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本文格式為Word版,下載可任意編輯——HE染色不同試劑和方法
HE染色1和HE染色2是使用了不同的蘇木精配方進行的染色。
兩種配方和染色步驟如下。
一、HE染色1
試劑:
Carazzi蘇木素染液:蘇木精0.5g;甘油100mL;硫酸鋁鉀25g;蒸餾水400mL;碘化鉀0.1g。將蘇木素溶于甘油,硫酸鋁鉀溶于300ml的蒸餾水中攪拌至完全溶解,混合兩液,將碘化鉀溶于剩余的100mL蒸餾水,加溫到溶解后,混合于上述的混合液中,攪拌均勻,過濾后即可使用,染色時間10min左右。
伊紅染液:儲液:取1g伊紅,溶于100mL95%的乙醇,待溶解完全后加幾滴冰醋酸至染液呈半透明狀,避光保存?zhèn)溆?。工作液:取一定量的伊紅儲液,參與等量70%乙醇,此液即為伊紅染液的工作液。
染色步驟:
(1)細(xì)胞爬片放用PBS漂洗3次,每次5min,無水乙醇固定5min,風(fēng)干。
(2)95%乙醇1min,75%乙醇1min,三蒸水1min。
(3)Carazzi蘇木素染色15min,水洗至藍。
(4)1%鹽酸酒精分色3-4s,PBS漂洗3次,每次5min。
(5)伊紅染液5min,流水漂洗15min左右。
(6)風(fēng)干,中性樹膠封片后倒置顯微鏡下觀測,拍照。
二、HE染色2
試劑:
蘇木素染液:蘇木精1g;無水乙醇25mL;硫酸鋁鉀10g;蒸餾水350mL;碘酸鉀0.1g;冰醋酸10mL。A液:用25mL無水乙醇溶解1g蘇木精,搖動即可溶解。B液:用350mL蒸餾水溶解10g硫酸鋁鉀,搖動或振蕩即可溶解。把
A液和B液混合,參與碘酸鉀搖動至顏色加深。最終參與10mL冰醋酸,搖動顏色變?yōu)樯钇咸丫萍t色。染液配制當(dāng)日即可應(yīng)用于染色。酸化液:醋酸20-35mL加蒸餾水至700mL。
伊紅染液:儲液:取1g伊紅,溶于100mL95%的乙醇,待溶解完全后加幾滴冰醋酸至染液呈半透明狀,避光保存?zhèn)溆谩9ぷ饕海喝∫欢康囊良t儲液,參與等量70%乙醇,此液即為伊紅染液的工作液。
染色步驟:
(1)細(xì)胞爬片放用PBS漂洗3次,每次5min,無水乙醇固定5min,風(fēng)干。
(2)95%乙醇1min,75%乙醇1min,三蒸水1min。
(3)浸洗5%的醋酸液(酸化液)數(shù)秒。
(4)蘇木精染液3~5min,胞核呈橙紅色。
(5)自來水沖洗至顏色變藍。
(6)鹽酸乙醇液分化數(shù)秒,顏色再次返紅。
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