食品微生物實驗室CNCA檢測能力驗證分析,微生物論文

食品微生物實驗室CNCA檢測能力驗證分析,微生物論文能力驗證是評價實驗室技術(shù)能力的有效手段，是實驗室通過外部措施對其內(nèi)部質(zhì)量控制方式方法的一種重要補充手段[1-2].參加能力驗證，通過對其結(jié)果的總結(jié)分析，采取糾正和預(yù)防措施，能最有效地消除偏差，提高檢驗人員檢測水平，保證檢測數(shù)據(jù)到達檢驗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3].2020年11月本中心微生物實驗室參加了中國國家認證認可監(jiān)督管理委員會〔CNCA〕組織的CNCA-13-B09食品微生物學(xué)檢測能力驗證。2020年4月收到CNCA能力驗證合格證書，所有檢測項目結(jié)果均為滿意。1材料與方式方法1.1樣品來源及勻液的制備能力驗證樣品由中國檢驗檢疫科學(xué)研究院提供。4種樣品分別對應(yīng)4個檢測項目，4份樣品均為白色凍干粉末，標(biāo)識分別為：13-W737菌落總數(shù)、13-X557沙門氏菌、13-Y189副溶血性弧菌定性、13-Z001副溶血性弧菌定量。根據(jù)參試指導(dǎo)書講明，將凍干粉末稀釋再水化成為40mL樣品。1.2試劑平板計數(shù)瓊脂、BPW、TTB、SC、BS、3%NaCl堿性蛋白胨水、NaCl胰胨水購自北京陸橋生物技術(shù)公司。沙門顯色培養(yǎng)基及弧菌顯色培養(yǎng)基購自鄭州博賽科瑪嘉。三糖鐵瓊脂為英國OXOID公司產(chǎn)品，沙門氏菌診斷血清為丹麥SSI公司產(chǎn)品。1.3檢測根據(jù)菌落總數(shù)檢測根據(jù)GB4789.2-2018;沙門氏菌檢測根據(jù)GB4789.4-2018;副溶血性弧菌定性及定量檢測根據(jù)GB/T4789.7-2008.1.4質(zhì)控菌株腸炎沙門氏菌ATCC14208、副溶血性弧菌ATCC27519均由北京市疾病預(yù)防控制中心提供。1.513-W737菌落總數(shù)的檢測將樣品勻液10倍系列稀釋至10-4,每個稀釋度分別接種兩塊平皿，每皿1ml,同時用生理鹽水做空白對照；注入平板計數(shù)瓊脂15~20ml,36℃培養(yǎng)48h.挑取菌落數(shù)在30CFU-300CFU之間的平板，計數(shù)菌落總數(shù)。1.613-X557沙門氏菌檢測將樣品勻液劃線接種到BS及沙門顯色培養(yǎng)基上。同時取25ml樣品參加到225mlBPW,36℃培養(yǎng)18h;取1ml增菌BPW分別接種于10mlTTB及10mlSC增菌液，培養(yǎng)后分別劃線接種BS及沙門顯色培養(yǎng)基，挑取可疑菌落進行鑒定。1.713-Y189副溶血性弧菌定性檢測將樣品勻液劃線接種弧菌顯色培養(yǎng)基。同時取25ml樣品參加到225ml3%NaCl堿性蛋白胨水，36℃培養(yǎng)18h;劃線接種弧菌顯色培養(yǎng)基，挑取可疑菌落進行鑒定。1.813-Z001副溶血性弧菌定量檢測取25ml樣品參加到225ml3%NaCl堿性蛋白胨水中，將該1:10勻液10倍系列稀釋至10-3,將每個稀釋度勻液分別接種3支含9ml3%NaCl堿性蛋白胨水的試管，每管接種1ml,3個稀釋度樣品接種量分別為0.1ml、0.01ml、0.001ml,36℃培養(yǎng)18h.每管增菌液分別劃線接種弧菌顯色培養(yǎng)基，挑取可疑菌落進行鑒定。2結(jié)果2.113-W737菌落總數(shù)13-W737樣品各稀釋度平皿菌落總數(shù)〔表1〕.選取菌落數(shù)在30CFU~300CFU之間、無蔓延菌落生長的10-2稀釋度的平板計數(shù)菌落總數(shù)。樣品13-W737菌落總數(shù)報告為12000CFU/ml.【1】2.213-X557沙門氏菌檢測樣品直接劃線接種及經(jīng)前增菌-增菌培養(yǎng)后劃線接種BS及沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)，挑取可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂。對可疑沙門氏菌三糖反響的菌落進行生化及血清學(xué)鑒定。經(jīng)VITEK2生化鑒定出一株沙門氏菌，血清學(xué)結(jié)果為：A-S多價+,O4+,O12+,Hi+,H1,2+.根據(jù)生化和血清學(xué)結(jié)果，該樣品檢測結(jié)果報告為檢出鼠傷寒沙門氏菌。2.313-Y189副溶血性弧菌定性檢測樣品直接劃線接種及經(jīng)增菌培養(yǎng)后劃線接種弧菌顯色培養(yǎng)基，經(jīng)36℃培養(yǎng)18h后，無典型副溶血性弧菌菌落生長。結(jié)果斷定為未檢出副溶血性弧菌。2.413-Z001副溶血性弧菌定量檢測13-Z001樣品3個稀釋度9支3%NaCl堿性蛋白胨水增菌液生長情況及后續(xù)目的菌分離及鑒定情況〔表2〕.經(jīng)各項試驗證實，9支增菌液中有2支為副溶血性弧菌陽性，其樣品接種量均為0.1ml.查MPN檢索表，該樣品副溶血性弧菌定量檢測結(jié)果為9.2MPN/ml.【2】2.5CNCA能力驗證結(jié)果評價CNCA對能力驗證結(jié)果進行了評價，所有項目檢測結(jié)果均為滿意〔表3〕.