動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座

2.2動物細(xì)胞工程2.2.2動物細(xì)胞融合與單克隆抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第1頁植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合融合原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞脫分化再分化愈傷組織雜種植株溫故知新:植物體細(xì)胞雜交過程動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第2頁A細(xì)胞B細(xì)胞人工誘導(dǎo)1、動物細(xì)胞融合概念雜交細(xì)胞

動物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指兩個或多個細(xì)胞融合形成一個單核細(xì)胞過程。一、動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第3頁細(xì)胞膜流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整雜交細(xì)胞誘導(dǎo)伎倆？融合后細(xì)胞類型？AB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點？AA、AB、BB(未融合A和B)含兩種生物遺傳物質(zhì)2、動物細(xì)胞融合過程原理:動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第4頁2、動物細(xì)胞融合過程

為何滅活病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性保留融合活性動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第5頁3、動物細(xì)胞融合技術(shù)意義和應(yīng)用突破有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能最主要用途：制造單克隆抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第6頁比較項目細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合方法誘導(dǎo)伎倆用途植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜流動性和細(xì)胞全能性纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動、聚乙二醇克服遠(yuǎn)源雜交不親和，取得雜種植株動物細(xì)胞融合細(xì)胞膜流動性用胰蛋白酶使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，還有滅活病毒取得雜種細(xì)胞、制備單克隆抗體4、比較動、植物細(xì)胞雜交技術(shù)動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第7頁1、能使動物細(xì)胞融合特有誘導(dǎo)因子是（）A.離心B.滅活病毒C.電刺激D.振動2、融合后雜交細(xì)胞遺傳物質(zhì)有何特點（）A.含有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息B.能無限增殖C.可形成新個體D.培養(yǎng)過程會貼壁3、動物細(xì)胞融合作用中最主要是（）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞

BBA動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第8頁強調(diào)：效應(yīng)B淋巴細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體B淋巴細(xì)胞，下文將其簡稱為B淋巴細(xì)胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體細(xì)胞是漿細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。溫故知新二、單克隆抗體B細(xì)胞效應(yīng)B細(xì)胞記憶B細(xì)胞分化動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第9頁抗體傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原

重復(fù)注射動物從動物血清中分離抗體該法制備抗體缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢？單克隆抗體！動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第10頁讀下面一段資料，找出單克隆抗體概念

人們發(fā)覺，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)過程中，體內(nèi)B細(xì)胞能夠產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上特異性抗體，不過每個B細(xì)胞只分泌一個化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強抗體。要想取得大量單一抗體，必須用單個B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。1、單克隆抗體概念單克隆抗體：單個B細(xì)胞(漿細(xì)胞)克隆產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強抗體動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第11頁提醒1：對B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提醒2：我們所學(xué)哪種細(xì)胞是能夠無限增殖？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)計一個方案。2、單克隆抗體制備動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第12頁一個B淋巴細(xì)胞只分泌一個特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體

既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖細(xì)胞1975年英國科學(xué)家米爾斯坦和柯勒試驗動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第13頁①為何給小鼠注射特定抗原蛋白？②會有幾個融合方式？③雜交瘤細(xì)胞是怎樣篩選出來？有何特點？④是否全部雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤怎樣大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量單克隆抗體？動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第14頁BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活取得產(chǎn)生對應(yīng)抗體B細(xì)胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體雜交瘤細(xì)胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第15頁單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟圖解字母按正確次序連接起來。次序是？

動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第16頁3、單克隆抗體應(yīng)用診療試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第17頁“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥品單抗導(dǎo)向，藥品為彈頭治療疾病和運載藥品主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥品，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第18頁兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合新方法－－滅活病毒一個新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高優(yōu)勢本節(jié)小結(jié)重點動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第19頁1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合是（）A.經(jīng)過免疫B淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫T淋巴細(xì)胞B.不經(jīng)過免疫T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過免疫B淋巴細(xì)胞2、單克隆抗體是由以下哪種細(xì)胞產(chǎn)生（）A.B淋巴細(xì)胞B．T淋巴細(xì)胞C．骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞AD動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第20頁3、用動物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，以下試驗步驟中錯誤是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，取得能產(chǎn)生抗體B淋巴細(xì)胞B．用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C．用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D．篩選雜交細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第21頁4、(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)

細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個_____________過程，該過程進(jìn)行慣用_____________或_____________誘導(dǎo)。(3)假設(shè)僅考慮某兩個細(xì)胞融合，則可形成

種類型C細(xì)胞，所以需用__________培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞名稱是

，其特點是_________________________________________。效應(yīng)B

抗原

細(xì)胞融合

聚乙二醇

選擇性

3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體雜交瘤細(xì)胞滅活病毒動物細(xì)胞融合與單克隆抗體專業(yè)知識專家講座第22頁(4)在培養(yǎng)時經(jīng)過________分裂方式大量繁殖。D細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意條件是（要求答5項）__________________________________________________________________________________________。（5）單克隆抗體在疾病診療、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點是___