ImageLab中文操作手冊(cè)

ImageLab?中文操作手冊(cè)FastandReliableImageLab全自動(dòng)圖像獲取和分析軟件用于MolecularImagerChemiDoc?XRS+、MolecularImagerGelDoc?XR+和CriterionStainFreeTM成像系統(tǒng)，可應(yīng)用于凝膠電泳和轉(zhuǎn)印膜的數(shù)字成像和分析，而自動(dòng)化的工作流程能加速圖像獲取環(huán)節(jié)及參數(shù)優(yōu)化，并針對(duì)調(diào)整好的凝膠或轉(zhuǎn)印膜影像進(jìn)行系統(tǒng)性分析，進(jìn)而得到所需的分析數(shù)據(jù)結(jié)果。一、軟件操作界面啟動(dòng)精靈程序桌面啟動(dòng)精靈程序桌面主窗口工具列分析工具列狀態(tài)列1.主窗口工具列檔案管理分析數(shù)據(jù)RsltsData2.顯示工具列轉(zhuǎn)換3D成模式像亮度明暗度轉(zhuǎn)換改變圖像色彩全窗口大小放大轉(zhuǎn)換3D成模式像亮度明暗度轉(zhuǎn)換改變圖像色彩全窗口大小放大縮小圖像顯示設(shè)定圖像信息3.分析工具列（1）Imageols（2）泳道及條帶LaneandBadools（3）分子量MWMoeculareigt（4）自動(dòng)定量uanttyols（5）注釋nnoationols（6）手動(dòng)定量omeols二、使用ImageLab軟件進(jìn)行化學(xué)發(fā)光圖像獲取流程1.建立圖像獲取程序：在凝膠成像（GelImaging）對(duì)話框中選擇Chemi（化學(xué)發(fā)光）應(yīng)用程序在成像區(qū)域（ImagingArea）對(duì)話框中的下拉式選單中選擇合適的樣品大?。ǚ潜匦瑁芍笸ㄟ^(guò)PositionGel選擇）選擇成像曝光（ImageExposure）方法，可以人為評(píng)估曝光時(shí)間并以手動(dòng)設(shè)定（ManualExposure），或是使用信號(hào)累積模式（SignalAccumulationMode，SAM）來(lái)進(jìn)行操作。在建立一個(gè)化學(xué)發(fā)光的程序時(shí)最難的任務(wù)就是圖像曝光的擬定，由于您想獲得一個(gè)充足運(yùn)用了相機(jī)大的動(dòng)態(tài)范圍的圖像。過(guò)短的圖像曝光時(shí)間也許使高于膜背景的薄弱信號(hào)不能被辨認(rèn)；過(guò)長(zhǎng)的圖像曝光時(shí)間可以使得某些條帶飽和（也就是說(shuō)，超過(guò)了相機(jī)準(zhǔn)確報(bào)告信號(hào)的能力）。假如這是您第一次用ChemiDocXRS+分析化學(xué)發(fā)光樣品，您需要在使用手控或信號(hào)累積模式（SAM）之前決定一個(gè)合適的成像時(shí)間框架。獲得這個(gè)信息的最佳的方式是取得一個(gè)相對(duì)短的手工曝光并運(yùn)用ImageLab里的工具估計(jì)最適的曝光時(shí)間。2.手動(dòng)曝光選擇手動(dòng)設(shè)定曝光時(shí)間（Manuallysetexposuretime）并在讀秒框中輸入10秒。選擇Highlightsaturatedpixels。把膠置于透射箱的中心位置。在程序窗口中點(diǎn)擊按鈕。觀測(cè)顯示器中樣品的實(shí)時(shí)圖像，打開(kāi)照膠系統(tǒng)的門(mén)并移動(dòng)樣品直到位于視野的中心區(qū)域。可運(yùn)用照相機(jī)的變焦滑板調(diào)節(jié)成像區(qū)域的大小。選擇按鈕獲得你的第一個(gè)圖像。若所需的圖像出現(xiàn)在計(jì)算機(jī)的顯示器上，確認(rèn)圖像中是否包含紅色的飽和區(qū)域。若有飽和區(qū)域存在，請(qǐng)重新以較短的曝光時(shí)間來(lái)獲取圖像。若無(wú)飽和區(qū)域存在，則可移動(dòng)鼠標(biāo)置于最暗的條帶之上，在較低的右下角ImageLab窗口中觀測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度數(shù)值。如圖中顯示強(qiáng)度為1994，照相機(jī)能記錄的最大值的32分之一（最大值為65,535）。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相機(jī)的最大動(dòng)態(tài)范圍附近成像你的樣品。