藥物分析yzg專題知識講座

第六章

芳酸類非甾體抗炎藥品分析

藥物分析yzg專題知識講座第1頁第六章

芳酸類非甾體抗炎藥品分析

藥物分析yzg專題知識講座第2頁備用圖片藥物分析yzg專題知識講座第3頁第六章

芳酸類非甾體抗炎藥品分析

經(jīng)典藥品結構與性質

判別試驗特殊雜質及其檢驗法含量測定4123體內藥品分析5藥物分析yzg專題知識講座第4頁第六章熟悉:

主要芳酸類非甾體抗炎藥品雜質結構,危害,檢驗方法與程度了解:

影響芳酸類非甾體抗炎藥品穩(wěn)定性主要原因,體內樣品與臨床監(jiān)測掌握:

芳酸類非甾體抗炎藥結構和性質 主要芳酸類藥品判別,檢驗和含量測定原理與特點藥物分析yzg專題知識講座第5頁概述非甾體抗炎藥NSAIDs

判別,檢驗含量測定;體內分析基本性質基本結構作用與臨床三價鐵顯色;UV,IR,LC中間體或水解產物酸堿滴定;UV;HPLC體內過程與分析芳基取代羧酸同具游離羧基和苯環(huán)藥品特點結構特點理化特征分析方法酸性;水解性;光譜特征基團(酚)/元素(硫)特征抗炎,抗風濕,止痛,退熱

關節(jié)炎,發(fā)燒,慢性疼痛/R1藥物分析yzg專題知識講座第6頁概述結構特點藥品特點理化特征分析方法作用臨床基本結構基本性質判別,檢驗含量測定;體內分析抗炎,抗風濕,

止痛,退熱關節(jié)炎,發(fā)燒,

慢性疼痛芳基取代羧酸游離羧基和苯環(huán)酸性;水解性;

光譜特征基團(酚)/元素(硫)特征Fe3+;UV,IR,LC中間體或水解產物酸堿滴定;UV;HPLC體內過程與分析非甾體抗炎藥(NSAIDs)是一類不含有甾體骨架抗炎藥,是當前臨床使用最多藥品種類之一藥物分析yzg專題知識講座第7頁第一節(jié)

經(jīng)典藥品結構與性質一、經(jīng)典藥品與結構特點

二、主要理化性質藥物分析yzg專題知識講座第8頁一、經(jīng)典藥品與結構特點

羧基狀態(tài)

游離: 水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳, 甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛鹽/酯:雙氯芬酸鈉,雙水楊酯酰胺: 吡羅昔康,美洛昔康含有苯環(huán)和羧基水楊酸阿司匹林雙水楊酯二氟尼柳藥物分析yzg專題知識講座第9頁一、經(jīng)典藥品與結構特點

苯環(huán)結構特征鄰羥基苯甲酸:

水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳鄰胺基苯甲酸:

甲芬那酸二苯甲酮:

酮洛芬羥基不飽和酮:

吡羅昔康,美洛昔康雜環(huán):

吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康特殊元素:二氟尼柳(氟);

雙氯芬酸鈉/吲哚美辛(氯)

吡羅/美洛昔康(硫)

對乙酰氨基酚尼美舒利藥物分析yzg專題知識講座第10頁二、主要理化性質

(一)酸性較強酸性:原料藥可在中性乙醇或甲醇,丙酮等 水溶性有機溶劑中,用氫氧化鈉直接滴定雙氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不與苯環(huán)直接相連,酸性較弱吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利,對乙酰氨基酚: 酰胺結構,無顯著酸性

pKa=3.492.954.26藥物分析yzg專題知識講座第11頁二、主要理化性質

(二)水解性酯鍵:

阿司匹林/雙水楊酯酰胺鍵:

吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利, 對乙酰氨基酚水解反應及其產物特征反應——判別水解可快速,定量——含量測定(剩下堿量法)美洛昔康——定過量氫氧化鈉水解 剩下氫氧化鈉用鹽酸回滴定美洛昔康藥物分析yzg專題知識講座第12頁二、主要理化性質

(三)吸收光譜特征紫外特征光譜:

判別;含量均勻度,溶出度/釋放度紅外特征光譜

:

