人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座

人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙研發(fā)

學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院

專(zhuān)業(yè)：生物工程報(bào)告人：段海婷

人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第1頁(yè)一、介紹人絨毛膜促性腺激素(HCG)是孕卵著床后由人體滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌一個(gè)糖蛋白激素，它是由α和β二聚體糖蛋白組成，α亞基與垂體分泌FSH（卵泡刺激素）、LH（黃體生成素）和TSH（促甲狀腺激素）等基本相同，而β-HCG是HCG所特有，HCG含量改變已成為檢測(cè)是否妊娠主要依據(jù)。市面上銷(xiāo)售HCG試紙被大家所熟悉，然而它只適合用于普通人群，本試紙靈敏度深入提升，也可適合用于不易檢測(cè)人群。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第2頁(yè)二、檢測(cè)原理以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜毛細(xì)血管作用，滴加在膜條一端液體慢慢向另一端滲移，經(jīng)過(guò)抗原抗體結(jié)合，并利用金聚集展現(xiàn)紅色，檢測(cè)抗原，檢測(cè)結(jié)果普通有陰性和陽(yáng)性。試紙條主體示意圖人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第3頁(yè)試紙條陽(yáng)性示意圖人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第4頁(yè)試紙條陰性示意圖人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第5頁(yè)三、試驗(yàn)方法與結(jié)果金選擇金標(biāo)抗體制備試紙材料選擇試紙條膜抗體固定試紙條組裝試紙條測(cè)試人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第6頁(yè)1.金選擇金在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中起示蹤作用，其質(zhì)量好壞直接影響試紙檢測(cè)結(jié)果。制備金普通使用方法是用還原劑將氯金酸還原，制備金，其制備方法較多，本試驗(yàn)應(yīng)用兩種制備金方法：檸檬酸鈉法（水相）和硼氫化鈉法（有機(jī)相）。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第7頁(yè)檸檬酸鈉法

檸檬酸鈉法制備金在1-100納米之間，能均一穩(wěn)定分散在液體中，由一個(gè)基礎(chǔ)金核和外面雙離子層組成，分散溶液中H+組成金最外層離子層，在金核表面緊連是內(nèi)層離子（AuCl2-），來(lái)維持金懸液狀態(tài)。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第8頁(yè)硼氫化鈉法以硼氫化鈉做還原劑，甲苯做溶劑，經(jīng)過(guò)還原氯金酸制備得到金納米粒子。這時(shí)金顆粒表面由十二硫醇做配位保護(hù)，巰基配位結(jié)合在金顆粒表面，碳鏈留在外面，此時(shí)金納米顆粒是疏水。兩親聚合物是現(xiàn)有疏水基團(tuán)又有親水基團(tuán)齒狀聚合物，其經(jīng)過(guò)疏水作用包裹在金納米顆粒表面，從而使金納米顆粒由有機(jī)相轉(zhuǎn)移到水相。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第9頁(yè)檸檬酸鈉法制備金表征

水相金溶液晶瑩透亮，無(wú)混濁，色澤鮮艷，呈酒紅色，沒(méi)有漂浮物。水相金粒徑18.16nm，水相金最大吸收峰在520nm時(shí)吸收值是0.41。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第10頁(yè)硼氫化鈉法制備金表征上圖金成黑紫色，不渾濁，沒(méi)有懸浮物，粒徑為20.5nm，最大吸收峰在517nm時(shí)吸收值是0.19。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第11頁(yè)兩種制金方法對(duì)比結(jié)果上圖藍(lán)色線是水相金紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)結(jié)果，粉色線是有機(jī)相相金紫外可見(jiàn)分光光度檢測(cè)結(jié)果。兩種方法制備出來(lái)金顆粒粒徑基本一致，兩種方法最大不一樣就是檸檬酸鈉還原法制備金吸收值A(chǔ)bs在最高峰及最高峰之前一直偏大，這說(shuō)明，檸檬酸鈉還原法制備金濃度大，更適合本試驗(yàn)后面金標(biāo)抗體制備。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第12頁(yè)2.金標(biāo)抗體制備

金標(biāo)抗體即金和抗體大分子結(jié)合物，金在堿性條件下帶負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)分子正電荷基團(tuán)借靜電吸引而形成牢靠結(jié)合，不會(huì)影響蛋白質(zhì)活性。

左邊最大吸收峰在277nm處，是沒(méi)有結(jié)合抗體蛋白；右邊最大吸收峰在527nm，比原來(lái)520nm大，說(shuō)明金結(jié)合了抗體蛋白，體積變大。

人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第13頁(yè)3.試紙材料選擇

把羊抗鼠二抗固定到A，B，C三種不一樣孔徑硝酸纖維素膜試紙同一位置處，將其37℃干燥后，在硝酸纖維素膜試紙一端滴加金標(biāo)抗體溶液，比較液體流速、是否會(huì)產(chǎn)生背景色，以及羊抗鼠二抗與金標(biāo)抗體結(jié)合效果。ABBBCC人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第14頁(yè)4.膜抗體固定膜選擇固定：固定蛋白用硝酸纖維素膜，因?yàn)榇四ず偷鞍踪|(zhì)有很強(qiáng)結(jié)協(xié)力；連接墊用玻璃纖維素膜，因?yàn)槠溆谢瘜W(xué)惰性，能夠成為金標(biāo)物暫時(shí)載體，有利于金標(biāo)抗體釋放?？贵w羊抗鼠二抗金標(biāo)抗體人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第15頁(yè)5.試紙條組裝試紙條由底板、樣品墊、連接墊、NC膜（檢測(cè)線和質(zhì)控線）和吸水紙組成。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第16頁(yè)6.試紙條陽(yáng)性、陰性結(jié)果測(cè)試

在試紙條一端分別滴加含有和不含人絨毛膜促性腺激素抗原溶液，待5min后樣品滲移到試紙另一端，觀察結(jié)果。

上圖左側(cè)是陰性結(jié)果圖，右側(cè)是陽(yáng)性結(jié)果圖，能夠看出檢測(cè)結(jié)果顯著，而且兩側(cè)三條試紙檢測(cè)結(jié)果一樣，表達(dá)了本試紙重復(fù)性好，說(shuō)明結(jié)果可靠，沒(méi)有偶然性。人絨毛膜促性腺激素側(cè)向?qū)游鰴z測(cè)試紙的研發(fā)專(zhuān)家講座第17頁(yè)試紙條靈敏度對(duì)比測(cè)試

將孕婦尿液稀釋4倍，分別滴加于本試驗(yàn)試紙和市面所賣(mài)試紙，待樣品液滲移到試紙另一端，觀察結(jié)果。

上圖是孕婦尿液稀釋4倍后檢測(cè)結(jié)果對(duì)比圖，左圖是本試驗(yàn)制備試紙，右圖是市面上所賣(mài)試紙，相同檢測(cè)原液不一樣