎng)條件，由于細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、變化，細(xì)胞發(fā)生結(jié)構(gòu)功能變異，結(jié)果長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)只能使單一類(lèi)型的細(xì)胞保存下來(lái)，最終成了簡(jiǎn)單的細(xì)胞培養(yǎng)。

3、動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)的理論依據(jù)(原理)?細(xì)胞增殖

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念：1、概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物有機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖.

2、原理：細(xì)胞增殖

(一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程操作流程

胰蛋白酶

原代

傳代

強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞貼壁過(guò)程細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱(chēng)為細(xì)胞貼壁。

培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無(wú)毒、易于帖附。

強(qiáng)調(diào)二：接觸抑制■當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制。

強(qiáng)調(diào)三：原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)

原代培養(yǎng)人們通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。

傳代培養(yǎng)當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞處于接觸抑制后,用胰蛋白酶處理,使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來(lái),然后加入新的培養(yǎng)液,將細(xì)胞分離稀釋,并從原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),這個(gè)過(guò)程稱(chēng)傳代培養(yǎng).(分瓶培養(yǎng)的過(guò)程)

強(qiáng)調(diào)四：細(xì)胞系、細(xì)胞株細(xì)胞株：能夠傳代到40-50代的細(xì)胞，叫細(xì)胞株。遺傳物質(zhì)一般不會(huì)發(fā)生改變細(xì)胞系：當(dāng)細(xì)胞株細(xì)胞傳到50代以后一般不能再傳下去，部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，能連續(xù)傳代，獲得不死性，叫細(xì)胞系。

動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官剪碎用胰蛋白酶處理為什么用胰蛋白酶處理？單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋原代培養(yǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁、配置細(xì)胞懸液原代接觸抑制轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶遺

細(xì)培傳胞養(yǎng)物株分瓶傳代培養(yǎng)

總結(jié)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程

傳代10代以?xún)?nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。

傳代10-50代左右，增長(zhǎng)緩慢以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化(遺傳物質(zhì)可能改變)40-50代細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。

10代細(xì)胞

傳代培養(yǎng)

質(zhì)：未一改般變說(shuō)

無(wú)限傳代

已遺細(xì)改傳胞變物系質(zhì)：

【易誤警示】①動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中兩次用到胰蛋白酶，第一次用胰蛋白酶處理剪碎的組織使之分散成單個(gè)細(xì)胞，第二次使貼壁細(xì)胞從瓶壁上脫落下來(lái)。②原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的分界點(diǎn)為分瓶的繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件:1)無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境：

首先對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無(wú)菌處理；通常培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過(guò)程中污染；此外定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。液體合成培養(yǎng)基：(葡萄糖、氨基酸)、促生長(zhǎng)因子、(水、無(wú)機(jī)鹽、微量元素)等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。

2)營(yíng)養(yǎng)：

3)溫度和pH:適宜的溫度：人和哺乳動(dòng)物最適溫度為36.50.5℃。適宜的酸堿度：PH:7.2-7.4

4)氣體環(huán)境：“95%空氣+5%CO2”的混合氣體培養(yǎng)箱。氧氣是細(xì)胞代謝必須的；CO2維持培養(yǎng)液的PH。

問(wèn)題1:、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？

因?yàn)槠浼?xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)，分化程度低。問(wèn)題2、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？

擴(kuò)大細(xì)胞與培養(yǎng)液的接觸面積，利與細(xì)胞吸收營(yíng)養(yǎng)。問(wèn)題3:為什么用胰蛋白酶處理？

動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，胰蛋白酶處理動(dòng)物組織，可以使動(dòng)物組織細(xì)胞間的蛋白質(zhì)和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個(gè)細(xì)胞。問(wèn)題4:為什么用胰蛋白酶處理而不用胃蛋白酶？

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的最適PH值為7.2-7.4,胰蛋白酶作用的適宜PH為7.2-8.4,胃蛋白酶適宜PH為2.胃蛋白酶在PH為7.2-7.4的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中無(wú)活性。問(wèn)題5:用胰蛋白酶處理不會(huì)把所培養(yǎng)的細(xì)胞消化掉嗎？

控制好時(shí)間！長(zhǎng)時(shí)間處理當(dāng)然會(huì)損傷細(xì)胞。

問(wèn)題6、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？主要成分：(葡萄糖、氨基酸)、(水、無(wú)機(jī)鹽)、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等問(wèn)題7、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體

細(xì)胞增殖。問(wèn)題8、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理：?jiǎn)栴}

9、目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常在10代以?xún)?nèi)，為什么？

10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。

(三).動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:1.蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)

如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2.應(yīng)用于基因工程

主要用于作為受體細(xì)胞3.檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性4.細(xì)胞的生理、藥理、病理研究如用于篩選抗癌藥物

植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較：比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞增殖細(xì)胞的全能性原理固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)蔗糖植物激素培養(yǎng)基特有成分植物體培養(yǎng)結(jié)果快速繁殖、培育培養(yǎng)目的