高中生物-基因工程的基本操作程序教學(xué)課件設(shè)計

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品正在漸漸走進(jìn)我們的生活日照海邊的夜色會自己發(fā)光的轉(zhuǎn)基因樹第二節(jié)

基因工程的基本操作程序一、獲取目的基因發(fā)光基因大腸桿菌基因組文庫部分基因文庫基因文庫一、獲取目的基因方法一：從基因文庫中獲取方法二：利用PCR技術(shù)擴增發(fā)光基因利用PCR技術(shù)擴增目的基因DNA雙鏈復(fù)制模板、原料、酶、能量引物原理：條件：Taq酶一、獲取目的基因方法一：從基因文庫中獲取方法二：利用PCR技術(shù)擴增獲取方法三：人工合成發(fā)光基因二、構(gòu)建基因表達(dá)載體【思考】（限時2分鐘）1、為什么要構(gòu)建基因表達(dá)載體？2、構(gòu)建好的基因表達(dá)載體包括哪些結(jié)構(gòu)？3、啟動子有什么作用？4、標(biāo)記基因有什么作用？（核心）質(zhì)粒目的基因限制酶DNA連接酶二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建【基本過程】

利用所給的質(zhì)粒和含發(fā)光基因的片段，構(gòu)建發(fā)光基因表達(dá)載體【合作探究】（限時5分鐘）1、如果用一種酶切割，應(yīng)該選哪種限制酶？為什么？只用一種酶切割會出現(xiàn)什么弊端？2、能不能用兩種不同的酶切割？3、請討論并制定一個最佳構(gòu)建方案【展示分享】1、如果用一種酶切割，應(yīng)該選哪種限制酶？為什么？只用一種酶切割會出現(xiàn)什么弊端？2、能不能用兩種不同的酶切割？3、請討論并制定一個最佳構(gòu)建方案

各共同體成員要積極參與、協(xié)同合作。要確定好展示者，展示者聲音要洪亮，語言表達(dá)要簡潔、清晰。雙酶切的優(yōu)點：1.防止目的基因與運載體反向連接2.防止運載體和目的基因的自身環(huán)化【小結(jié)】構(gòu)建基因表達(dá)載體的注意事項：1、要使用同種限制酶切割，使質(zhì)粒和載體形成相同的粘性末端。3、防止質(zhì)粒和載體反向連接2、目的基因應(yīng)插在啟動子和終止子之間三、導(dǎo)入受體細(xì)胞生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法受體細(xì)胞【課前預(yù)習(xí)成果展示】三、導(dǎo)入受體細(xì)胞生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)Ca2+處理形成感受態(tài)細(xì)胞受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞發(fā)光基因三、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：構(gòu)建基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞原理：1、農(nóng)桿菌對植物具有感染能力。2、T-DNA易整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。四、目的基因檢測與鑒定翻譯轉(zhuǎn)錄RNA蛋白質(zhì)DNA導(dǎo)入檢測轉(zhuǎn)錄檢測翻譯檢測個體水平檢測分子水平檢測功能性檢測四、目的基因檢測與鑒定翻譯轉(zhuǎn)錄RNA蛋白質(zhì)DNA導(dǎo)入檢測DNA分子雜交技術(shù)原理：堿基互補配對原則DNA分子雜交技術(shù)形成雜交帶放射性元素標(biāo)記基因探針非目的基因四、目的基因檢測與鑒定翻譯轉(zhuǎn)錄RNA蛋白質(zhì)DNA導(dǎo)入檢測轉(zhuǎn)錄檢測翻譯檢測DNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)抗體-抗原檢測抗性檢測、功能活性比較等獲取目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞目的基因檢測與鑒定基因工程的基本操作程序發(fā)光基因含發(fā)光基因的重組質(zhì)粒課堂評價當(dāng)堂鞏固·知識運用·舉一反三1、據(jù)圖回答：(1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用______________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。(2)能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是_____(填字母代號)。A．啟動子B．tetRC．復(fù)制原點D．a(chǎn)mpR(3)過程①可采用的操作方法是________(4)該過程成功的標(biāo)志是____________________________。HindⅢ和BamHⅠA顯微注射牛乳汁中含有人乳鐵蛋白2.（理綜）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的__________________作探針進(jìn)行分子雜交檢測．又要用__________________________________方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。耐鹽基因（目的基因）3.（理綜）研制能夠產(chǎn)生人類白細(xì)胞介素的牛乳腺生物反應(yīng)器，需將目的的基因?qū)肱Ｊ芫?，最常用的?dǎo)入方法是_____________；獲得轉(zhuǎn)基因母牛后，如果________________________