臨檢中心檢驗(yàn)科主任會議 臨床免疫檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化和一致化的實(shí)現(xiàn)路徑

臨床免疫檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化和一致化的實(shí)現(xiàn)路徑

李金明國家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心

2017.3.23.

廣州常用的免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及檢測方法感染性疾病特異抗原和抗體（乙肝“兩對半”、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗體、TORCH等）：ELISA、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)（CLIA）自身抗體：ELISA、CLIA、間接免疫熒光試驗(yàn)?zāi)[瘤標(biāo)志物：CLIA、ELISA激素：CLIA特定蛋白：散射比濁和透射比濁治療藥物監(jiān)測（TDM）等小分子：如酶放大免疫測定技術(shù)（EMIT），克隆酶供體免疫測定（CEDIA）、ELISA、CLIA等臨床免疫檢驗(yàn)的特點(diǎn)：“四多”“一難”方法“多”：如、免疫電泳、玻片凝集、膠乳凝集、紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、散射和透射比濁、ELISA、CLIA、免疫層析、免疫滲濾、間接免疫熒光、時間分辨熒光、流式熒光、流式細(xì)胞術(shù)等項(xiàng)目“多”：任何一種物質(zhì)，只要能得到其特異抗體，均可建立這種物質(zhì)的免疫檢驗(yàn)方法；同樣，只要能得到一種物質(zhì)的純的抗原，亦可建立其特異抗體的免疫檢驗(yàn)方法；并且既有定性，又有定量；既有大分子，也有小分子手工操作“多”檢測影響因素“多”：內(nèi)源性、外源性標(biāo)準(zhǔn)化或一致化“難”疾病的時代特點(diǎn)1990年代之前：傳染?。腥胗?jì)劃免疫的傳染病，如乙肝、結(jié)核、脊灰、麻疹等）1990年代：性傳播疾?。℉BV、HCV、HIV、梅毒、淋病等）2000年以后：心腦血管疾病、腫瘤、糖尿病、不孕不育、優(yōu)生優(yōu)育、自身免疫??？、老年癡呆《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》本科教材“十二五”普通高等教育本科國家級規(guī)劃教材、國家衛(wèi)生計(jì)生委“十二五”規(guī)劃教材、全國高等醫(yī)藥教材建設(shè)研究會“十二五”規(guī)劃教材：《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》人民衛(wèi)生出版社：

第二十八章

心血管疾病及其免疫檢測

第二十九章生殖免疫及其免疫檢測心血管疾病及其免疫檢測超敏C-反應(yīng)蛋白：一級預(yù)防冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)性評估、急性冠脈綜合征預(yù)后和療效監(jiān)測細(xì)胞因子：IL-6、TNF-α肌鈣蛋白（Troponin,Tn）：心梗肌紅蛋白（Myoglobin,Mb）：心梗腦納肽（BNP）、pro-BNP、NT-pro-BNP：心衰D-二聚體：血栓TDM生殖免疫及其免疫檢測抗精子抗體：不孕癥抗透明帶抗體：不孕癥、反復(fù)自然流產(chǎn)封閉抗體（blockingantibodies）（包括抗HLA-DR抗體、抗TLX抗體、抗Fc受體抗體、抗基因抗體，抗冷細(xì)胞抗體等）：反復(fù)自然流產(chǎn)抗磷脂抗體：反復(fù)自然流產(chǎn)hCG：早孕、先兆流產(chǎn)或異位妊娠以及滋養(yǎng)層細(xì)胞疾病診斷雌三醇：胎兒胎盤功能狀況、胎兒生長受限、過期妊娠等的診斷與跟蹤胎盤泌乳素（hPL）：連續(xù)下降預(yù)測流產(chǎn)。hPL水平低于正常妊娠同期水平，而hCG異常升高，有診斷葡萄胎意義孕酮：評估卵巢或胎盤功能、妊娠后水平連續(xù)下降提示流產(chǎn)可能促卵泡激素（FSH）和黃體生成素（LH）：升高見于卵巢功能不足或卵巢發(fā)育不良抗苗勒管激素（AMH）：卵巢儲備功能（靈敏和特異預(yù)測卵巢反應(yīng)）抑制素B：評價不育男性精子發(fā)生、兒童隱睪和性早熟的診斷、非阻塞性無精癥病人睪丸精子抽吸（TESE）的預(yù)測指標(biāo)、反映卵巢儲備功能、輔助診斷多囊卵巢綜合征（PCOS）、輔助生殖技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化？一致化？臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目分類A類：能溯源到SI單位的項(xiàng)目，包括化學(xué)定義明確的小分子化合物，如電解質(zhì)、代謝物類、甾體激素及甲狀腺激素和酶催化濃度等，共約30-40種。B類：不能溯源到SI單位的項(xiàng)目，主要是蛋白和核酸類等生物大分子，有以下4種情況：B1)有國際約定參考方法和國際約定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如糖化血紅蛋白；B2)有國際約定參考方法，無標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如某些凝血因子、血細(xì)胞計(jì)數(shù)、脂蛋白膽固醇等，約30種；B3)