判別酮洛芬酚羥基:

對乙酰氨基酚,水楊酸與Fe3+顯色——判別

二苯甲酮:

酮洛芬與苯肼縮合顯色——判別

硫: 美洛昔康熱分解后產生硫化氫 與醋酸鉛生成黑色硫化鉛——判別(四)基團/元素特征藥物分析yzg專題知識講座第13頁第二節(jié)

判別試驗一、與三氯化鐵反應二、縮合反應三、重氮化-偶合反應四、氧化反應五、水解反應六、特征元素反應七、光譜法八、色譜法藥物分析yzg專題知識講座第14頁一、與三氯化鐵反應中性或弱酸性(pH值4~6)條件下進行,強酸性溶液中配位化合物分解阿司匹林加水煮沸雙水楊酯在氫氧化鈉試液中煮沸水解生成水楊酸,與三氯化鐵試液顯紫堇色二氟尼柳于乙醇中與三氯化鐵試液呈深紫色1.水楊酸反應藥物分析yzg專題知識講座第15頁一、與三氯化鐵反應對乙酰氨基酚:水溶液加三氯化鐵試液顯藍紫色吡羅昔康(三氯甲烷):與三氯化鐵顯玫瑰紅色美洛昔康顯淡紫紅色

烯醇式羥基含有酚羥基性質,與FeCl3生成紅色配位化合物2.酚羥基反應藥物分析yzg專題知識講座第16頁二、縮合反應酮洛芬二苯甲酮,在酸性下與二硝基苯肼縮合生成橙色偶氮化合物沉淀藥物分析yzg專題知識講座第17頁三、重氮化-偶合反應對乙酰氨基酚酸中水解生成對氨基酚,游離芳伯氨基與亞硝酸鈉試液重氮化,重氮鹽再與堿性β-萘酚偶合生成紅色偶氮化合物藥物分析yzg專題知識講座第18頁四、氧化反應甲芬那酸:溶于硫酸,被重鉻酸鉀氧化顯深藍色→隨即變?yōu)樽鼐G色吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下與重鉻酸鉀溶液共熱,被氧化顯紫色在鹽酸溶液中與亞硝酸鈉溶液反應顯綠色,放置后漸變黃色藥物分析yzg專題知識講座第19頁五、水解反應阿司匹林,水解得水楊酸鈉與醋酸鈉,酸化生成水楊酸白色沉淀;并發(fā)生醋酸臭氣雙水楊酯水解后酸化,生成白色水楊酸沉淀;2CH3COONa+H2SO4→2CH3COOH+Na2SO4藥物分析yzg專題知識講座第20頁六、特征元素反應氯判別——與堿共熱分解產生氯化物,顯氯化物判別反應雙氯芬酸鈉:與碳酸鈉熾灼灰化,加水煮沸,濾過,濾液顯氯化物判別反應

硫判別——經(jīng)高溫分解產生硫化氫氣體,遇醋酸鉛生成硫化鉛黑色沉淀美洛昔康:試管中熾灼,產生氣體使?jié)駶櫞姿徙U試紙顯黑色藥物分析yzg專題知識講座第21頁七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法最大吸收波長法:雙氯芬酸鈉溶液:276nm有最大吸收吡羅昔康片,含量測定溶液:243與334nm最大吸收最大與最小吸收波長法:布洛芬及制劑氫氧化鈉溶液:265,273nm最大吸收245,271nm最小吸收259nm肩峰

藥物分析yzg專題知識講座第22頁七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法吸光度法:甲芬那酸鹽酸-甲醇溶液:279與350nm最大吸收吸光度(20μg/ml)分別:0.69~0.74與0.56~0.60吸光度比值法:二氟尼柳鹽酸-乙醇溶液:251與315nm最大吸收吸光度比值應為4.2~4.6

藥物分析yzg專題知識講座第23頁七、光譜法(二)紅外分光光度法 阿司匹林

峰位(cm-1)歸屬3300~2300vO-H(羧基)1760,1690vC=O(羧酸酯和羧酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯環(huán))1310,1230,1180vC-O(羧酸酯和羧酸)775δAr-H(鄰位取代苯環(huán))3300~23001760,16901610~14601310~1180775藥物分析yzg專題知識講座第24頁八、色譜法(一)薄層色譜法個別藥品制劑采取溶劑提取法去除輔料后IR判別;部分藥品制劑采取TLC判別:二氟尼柳,美洛昔康等