若你只需針對(duì)單一圖像的成像時(shí)間進(jìn)行評(píng)估，可直接在手動(dòng)曝光區(qū)域中輸入300。3.信號(hào)累積模式（SignalAccumulationMode，SAM）假如預(yù)估方法局限性以精確滿足您的目的，請(qǐng)選擇SAM按鈕，然后按Setup按鈕。一個(gè)新的對(duì)話框會(huì)跳出來(lái)，其包具有可輸入細(xì)分的成像時(shí)間的領(lǐng)域。在這個(gè)例子中，我們已經(jīng)輸入了小于和大于我們?cè)嫉?00秒曝光估計(jì)時(shí)間，由于我們有理由相信準(zhǔn)確的成像時(shí)間將會(huì)在這些時(shí)間之中。我們總共想要5個(gè)成像，推測(cè)其中一個(gè)將會(huì)與最佳成像極為接近。一個(gè)您的SAM設(shè)定的圖像顯示出現(xiàn)在對(duì)話框里。而SAM設(shè)定的影像顯示對(duì)話窗口，在您選擇按鈕后再點(diǎn)選按鈕，窗口會(huì)顯示相關(guān)進(jìn)度圖標(biāo)來(lái)說(shuō)明整體圖像獲取的時(shí)間。在250秒獲取第一個(gè)圖像，同時(shí)一個(gè)小的縮略圖會(huì)出現(xiàn)在窗口的下方，以此類(lèi)推整個(gè)過(guò)程將連續(xù)到獲取所有的圖像。就像前面做過(guò)的那樣，通過(guò)移動(dòng)鼠標(biāo)在圖像上，您能鑒定強(qiáng)度值。您也可以通過(guò)使用位于程序窗口左邊的圖像轉(zhuǎn)換窗口（ImageTransform）中的調(diào)節(jié)劃片改變圖像的表觀。在SAM程序中的任何地方您都能通過(guò)點(diǎn)擊縮略圖查看圖像。若擬定調(diào)整到符合您規(guī)定的圖像時(shí)，點(diǎn)擊按鈕舍棄其它不適合的圖像來(lái)完畢獲取圖像的程序。也可在SAM獲取圖像的過(guò)程中或之后來(lái)保存需要的所有圖像，直接點(diǎn)選右鍵單點(diǎn)縮圖窗口內(nèi)的圖像即可進(jìn)行存盤(pán)保存下來(lái)。在決定獲取圖像的數(shù)量時(shí)，記住增長(zhǎng)SAM圖像會(huì)導(dǎo)致背景信號(hào)的平均。當(dāng)較多的圖像被獲得時(shí)，在背景強(qiáng)度水平附近的弱的信號(hào)將會(huì)變得難以辨認(rèn)。假如辨別最弱的信號(hào)很重要，我們推薦在合適的時(shí)間下獲得單一的成像。三、建立全自動(dòng)圖像獲取及分析程序（CeatingPotocols）1.啟動(dòng)分析精靈窗口--SEP1.GELIMAGING（1）按照應(yīng)用（NucleicAcid/Protein/Blots）選擇相關(guān)的程序（Chooseanapplication）（2）選擇成像區(qū)域（ChooseteImagingAea）（3）選擇成像曝光時(shí)間（ChooseImageExposueTime）（4）選擇顯示設(shè)定（ChoeDslayOtins,HghightaturatedpxesandImageColo）2.圖像自動(dòng)分析（AnalyzeImage）--SEP2.DTETLNESNDBN設(shè)定DTETLNESNDBN（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75。3.分子量分析（AnalyzeMolecular）--SEP3.ANLYZEMOEULRGT設(shè)定AnalyzeMolecularWeightSettings的分子量標(biāo)準(zhǔn)品（MolecularWeightStandard）類(lèi)型，所有Bio-Rad的各類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品（涉及核酸、蛋白）均已預(yù)存。當(dāng)然，您也可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)設(shè)立您自定義的分子量標(biāo)準(zhǔn)品。并同時(shí)設(shè)定分子量標(biāo)準(zhǔn)品的泳道及回歸方式。4.報(bào)告輸出設(shè)定（ReportSettings）--SEP4.SPEIFYCOTETOFRPR5.