實(shí)驗(yàn)五福醫(yī)大計(jì)數(shù)課件

實(shí)驗(yàn)五血小板計(jì)數(shù)（臨檢指導(dǎo)P48）目的掌握普通光學(xué)顯微鏡直接血小板

1.概述

血小板是由骨髓中成熟巨核細(xì)胞的胞質(zhì)分割而生成。其生成受血小板生成素（TPO）的調(diào)節(jié)。正常靜息狀態(tài)下，血小板為雙面微凸的圓盤形，直徑2～4μm、平均體積7.2fl的非細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分。

染色后鏡下可見(jiàn)血小板的胞質(zhì)呈淡藍(lán)色，內(nèi)含較多的紫紅色嗜天青顆粒。血涂片上，為紅細(xì)胞數(shù)的1/30~1/20，通常每個(gè)油鏡視野可見(jiàn)7~35個(gè)，分散或3~5成群分布。

由于血小板易黏附、聚集以致破壞，優(yōu)質(zhì)的血小板稀釋液應(yīng)具備的條件是：（1）有效地阻止凝血。（2）很快地固定血小板，防止血小板聚集和變形。（3）溶血稀釋液要求紅細(xì)胞破壞完全。（4）組成簡(jiǎn)單、容易保存、不長(zhǎng)細(xì)菌。

根據(jù)所采用的稀釋液不同而又分為破壞紅細(xì)胞稀釋法（溶血法）：

草酸銨溶血法：對(duì)紅細(xì)胞破壞力強(qiáng)，血小板形態(tài)清楚。為首選常規(guī)計(jì)數(shù)方法。

復(fù)方尿素溶血法：尿素可溶解紅細(xì)胞、甲醛可固定血小板和防腐，稀釋后血小板脹大易辨認(rèn)，尿素容易分解，試劑容易失效。尿素不能完全破壞紅細(xì)胞。

高鐵氰化鉀溶血法：試劑穩(wěn)定易于長(zhǎng)期保存但不能完全破壞紅細(xì)胞。不破壞紅細(xì)胞稀釋法：復(fù)方碘稀釋液。紅細(xì)胞未破壞及試劑易細(xì)菌生長(zhǎng)，干擾計(jì)數(shù)，已被淘汰。實(shí)驗(yàn)五血小板計(jì)數(shù)（2）操作步驟1）吸取稀釋液：準(zhǔn)確吸取10g/L草酸銨溶血?jiǎng)?.38ml于小試管內(nèi)。2）采血：準(zhǔn)確采血20μl加入上述試管，立即充分混勻。3）靜置：待完全溶血后再混勻1min。4）充池：混勻血小板懸液，并取1滴充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池，靜置10min。5）計(jì)數(shù)：用高倍鏡計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)的中央及四角共5個(gè)中方格內(nèi)的血小板數(shù)量。實(shí)驗(yàn)五血小板計(jì)數(shù)（4）注意事項(xiàng)1）稀釋液必須符合優(yōu)質(zhì)的血小板稀釋液，因此稀釋液必須新鮮、潔凈，無(wú)雜物和細(xì)菌污染；定期檢查稀釋液的質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)先做稀釋液空白計(jì)數(shù)，符合儀器使用說(shuō)明方可使用。2）器材及操作必須標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化①所用器材必須校準(zhǔn)、潔凈、干燥。②采血、充液、計(jì)數(shù)均應(yīng)規(guī)范，避免血小板激活或破壞。③血小板懸液充入計(jì)數(shù)池后必須靜置15min再計(jì)數(shù)，并在采血后1h內(nèi)完成計(jì)數(shù)。時(shí)間過(guò)短或過(guò)長(zhǎng)則可導(dǎo)致血小板未完全下沉或失去光澤，使計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。3）及時(shí)核準(zhǔn)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果由經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員進(jìn)行。

常用的方法有：①用同1份血標(biāo)本制備良好的血涂片，觀察血小板數(shù)量、形態(tài)和分布情況，進(jìn)行核對(duì)。②用血小板計(jì)數(shù)的參考方法核對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果。③每份標(biāo)本最好做2次計(jì)數(shù)，若2次計(jì)數(shù)誤差小于10%，取其均值報(bào)告；若計(jì)數(shù)誤差大于10%，應(yīng)做第3次計(jì)數(shù)，取2次相近結(jié)果的均值報(bào)告。4）排除非技術(shù)因素的影響某些病理情況可干擾計(jì)數(shù)，出現(xiàn)血小板假性減少或增多。①血小板聚集或凝集、異常蛋白血癥、巨大血小板、衛(wèi)星現(xiàn)象、高脂血癥導(dǎo)致血小板假性減少。②HbH包涵體病人的紅細(xì)胞碎片、慢性淋巴細(xì)胞性白血病病人的淋巴細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)碎片、小紅細(xì)胞等可被誤認(rèn)為血小板，導(dǎo)致血小板假性增多。5）標(biāo)本采集

最好清晨采血，采集過(guò)程中應(yīng)避免反復(fù)握拳、拍打采血部位、扎止血帶的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（＜1min），以免血小板激活而影響計(jì)數(shù)結(jié)果。采血后立即進(jìn)行血小板檢測(cè)。3）血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)法：簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好，可同時(shí)測(cè)定血小板、MPV及PDW等多個(gè)指標(biāo)的特