(二)高效液相色譜法伴隨HPLC在藥品制劑含量測定中大量應用,更多應用HPLC進行制劑判別:阿司匹林等各種制劑均直接取含量測定項下統(tǒng)計HPLC色譜圖進行判別

當TLC和HPLC都有收載時:二者可任選其一 如美洛昔康片判別藥物分析yzg專題知識講座第25頁藥品名稱特殊雜質游離水楊酸與相關物質/FeCl3阿司匹林/雙水楊酯甲芬那酸二氟尼柳第三節(jié)

特殊雜質及其檢驗法2.3-二甲基苯胺相關物質

6-甲氧基-2-萘乙酮

氨基酚和對氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生對乙酰氨基酚藥物分析yzg專題知識講座第26頁一、阿司匹林與雙水楊酯(一)阿司匹林與雙水楊酯合成藥物分析yzg專題知識講座第27頁一、阿司匹林與雙水楊酯(二)阿司匹林中游離水楊酸與相關物質1.游離水楊酸:

酚羥基易被空氣(氧)逐步氧化生成淡黃,紅棕至深棕色醌型化合物藥物分析yzg專題知識講座第28頁1.游離水楊酸:ChP用水楊酸與Fe3+生成紫堇色配離子原理,用稀硫酸鐵銨溶液顯色法檢驗

供試品溶液制備過程中阿司匹林水解ChP采取1%冰醋酸甲醇溶液制備供試品溶液(防阿司匹林水解);并用RP-HPLC檢驗藥物分析yzg專題知識講座第29頁2.相關物質:阿司匹林中“相關物質”系指除“游離水楊酸”外合成原料(苯酚)及副產物藥物分析yzg專題知識講座第30頁2.相關物質:阿司匹林

水楊酸

乙酰水楊酰水楊酸a:阿司匹林供試品(10mg/ml)；b:0.5%本身對照(50g/ml)；c:0.05%本身對照(靈敏度試驗5g/ml)；d:水楊酸對照(10g/ml)；e:空白藥物分析yzg專題知識講座第31頁一、阿司匹林與雙水楊酯(三)雙水楊酯中游離水楊酸利用水楊酸與三價鐵生成有色配離子原理,用硝酸鐵溶液顯色,在530nm波優(yōu)點測定吸光度,程度為0.5%;雙水楊酯片同法檢驗,程度為1.5%

藥物分析yzg專題知識講座第32頁二、甲芬那酸(一)合成工藝甲芬那酸主要以鄰-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)為原料,在銅催化下縮合而成藥物分析yzg專題知識講座第33頁二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺檢驗ChP曾采取HPLC法檢驗: 單1雜質限量為0.1% 雜質總量為0.5%ChP要求

HPLC法檢驗:“相關物質”

GC檢驗:2,3-二甲基苯胺(0.01%)藥物分析yzg專題知識講座第34頁三、二氟尼柳(一)合成工藝原料(I)

:2,4-二氟苯胺中間體(II):2,4-二氟聯(lián)苯中間體(III)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮中間體(IV)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯中間體(V):4-(2‘,4’-二氟苯基)苯酚產品(VI):二氟尼柳藥物分析yzg專題知識講座第35頁三、二氟尼柳(二)相關物質A和B檢驗1.相關物質A檢驗——TLC(正相): 極性較小雜質 單1雜質限量為0.5%2.相關物質B檢驗——HPLC(反相): 極性較大雜質 各面積和為0.5%藥物分析yzg專題知識講座第36頁四、萘普生

(一)合成工藝原料(I)

:2-萘甲醚中間體(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中間體(III):2-羥基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸產品(IV):萘普生

藥物分析yzg專題知識講座第37頁四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它相關物質1.溶液制備供試品溶液:0.5mg/ml流動相溶液對照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(雜質I),

50μg/ml對照溶液:供試品溶液1ml+對照品溶液2ml→200ml2.程度

雜質I:

不得大于雜質I峰面積(0.1%)

其它單個雜質:

不得大于雜質I峰面積2倍(0.2%)各雜質總量:

不得大于對照溶液中萘普生峰面積(0.5%)

藥物分析yzg專題知識講座第38頁五、對乙酰氨基酚

(一)合成工藝(二)相關雜質:

對硝基酚,對氨基酚,對氯苯胺,對氯苯乙酰胺,o-乙酰 基對乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亞胺1.對氨基酚及(其它)相關物質——HPLC對氨基酚:0.005%相關物質:單個0.1%;總量0.5%2.