有國際約定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，但無參考方法，如某些蛋白激素、抗體和腫瘤標(biāo)志物等，約300多種；B4)既無參考方法，也無標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如某些腫瘤標(biāo)志物和抗體等，大約300種。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)計(jì)量學(xué)的目標(biāo)是：在國際共識的基礎(chǔ)上，通過提供缺失的參考方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將上述B2、B3、B4的情況提高到B1的情況（ISO17511）。GregMillerW,

Roadmapfor

harmonization

ofclinicallaboratorymeasurementprocedures.ClinChem.

2011;57(8):1108-17.標(biāo)準(zhǔn)化(Standardization)當(dāng)一個待測物的測定結(jié)果相同，此外，可通過一個較高級別的一級參考物質(zhì)（純物質(zhì)）和/或參考測量程序（RMP），結(jié)果可溯源至SI（InternationalSystemofUnits(SystémeInternationald`Unités)，則可稱為被標(biāo)準(zhǔn)化（Standardized）。有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品單位和溯源的問題長度單位的確定和溯源舉例火箭助推器寬度和鐵軌間距（4.85英尺)的溯源現(xiàn)代鐵路鐵軌間距4.85英尺英國電車輪軌間距的標(biāo)準(zhǔn)馬車輪距的標(biāo)準(zhǔn)英國馬路轍跡的寬度是4.85英尺羅馬戰(zhàn)車的寬度牽引一輛戰(zhàn)車的兩匹馬的屁股的總寬度鐵軌的寬度決定了鐵路上隧道的寬度美國航天飛機(jī)的火箭助推器的寬度“英寸”、“中國寸”“英尺”和的由來英寸10世紀(jì)英皇埃德加拇指關(guān)節(jié)的長度14世紀(jì)英皇愛德華二世頒布“標(biāo)準(zhǔn)合法英寸”:從大麥穗中選取3粒最大的麥粒排成一行,其長度就是一”英寸”中國寸古人中指中節(jié)之長就是“一寸”?，F(xiàn)在的中醫(yī)針灸還沿用這個標(biāo)準(zhǔn)英尺？標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的單位IU/mL？

Foot

（縮寫為ft.等于12英寸，1/3碼，0.3048m)

最初是一個成人的腳長？德國人異議：因人而異16個男子左腳長度的均值量值溯源參考方法參考物質(zhì)（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）參考實(shí)驗(yàn)室參考系統(tǒng)測定方法工作程序標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可比的結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分類國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分級:可分為第一,第二和第三等三個等級.一級標(biāo)準(zhǔn)數(shù)量有限,可使用10-20年,是凍干品,內(nèi)含載體蛋白.一級標(biāo)準(zhǔn)可用來校準(zhǔn)第二和第三級標(biāo)準(zhǔn).國際標(biāo)準(zhǔn)品(IS)中作為第一級標(biāo)準(zhǔn),二級標(biāo)準(zhǔn)可用來維持校準(zhǔn).國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分級：一級和二級。適用于免疫測定的標(biāo)準(zhǔn)品的一般要求

要求

一級標(biāo)準(zhǔn)

二級標(biāo)準(zhǔn)

三級標(biāo)準(zhǔn)來源

單一

多個

多個使用時間10-20年1-5年1-數(shù)年制備純化物于載體蛋白緩沖溶液中純化物,混合血清,提取物于載體蛋白緩沖溶液中血清或血漿,人工蛋白為基礎(chǔ)的緩沖液定值方法多中心合作研究免疫測定,與一級標(biāo)準(zhǔn)比對免疫測定,與二級標(biāo)準(zhǔn)比對貯存方式