【3】3討論能力驗證及其他室間比對實驗是評價實驗室技術(shù)能力的重要手段[3-5].實驗室每年參加CNCA組織的能力驗證[6],并以此結(jié)果作為重要的外部質(zhì)量評價活動，對實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制方式方法的有效性進行判定和監(jiān)控。菌落總數(shù)計數(shù)樣品10倍遞增稀釋時，要多做幾個稀釋度勻液，以便選擇適宜的稀釋度進行計數(shù)。13-W737菌落總數(shù)在計數(shù)時發(fā)現(xiàn)，平板計數(shù)瓊脂上有兩種大小形態(tài)不同的菌落。在燈光下仔細觀察發(fā)如今一些較大菌落上往往有透光性較差的小菌落生長，兩種菌落的特殊形態(tài)特征及重疊生長增加了菌落計數(shù)的難度，如有不慎可能造成計數(shù)結(jié)果的不準(zhǔn)確。除此之外，影響菌落總數(shù)計數(shù)結(jié)果的因素還有樣品勻液的制備、稀釋液、計數(shù)瓊脂、培養(yǎng)溫度等[7-8].必須在各個環(huán)節(jié)做好嚴(yán)格的質(zhì)控，才能保證計數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確[9].根據(jù)國標(biāo)沙門氏菌檢驗程序，SC增菌后，用XLD、HE或顯色培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。有研究表示清楚[10],在沙門氏菌的分離培養(yǎng)方面，沙門顯色培養(yǎng)基的敏感性和特異性都明顯高于其他兩種分離培養(yǎng)基。因而，能力驗證使用顯色培養(yǎng)基對沙門菌進行分離培養(yǎng)。由于沙門氏菌抗原構(gòu)造復(fù)雜，其H抗原常存在自然變異或構(gòu)造受損現(xiàn)象[11].加熱、乙醇處理、枯燥、冷凍等因素都可能使沙門氏菌的鞭毛構(gòu)造受損，導(dǎo)致抗原性減弱，進而增加誤檢、漏檢情況的發(fā)生[12].因而，在增菌前，用BPW對樣品進行前增菌特別必要，能讓沙門氏菌受損的生物性狀得到恢復(fù)[13].在進行血清學(xué)H抗原鑒定時，多數(shù)可疑菌落僅鑒定出第一相H抗原，通過廣泛的血清學(xué)鑒定，僅在一株可疑菌中檢出H抗原第二相，據(jù)此，完成完好的沙門菌血清鑒定?？梢?，對于雙相H抗原沙門氏菌，要多挑取可疑菌落進行血清學(xué)試驗，增加雙相抗原檢出幾率，避免進行繁瑣的位相變異試驗。在進行副溶血性弧菌定量檢測時，9支增菌試管均顯示有生長。分離培養(yǎng)后，樣品接種量0.1ml的3支試管所對應(yīng)的弧菌顯色培養(yǎng)基有可疑菌落〔紫紅色〕生長，在每塊顯色平板上挑取多個可疑菌落進行鑒定。經(jīng)鑒定，第1和第2支試管中檢出副溶血性弧菌，除此之外，第2和第3支試管中還檢出溫和氣單胞菌。由于溫和氣單胞菌和副溶血性弧菌在弧菌顯色培養(yǎng)基上菌落顏色類似，且三糖鐵反響類似，因此增加了能力驗證的難度。由于科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基操作簡便，結(jié)果易于觀察，靈敏度和特異性高，廣泛用于日常檢測。但其也存在一定的假陽性率，某些氣單胞菌和假單胞菌可出現(xiàn)假陽性[14-15].因而，需多挑取可疑菌落進行鑒定，防止漏檢，保證定量檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。CNCA能力驗證對實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制方式方法的有效性進行了確認，同時，對于檢測人員技術(shù)水平的提高和質(zhì)量管理體系的不斷完善起到積極作用。以下為參考文獻[1]席靜，張思群，劉靜宇，等.論能力驗證活動對實驗室能力建設(shè)的作用和意義[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2018,21〔6〕:1576-1578.[2]中國合格評定國家認可委員會.CNASRL02能力驗證規(guī)則[S].2018.[3]王宏明.微生物檢驗技術(shù)操作規(guī)程與質(zhì)量控制及檢測數(shù)據(jù)分析處理實用手冊[M].北京：衛(wèi)生科技出版社，2007.[4]茹慧萍，張雪琴，孟麗，等.實驗室質(zhì)控在食源性疾病控制中的作用[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2020,23〔1〕:91-92.[5]蔣衛(wèi)平.做好室間微生物檢測能力比對的幾個關(guān)鍵點[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2020,24〔5〕:104-105.[6]吉彥莉，郭勇峰，王敬輝，等.CNCA-12-A01食品微生物學(xué)能力驗證結(jié)果分析[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2020,24〔4〕:100-101.[7]林彩華，許如蘇.菌落總數(shù)檢