真菌檢驗送檢

真菌檢驗送檢第1頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一侵襲性真菌病臨床實驗室診斷操作規(guī)范本標準依據(jù)GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草本標準由衛(wèi)生部臨床檢驗標準專業(yè)委員會提出本標準起草單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、北京大學(xué)第一醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院。本標準起草人：徐英春、李若瑜、章強強、王瑤、王賀、余進、郭莉娜、張麗、范欣。第2頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一侵襲性真菌病臨床實驗室診斷操作規(guī)范概述本標準規(guī)定了侵襲性真菌病臨床實驗室診斷操作規(guī)范、包括標本采集處理、形態(tài)檢查、培養(yǎng)檢查、真菌培養(yǎng)鑒定、非培養(yǎng)診斷方法和藥物敏感試驗。本標準適用于具有∥級生物安全防護能力的臨床實驗室。第3頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一術(shù)語和定義第4頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一1.侵襲性真菌病IFD

指真菌侵入人體組織、血液，并在其中生長繁殖所致組織損害、器官功能障礙、炎癥反應(yīng)的病理改變及病理生理過程。根據(jù)患者宿主因素、臨床特征和微生物學(xué)檢查、將IFD診斷分為確診(proven)、擬診(probable)和疑似(possible)。第5頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一2.最小抑菌濃度MIC

按照標準操作規(guī)程進行體外真菌稀釋法或連續(xù)濃度梯度稀釋法藥物敏感性試驗時，在特定培養(yǎng)時間及溫度的條件下，能導(dǎo)致特定程度肉眼可見真菌生長抑制的最低藥物濃度。

第6頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一3.劑量依賴敏感S-DD給予高于常規(guī)給藥劑量，且達到最大血藥濃度時，臨床有效。4.最低有效濃度MEC指曲霉在含系列濃度的棘白菌素類藥物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，與生長對照孔中的菌絲形態(tài)相比，菌絲變短、變圓、變粗的最低藥物濃度。第7頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一5.折點breakpoint臨床上能抗菌藥物對真菌分為敏感、耐藥、中介或劑量依賴敏感的特定MIC值。折點系綜合體外的MIC值、耐藥機制、抗菌藥物PK/PD參數(shù)及臨床療效而得出，還可能隨環(huán)境改變而改變（如感染部位、常規(guī)給藥劑量的改變、給藥途徑及頻次的改變）。第8頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一6.消化液lysissolution粘液溶解作用，用于呼吸道標本等的前處理，常用N-乙酰-L-半胱氨酸、5%草酸或二巰基蘇糖醇等。第9頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一標本采集及處理第10頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一采集部位消毒一步法：葡萄糖酸氯己啶作用30s，或70%異丙醇消毒后自然干燥。

三步法：(1)70%乙醇擦拭靜脈穿刺部位，作用30s以上、待干；(2)1%-2%碘酊從穿刺點向外畫圈消毒至消毒區(qū)域直徑>3cm，作用30s或10%碘伏作用60s；(3)70%乙醇脫碘：對碘過敏者，用70%乙醇消毒60s，待乙醇揮發(fā)干燥、采集標本。第11頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一血液標本采集推薦在抗真菌藥物使用前，發(fā)熱初期或寒顫期、采靜脈血或骨髓液。立即注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)并輕輕搖勻。至少采集2套。標本與培養(yǎng)基比例為1/10-1/5（成人每瓶8-10ml）、必須包括需氧瓶或真菌瓶。第12頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一血液標本處理2h內(nèi)常溫送檢。若不能及時送檢，則常溫保存。2h內(nèi)常溫送檢不能送檢時，常溫保存第13頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一評估導(dǎo)管相關(guān)性血流感染（CRBSI）如患者已拔管，應(yīng)采集2套外周血進行培養(yǎng)，同時做導(dǎo)管尖Maki法半定量培養(yǎng)（導(dǎo)管尖長5cm），如1套及以上外周血培養(yǎng)陽性，導(dǎo)管尖培養(yǎng)陽性（≥15CFU），且血培養(yǎng)與導(dǎo)管尖培養(yǎng)菌種相同，即為CRBSI。如患者尚未拔管，應(yīng)至少采集1套外周血培養(yǎng)，同時盡快采集等量的導(dǎo)管血進行培養(yǎng)，如導(dǎo)管血與外周血培養(yǎng)均陽性，導(dǎo)管血陽性時間比外周血早2h，或?qū)Ч苎芯繛橥庵苎芯?倍以上，且沒有其它明確感染源，即為CRBSI；如導(dǎo)管血培養(yǎng)陰性，外周血培養(yǎng)陽性且為念珠菌屬，且沒有其它明確感染源，也可能為CRBSI。第14頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一骨髓標本采集使用肝素化的注射器或溶解離心管采集骨髓液0.5ml（兒童）至3ml（成人）后送檢。一次性骨穿包骨穿操作采集足量骨髓液送檢第15頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一骨髓標本處理15分鐘內(nèi)常溫送檢。若不能及時送檢，則常溫保存。不建議常規(guī)做骨髓液培養(yǎng)，如需培養(yǎng)可將骨髓液接種于培養(yǎng)瓶，但易出現(xiàn)假陽性。骨髓液需同時做吉姆薩染色鏡檢。15分鐘內(nèi)常溫送檢骨髓涂片（吉姆薩染色鏡檢）第16頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一靜脈導(dǎo)管標本采集剪取導(dǎo)管尖段5cm置于無菌容器中送檢。導(dǎo)管尖段5cm無菌容器送檢第17頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一靜脈導(dǎo)管標本處理一15分鐘內(nèi)常溫送檢。若不能及時送檢，則4°C保存。