結(jié)果（ResultsOverview）及報(bào)告（Report） （1）數(shù)據(jù)顯示信息（DisplayingData）（2）分析表格設(shè)定（AnalysisableOptions）（3）Lane信息（LanePofile）（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線（StandadCurve）四、建立圖像分析程序（CeatingImagesAnalyzingPotocols）1.圖像分析（AnalyzingImages）（1）分析工具AnalysisoolBox（A）自動(dòng)分析（AutoAnalysis）點(diǎn)選進(jìn)入DetectionSettings窗口設(shè)定DetectlanesandbandsBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75），接著再設(shè)定MolecularAnalysisSettings的MoleculareightStandad、StandadLanes及RegessionMetho。2.圖像工具（Imageools）可進(jìn)行水平或垂直翻轉(zhuǎn)、左右旋轉(zhuǎn)90℃或自由旋轉(zhuǎn)（Rotate）、裁剪（Crop）、反轉(zhuǎn)（InvertData）及迭合（Merge）。3.Lanes及Bands工具（LaneandBandools）使用自動(dòng)（Automatic）或手動(dòng)（Manual）搜尋Lane功能（A）針對(duì)所有的Lanes（All）進(jìn)行大小調(diào)整（Resize）、（djst）及刪除（Delete）等參數(shù)調(diào)整。（B）針對(duì)單一Lane（Single）進(jìn)行增長(zhǎng)（d）、彎曲（Bend）、移動(dòng)（Move）、寬度（Width）及刪除（Delete）等參數(shù)調(diào)整。（C）運(yùn)用進(jìn)行背景值的扣抵，并可點(diǎn)選（ApplytoselectedLane）針對(duì)單一Lane進(jìn)行調(diào)整。-RollingDisk參數(shù)（1-99mm）（2）BandsTab通過(guò)DetectBands進(jìn)行自動(dòng)搜尋Bands功能或手動(dòng)進(jìn)行增長(zhǎng)（Add）、刪除（Delete）及（Adjust）等參數(shù)調(diào)整。.分子量分析工具（MoleculareightAnalysisools）此工具可由已知的標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)算相對(duì)的分子量或堿基對(duì)（asepairs）。5.定量工具（Quantityools）（1）相對(duì)定量（RelativeQuantity）從圖像中選擇已知的標(biāo)準(zhǔn)品（efenceband）標(biāo)準(zhǔn)品濃度（以綠色R表達(dá)），其分析結(jié)果可從Analysistable觀測(cè)。（2）絕對(duì)定量（Absolute）通過(guò)選擇已知標(biāo)準(zhǔn)品濃度的bands（至少兩個(gè)以上,以R表達(dá)），并設(shè)定合適的回歸參數(shù)計(jì)算所得之標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)推算目的bands的絕對(duì)濃度（回歸參數(shù)設(shè)定如Linear(較常用)、Point-to-Poin或Cuicsline）。RegressionMethodMinimumnumberfstanardbandsinimumnumerwithFoceThrouhOptionie21int-to-oint21uicpi546.注釋工具（Annotationools）可以通過(guò)AddAnnotations工具增長(zhǎng)文字批注及箭頭批注，并可調(diào)整批注相對(duì)位置（Alignment）、文字屬性、顏色及旋轉(zhuǎn)方向等參數(shù)7.定量工具（olumeools）按下選擇較適合的Band型態(tài),選取想要定量分析的Band位置,并在Band上點(diǎn)擊左鍵兩下可將樣品定義為標(biāo)準(zhǔn)品、未知樣品或背景空白,并分別定義其定量依據(jù)（如kb，ppm，mg/ml…）建議用RectTool方形，先框出適當(dāng)?shù)姆叫?，并用?fù)制方式將分析的Band框出（Ctrl+C+左鍵/即可復(fù)制，或Ctrl+C