第六章動(dòng)物人工繁殖

動(dòng)物人工繁殖動(dòng)物人工繁殖技術(shù)包括有性生殖和無性生殖兩條途徑。前者的關(guān)鍵技術(shù)是人工受精與體外受精，后者的關(guān)鍵技術(shù)是核移植，兩者都涉及胚胎培養(yǎng)與移植。動(dòng)物人工繁殖的基礎(chǔ)是胚胎工程。胚胎工程是通過在生殖細(xì)胞、胚胎細(xì)胞水平上的顯微操作技術(shù)，來定向控制、改造和創(chuàng)造新遺傳性狀的技術(shù)，是動(dòng)物細(xì)胞工程的拓展和延伸，又稱發(fā)育工程（revelopmentaltechnology）?，F(xiàn)在是1頁\一共有52頁\編輯于星期二胚胎工程的發(fā)展歷史1891年，英國人希普首次在兔子身上成功的進(jìn)行了核移植。20世紀(jì)30年代，陸續(xù)在鼠、兔、羊、豬、牛和馬進(jìn)行胚胎移植實(shí)驗(yàn)，相繼獲得成功。20世紀(jì)60年代以來，隨著胚胎移植技術(shù)的不斷成熟和規(guī)范化，以及一系列新方法的建立，胚胎工程進(jìn)展迅速，以日本、澳大利亞和加拿大發(fā)展最快。1987年，美國用家貓做代理母親，移植了一只瀕臨滅絕的珍貴貓的受精卵，成功獲得試管貓。我國自20世紀(jì)70年代開始發(fā)展該技術(shù)，進(jìn)展也較迅速，但與世界先進(jìn)國家相比，還存在較大差距。1977年，英國科學(xué)家首次創(chuàng)造了世界上第一個(gè)試管嬰兒?，F(xiàn)在是2頁\一共有52頁\編輯于星期二體外受精和胚胎移植技術(shù)現(xiàn)在是3頁\一共有52頁\編輯于星期二胚胎移植的發(fā)育早期胚胎發(fā)育的三個(gè)階段：1）桑椹胚：卵裂球分裂到16-32細(xì)胞時(shí)，成為一緊密的細(xì)胞團(tuán)，稱為桑椹胚。在2-8個(gè)細(xì)胞時(shí)，每個(gè)細(xì)胞均具有全能性。2）囊胚：在胚胎內(nèi)形成空腔，逐漸變大成為囊胚腔，此時(shí)一端細(xì)胞個(gè)體較大，形成密集（三層）的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（ICM），將來發(fā)育成胚體。另一端只有環(huán)透明帶一層細(xì)胞，稱滋養(yǎng)層，將來發(fā)育成胚膜。3）原腸胚：囊胚進(jìn)一步發(fā)育，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)外的滋養(yǎng)層退化，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)裸出形成胚盤，在胚盤下方衍生出內(nèi)胚層，此時(shí)胚胎稱原腸胚。現(xiàn)在是4頁\一共有52頁\編輯于星期二胚胎工程---體外受精（IVF）（第一步驟）精子獲能是精子獲得穿透卵子透明帶能力的生理過程，是精子在受精前必須經(jīng)歷的一個(gè)重要階段。精子獲能分為體內(nèi)獲能與體外獲能體內(nèi)獲能：精子在附睪內(nèi)已經(jīng)獲得了受精能力，但由附睪分泌的一種物質(zhì)附于精子表面，抑制了他的受精能力，這種物質(zhì)被稱為去能因子。去能因子是頂體酶的抑制劑。體外獲能：精子通過用子宮液、卵泡液、子宮內(nèi)膜提取液或血清等在體外培養(yǎng)獲能的過程。2、卵子回收及成熟培養(yǎng)3、卵子和精子的體外受精（invitrofertilizationIVF）受精成功的標(biāo)志至少是看受精卵是否可以發(fā)育至囊胚期階段4、受精卵的體外發(fā)育及體外培養(yǎng)現(xiàn)在是5頁\一共有52頁\編輯于星期二體外受精的方式：1、共培養(yǎng)體外受精卵子和精子在體外人工環(huán)境中共同培養(yǎng)2、透明帶注射法體外將精子通過微注射器注射入卵細(xì)胞的透明帶下的卵間隙中使卵細(xì)胞受精。3、卵漿內(nèi)精子注射法體外將精子通過微注射器注射入卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中使卵細(xì)胞受精。4、透明帶修飾法人工破壞卵細(xì)胞的透明帶?，F(xiàn)在是6頁\一共有52頁\編輯于星期二胚胎工程---胚胎移植（ET）（第二步驟）胚胎移植（embryotransfer）指從某個(gè)體采胚或?qū)⒃嚬軆?nèi)的受精卵（8細(xì)胞以上或囊胚期）移植到另一個(gè)體的輸卵管或子宮中去的技術(shù)。提供胚胎或受精卵的母體稱為“供體”。接受胚胎或受精卵的母體稱為“受體”，又稱“代孕母體”或“代理母親”。來自供體的胚胎能夠在受體的子宮著床，并繼續(xù)生長和發(fā)育，最后產(chǎn)下供體的后代，即是所謂的“借腹懷胎”。現(xiàn)在是7頁\一共有52頁\編輯于星期二荷爾蒙FSH(促卵泡激素)人工環(huán)境下通過藥物（FSH）刺激卵巢分泌產(chǎn)生卵細(xì)胞超數(shù)排卵：在母畜發(fā)情周期的適當(dāng)時(shí)間用人工方法促使其有更多的卵泡發(fā)育、成熟、排卵的一項(xiàng)技術(shù)。方法是注射促性腺激素，如孕酮、雌二醇、促卵泡激素、促黃體激素、促性腺激素釋放激素等。現(xiàn)在是8頁\一共有52頁\編輯于星期二LH是黃體生成素，HCG是促絨毛性腺激素超排卵處理的母體在停藥后24-48小時(shí)后可進(jìn)行人工受精，以后約在3-7天從母體采集受精卵或胚胎?，F(xiàn)在是9頁\一共有52頁\編輯于星期二體外受精生殖核胚囊胚胎的采集、鑒別正常發(fā)育的胚胎，其中細(xì)胞(卵裂球)外形整齊，大小一致，分布均勻，外膜完整。無卵裂現(xiàn)象(未受精)和異常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。精子獲能現(xiàn)在是10頁\一共有52頁\編輯于星期二胚胎移植同步發(fā)情指使供體和受體同步發(fā)情，即處于相同的生殖周期。胚胎移植外科手術(shù)法或非手術(shù)法現(xiàn)在是11頁\一共有52頁\編輯于星期二胚胎冷凍保存技術(shù)：在冷凍細(xì)胞的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，包括精子、卵母細(xì)胞和早期胚體的冷凍保存。1、短期臨時(shí)保存：指將暫時(shí)不使用的胚胎在37℃培養(yǎng)液中保存，或在活體同種或異種動(dòng)物的輸卵管內(nèi)保存1-2天。也可將胚胎置0-4℃低溫下保存2-3天。2、長期冷凍保存：有儀器程序逐步降溫冷凍和徒手操作的快速玻璃化冷凍。前者利用冷凍儀按編程由室溫逐步降溫至零下196℃（液氮）保存。所用冷凍劑一般為二甲基亞砜、氨基酸、甘油等。后者是直接加入高濃度的抗凍液（玻璃化冷凍保護(hù)液）急速冷凍，有液體轉(zhuǎn)化為透明膠狀固體。現(xiàn)在是12頁\一共有52頁\編輯于星期二試管嬰兒現(xiàn)在是13頁\一共有52頁\編輯于星期二