對氯苯乙酰胺(極性較小)——HPLC(0.005%)

藥物分析yzg專題知識講座第39頁第四節(jié)

含量測定一、酸堿滴定法二、紫外-可見分光光度法三、高效液相色譜法藥物分析yzg專題知識講座第40頁一、酸堿滴定法酸堿滴定法水解后剩下量滴定法阿司匹林

USP,BP,JP非水溶液滴定法吡羅昔康含有吡啶環(huán),顯堿性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定

剩下量滴定法美洛昔康水及與水混溶有機溶劑中難溶,溶于氫氧化鈉滴定液后鹽酸回滴定

直接滴定法水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利藥物分析yzg專題知識講座第41頁(一)直接滴定法1.測定法本品約0.4g,精密稱定,加中性乙醇(對酚酞指示液顯中性)20ml溶解后,加酚酞指示液3滴,用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定T=18.02mg2.討論滴定在不停振搖下稍快進行,防阿司匹林水解受阿司匹林水解產物水楊酸及醋酸干擾3.應用水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生及尼美舒利藥物分析yzg專題知識講座第42頁(二)剩下量滴定法1.原理美洛昔康含有與羰基共軛烯醇式羥基,含有羧酸性質,可用氫氧化鈉滴定液滴定本品甲醇,乙醇,丙酮及水中難溶,定量過量氫氧化鈉滴定液溶解后,用鹽酸滴定液回滴定2.測定法本品約0.4g,精密稱定,精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)25ml,微溫溶解,加中性乙醇(對溴麝香草酚藍指示液顯中性)100ml與指示液10滴,用鹽酸滴定液(0.1mol/L)滴定;T=35.14mg藥物分析yzg專題知識講座第43頁(三)水解后剩下量滴定法1.原理阿司匹林酯結構在堿性溶液中易水解,加入定量過量氫氧化鈉滴定液,加熱使酯鍵水解后,再用硫酸滴定液回滴定剩下氫氧化鈉滴定液

2NaOH+H2SO4→Na2SO4+2H2O2.測定法(USP32-NF27)本品約1.5g,精密稱定,加氫氧化鈉滴定液(0.5mol/L)50.0ml,緩緩煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定;T=45.40mg藥物分析yzg專題知識講座第44頁(三)水解后剩下量滴定法3.兩步滴定法——水解后剩下量滴定法改進阿司匹林片劑:水解產物水楊酸及醋酸;穩(wěn)定劑酒石酸或枸櫞酸兩步滴定法:第1步:中和,中和干擾物和阿司匹林游離羧基第2步:水解與滴定,水解后剩下量滴定法阿司匹林片含量測定方法(ChP)以下:

本品10片,精密稱定,研細,精密稱取片粉(阿司匹林0.3g),中性乙醇(酚酞指示液顯中性)20ml,振搖,加指示液3滴,滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色,精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml,加熱15min,放冷,用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定;T=18.02mg藥物分析yzg專題知識講座第45頁(三)水解后剩下量滴定法含量計算 供試品中阿司匹林含量,由水解時消耗堿量計算第1步:中和時,阿司匹林游離羧酸中和第2步:水解后剩下量滴定法時阿司匹林與氫氧化鈉反應摩爾比為1:1滴定度:T=0.1×(1/1)×180.16=18.02(mg/m1)片劑含量:藥物分析yzg專題知識講座第46頁(四)非水溶液滴定法1.原理吡羅昔康含有吡啶環(huán),顯堿性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定2.測定法本品約0.2g,精密稱定,加冰醋酸20ml使溶解,加結晶紫指示液1滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍綠色,并將滴定結果用空白試驗校正T=33.14mg/ml藥物分析yzg專題知識講座第47頁二、紫外-可見分光光度法(一)直接分光光度法二氟尼柳,美洛昔康,尼美舒利制劑,對乙酰氨基酚及其部分制劑;二氟尼柳膠囊含量測定:精密稱取內容物適量(二氟尼柳0.1g),置100ml量瓶,加溶劑(0.1mol/L鹽酸乙醇溶液)適量,超聲處理10min,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液5ml,置l00ml量瓶,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,在315nm波優(yōu)點測定吸光度;另取二氟尼柳對照品,用溶劑溶解并定量稀釋制成每1ml中約含50μg溶液作為對照品溶液,同法測定,計算式中,D為供試品溶液稀釋體積(ml,