凍干-70℃下凍存冰凍或于穩(wěn)定溶液中,可能的話凍干對用于不同類型免疫測定的一級標(biāo)準(zhǔn)的特殊要求

要求已知結(jié)構(gòu)的多肽(激素和腫瘤標(biāo)志物)未知結(jié)構(gòu)的蛋白（抗體確定的腫瘤標(biāo)志物）

血清蛋白

低分子量化合物（類固醇、甲狀腺素）

純度

最純的蛋白部分純化或未純化提取物或體液混合血清

化學(xué)純（>99%）定值方法氨基酸分析（物質(zhì)濃度）；稱重（質(zhì)量濃度）；比對較早的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行免疫測定（IU）；（生物測定，IU）國際組織的一致性結(jié)果；研制者指定的單位。國際組織的一致性結(jié)果；比對純蛋白進(jìn)行免疫測定（質(zhì)量濃度）

稱重（物質(zhì)和質(zhì)量濃度）；光電比色測定。

抗原、抗體國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)項(xiàng)目研制者發(fā)布年編號濃度（IU/瓶）HBsAgNIBSC1985(ad)1stIS100（IU/ml)NIBSC2003(adw2,genetypeA)00/588(2stIS)33

NIBSC200303/062(1stIRpanel)抗HBsSanquin1977w104250

HIV-1P24NIBSC199290/6361000

抗-HAVSanquin1998w104149抗-HEVNIBSC199095/58450抗梅毒血清NIBSC1958HS49抗弓形體IgGNIBSC200301/60020抗風(fēng)疹抗體NIBSC1996RUBI-1-941600http://www.nibsc.ac.uk/products定量測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)項(xiàng)目編號研制者人血清補(bǔ)體C1q,C4,C5,B因子，和總功能補(bǔ)體CH50W1032Sanquin人血清免疫球蛋白G，A和M(IgG,IgAandIgM)67/086NIBSC人血清免疫球蛋白E75/502NIBSC甲胎蛋白（AFP）NIBSC前列腺特異抗原（PSA）（90：10）前列腺特異抗原（PSA），游離96/668NIBSC癌胚抗原（CEA）73/601NIBSC絨毛膜促性腺激素75/589NIBSC人胰島素66/304NIBSChttp://www.nibsc.ac.uk/products一致化（Harmonization)當(dāng)結(jié)果通過溯源到一個參考物質(zhì)或根據(jù)一個大家認(rèn)同的程序（如與所有方法的均值一致）而達(dá)到一致性，但既無較高級別的一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，亦無一個參考測量程序（RMP），則可稱為被一致化（Harmonized）。一致化（Harmonization）通過采用覆蓋正常人群、特定疾病患者和有特定疾病相關(guān)病理過程人群的樣本盤及可能的候選參考物質(zhì)（互通性評價）和廠家校準(zhǔn)品或質(zhì)控品對實(shí)驗(yàn)室檢測的一致程度進(jìn)行評估分析，以判斷測量過程一致化的技術(shù)可行性。不可行時，通過改進(jìn)測量的特異性及測量過程對測量方法進(jìn)行優(yōu)化以達(dá)到技術(shù)可行性，在技術(shù)可行的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)相應(yīng)檢驗(yàn)項(xiàng)目日常檢測結(jié)果的一致化。測量一致化中可能存在的問題待測物的定義不充分分析的特異性不強(qiáng)參考物質(zhì)的互通性存在問題缺乏一個系統(tǒng)的一致化方法參考物質(zhì)的互通性（Commutability)是參考物質(zhì)的一種特性，即在兩個或更多的檢測程序間，參考物質(zhì)和一組具有代表性的各個病人樣本間，在臨床有意義的限值范圍內(nèi)，表現(xiàn)為相同的數(shù)量關(guān)系。一致化的系統(tǒng)方法建議依據(jù)臨床重要性確定哪些檢驗(yàn)項(xiàng)目需要一致化，列出一個清單。確定一致化的臨床要求（肌鈣蛋白急診測定、PSA人群篩查、HCV病毒載量監(jiān)測，結(jié)果上的微小變化改變臨床決策），從而決定檢驗(yàn)項(xiàng)目的允許偏倚和不精密度。最好是能確定出現(xiàn)臨床后果的總允許誤差（TEa）。GregMillerW,

Roadmapfor

harmonization

ofclinicallaboratorymeasurementprocedures.ClinChem.

2011;57(8):1108-17.評估一個臨床實(shí)驗(yàn)室測量程序（CLMP）近期分析性能信息來源經(jīng)過同行評審的使用特性明確的病人樣本盤的發(fā)表的