1977年7月25號(hào)世界上第一例試管嬰兒——路易絲.布朗在英國呱呱墜地；1978年，印度創(chuàng)造了世界上第二例試管嬰兒。至1987年，有6000多個(gè)，1996——1997年間美國就有42463個(gè)。我國大陸也于1988年3月10號(hào)，在北京醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科手術(shù)室誕生了第一個(gè)試管嬰兒——鄭萌珠。培育試管嬰兒，包括體外受精（invitrofertiliztion）和胚胎移植（embryotransfer，ET）兩個(gè)步驟。即在試管中將精子與卵結(jié)合受精，2·5天后，把發(fā)育到8細(xì)胞期的胚胎移植到子宮中去，發(fā)育成長，直至足月分娩。（胚胎發(fā)育的第7—12天，即原腸化階段，是人生最關(guān)鍵的時(shí)刻）。此項(xiàng)技術(shù)主要適用于各種女性原因的不孕、免疫性不孕、輕度少精癥等?，F(xiàn)在是14頁\一共有52頁\編輯于星期二試管嬰兒的三個(gè)階段：第一代試管嬰兒：最早成功的常規(guī)技術(shù)。第二代試管嬰兒：采用顯微受精技術(shù)將單個(gè)精子注射進(jìn)卵細(xì)胞內(nèi)使其受精。適用于男性原因的不孕，如少精、弱精等。1996年，我國第二代試管嬰兒（ICSI）在中山醫(yī)科大學(xué)獲得成功。第三代試管嬰兒：對(duì)體外受精的胚胎取出細(xì)胞進(jìn)行遺傳學(xué)診斷后再行胚胎移植。我國第三代試管嬰兒（PGD）在中山醫(yī)科大學(xué)獲得成功。2000年3月，我國首例超快速冷凍胚胎移植的試管嬰兒在湖南醫(yī)科大學(xué)人類生殖工程研究室誕生，標(biāo)志著我國在該領(lǐng)域的研究已進(jìn)入世界先進(jìn)行列。進(jìn)一步，美國、日本、臺(tái)灣正研制多胞胎和“人造子宮”以完成懷孕全過程?，F(xiàn)在是15頁\一共有52頁\編輯于星期二（一）克隆概念的由來