D=100100/5=);標示量為膠囊劑規(guī)格(mg/粒)

藥物分析yzg專題知識講座第48頁二、紫外-可見分光光度法(二)柱分配色譜-紫外分光光度法

USP32-NF27則采取柱色譜分離法消除阿司匹林膠囊和栓劑中輔料及降解產物干擾柱分配色譜-紫外分光光度法不需特殊儀器,結果重現(xiàn)性很好,但操作較繁瑣藥物分析yzg專題知識講座第49頁三、高效液相色譜法阿司匹林栓含量測定:

取本品5粒,精密稱定,置小燒杯中,在40~50℃水浴上微溫熔融,在不停攪拌下冷卻至室溫,精密稱取適量(阿司匹林0.1g),置50ml量瓶中,加溶劑(1%冰醋酸甲醇溶液)適量,在40~50℃水浴中充分振搖使阿司匹林溶解,放冷,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,置冰浴中冷卻1小時,取出,快速濾過,取續(xù)濾液作為供試品貯備液;精密量取供試品貯備液5ml,置100ml量瓶中,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,精密量取10μl進樣分析;按外標法以峰面積計算

流動相中添加冰醋酸是為抑制阿司匹林解離,消除色譜峰拖尾;同時,流動相及供試液中醋酸也可抑制阿司匹林水解D為稀釋體積(ml,D=50100/5=1000);標示量為栓劑規(guī)格(mg/支)

藥物分析yzg專題知識講座第50頁第五節(jié)

體內藥品分析一、 血漿中阿司匹林與水楊酸

HPLC測定法二、 血漿中布洛芬HPLC測定 與立體選擇性代謝研究

藥物分析yzg專題知識講座第51頁一、血漿中阿司匹林與水楊酸測定ASA在體內快速轉化為活性代謝物(SA),深入轉化為非活性代謝物水楊尿酸及葡糖醛酸結合物在進行阿司匹林藥代動力學研究時,要求同時監(jiān)測原形藥品ASA和活性代謝物SA質譜條件

離子化方式:

電噴霧(ESI)離子源,負離子模式;

掃描方式:

多反應監(jiān)測(MRM)ASA:m/z178.9→136.8SA:m/z

136.9→92.84-ABS(內標物):

m/z

162.9→118.9藥物分析yzg專題知識講座第52頁一、血漿中阿司匹林與水楊酸測定血漿樣品處理:

血漿200μl,置1.5ml離心管中,加1mol/L鹽酸溶液50μl和內標溶液200μl,混勻,加入乙酸乙酯600μl,振蕩1min,離心(13000r/min)5min;取上層清液,吹干,加流動相300μl復溶,取10μl進樣空白血漿與定量下限QC樣品色譜圖藥物分析yzg專題知識講座第53頁一、血漿中阿司匹林與水楊酸測定結果與討論

人血漿中阿司匹林和水楊酸線性范圍

25~10000ng/ml(r≥0.990)定量下限(LOQ)為25ng/ml日內和日間精密度RSD≤15%

準確度RE≤±15%適合用于阿司匹林人體藥代動力學研究藥物分析yzg專題知識講座第54頁二、布洛芬立體選擇性代謝

布洛芬(Ibuprofen,IBP)左、右旋光異構體在體內藥理活性及代謝過程存在顯著差異體外右旋體藥理作用是左旋體160倍,體內僅為1.4倍;主要原因是在體內無活性R-(-)-布洛