15分鐘內(nèi)常溫送檢4°C保存第18頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一靜脈導(dǎo)管標本處理二將導(dǎo)管置于血平板上，使用無菌鑷子將其從平板一端滾動至另一端，滾動4次，做導(dǎo)管尖Maki法半定量培養(yǎng)。不要使用含放線菌酮的培養(yǎng)基。第19頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一無菌體液

（腦脊液、心包液、腹水和關(guān)節(jié)液）標本采集除腦脊液外，將其余的無菌體液置于含肝素的無菌真空采血管。腦脊液使用脊髓穿刺針采取后送檢。第20頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一無菌體液

（腦脊液、心包液、腹水和關(guān)節(jié)液）標本處理一15分鐘內(nèi)常溫送檢。若不能及時送檢，則常溫保存（不能冷藏）。

15min內(nèi)常溫送檢不能送檢時，常溫保存第21頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一標本大于2ml，則2000g離心10分鐘，取沉渣接種。若標本量少于2ml，則將標本直接接種于培養(yǎng)基。推薦使用細胞離心機對無菌體液進行涂片鏡檢。腦脊液可直接接種于血培養(yǎng)瓶。無菌體液

（腦脊液、心包液、腹水和關(guān)節(jié)液）標本處理二離心10min接種培養(yǎng)涂片鏡檢第22頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一膿液、引流液、創(chuàng)面分泌物及竇道標本采集開放性創(chuàng)口：用無菌生理鹽水沖洗創(chuàng)面后，應(yīng)采集病灶活動性邊緣組織標本。封閉性膿腫：局部皮膚消毒后用注射器抽取膿血性液體送檢。第23頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一膿液、引流液、創(chuàng)面分泌物及竇道標本處理2h內(nèi)常溫送檢。將標本直接接種于培養(yǎng)基。較濃稠的標本需使用消化液處理。2h內(nèi)常溫送檢直接接種于培養(yǎng)皿第24頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一下呼吸道標本

（深部痰液、支氣管吸取物、肺泡灌洗液）標本采集清潔口腔后采集清晨第一口痰液。采用外科方法進行支氣管毛刷取樣和采集肺泡灌洗液。唾液或24h痰液都不能用來進行真菌培養(yǎng)。第25頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一下呼吸道標本

（深部痰液、支氣管吸取物、肺泡灌洗液）標本處理2h內(nèi)室溫送檢；若不能及時送檢，則4°C保存。將標本接種至含抗生素的選擇培養(yǎng)基中。較黏稠的下呼吸道標本需要使用消化液處理，并2000g離心10分鐘后取沉渣接種。2h內(nèi)常溫送檢4°C保存第26頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一眼（角膜刮片、玻璃體液等）標本采集及處理角膜刮片或針吸玻璃體液。15分鐘內(nèi)常溫送檢。若不能及時送檢，則常溫保存。角膜刮片直接接種至不含抑制劑的培養(yǎng)皿中，采用X或C型涂菌方式，玻璃體液離心后取沉淀物接種。15min內(nèi)常溫送檢不含抑制劑的培養(yǎng)皿接種培養(yǎng)第27頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一組織標本采集、處理采集標本后用無菌容器轉(zhuǎn)運，如標本量較少，需滴加幾滴無菌鹽水保濕。

及時送檢，否則室溫保存。采用滅菌眼科剪將組織標本剪成米粒大小后接種培養(yǎng)；若可疑組織胞漿菌感染、研磨組織并培養(yǎng)，或采用裂解離心技術(shù)處理。若可疑接合菌感染、直接接種不研磨組織。直接鏡檢需研磨組織，但會影響絲狀真菌培養(yǎng)陽性率。建議病理科與檢驗科聯(lián)合檢查組織標本。組織標本最好接種到包含抗生素和血培養(yǎng)基中。

第28頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一尿液標本采集、處理采集早晨第一次清潔尿液、恥骨上聯(lián)合穿刺尿液或?qū)Ч苣蛞?0-50ml，不要采用24h尿液。2h內(nèi)常溫送檢；若不能及時送檢，則4°C保存。尿液接種前需要2000g離心10分鐘，取沉渣進行鏡檢和接種。尿液真菌培養(yǎng)不推薦定量檢測。

第29頁，共30頁，2023年，2月20日，星期一判定不合格標本a)標本標識與申請單不符，標識錯誤或沒有標識；

b)