（二）克隆研究的主要內(nèi)容

（三）克隆的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史

（四）克隆的技術(shù)方法及制備程序

（五）克隆技術(shù)的應(yīng)用及意義

（六）克隆技術(shù)存在的問題

（七）驚世駭俗的計(jì)劃——“克隆人”生物克隆技術(shù)現(xiàn)在是16頁\一共有52頁\編輯于星期二克隆概念的由來“一個(gè)細(xì)菌一分為二；一根葡萄枝切成十段就可能變成十株葡萄；仙人掌切成幾塊，每塊落地就生根；一株草莓依靠它沿地“爬走”的匍匐莖，一年內(nèi)就能長出數(shù)百株草莓苗；人們剪下植物枝條，扦插到土里，不久就會(huì)發(fā)芽，長出新的植株，這些植株是遺傳物質(zhì)組成完全相同的植株，這就是克隆”。凡此種種，都是生物靠自身的一分為二或自身的一小部分的擴(kuò)大來繁衍后代，這就是無性繁殖，無性繁殖的英文名稱叫“Clone”，譯音為“克隆”。在動(dòng)物界也有無性繁殖，不過多見于非脊椎動(dòng)物，如原生動(dòng)物的分裂繁殖、尾索類動(dòng)物的出芽生殖等。但對(duì)于高級(jí)動(dòng)物，在自然條件下，一般只能進(jìn)行有性繁殖，要使其進(jìn)行無性繁殖，科學(xué)家必須經(jīng)過一系列復(fù)雜的操作程序。如用未分化的胚胎細(xì)胞進(jìn)行核移植稱為胚胎細(xì)胞克?。╡mbryonic-cell-cloning）；用已分化的體細(xì)胞（即非生殖細(xì)胞）。進(jìn)行核移植稱之體細(xì)胞克隆（somatic-cell-cloning）?，F(xiàn)在是17頁\一共有52頁\編輯于星期二克隆研究的主要內(nèi)容

1供體細(xì)胞的來源和特性胚胎細(xì)胞——發(fā)育至32-64個(gè)卵裂球的胚胎細(xì)胞；胚胎干細(xì)胞——來自胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)；成年動(dòng)物體細(xì)胞

2細(xì)胞質(zhì)受體的來源和特性具有全能性的細(xì)胞核是否具有重編程的能力，主要取決于胞質(zhì)的性質(zhì)。成熟卵母細(xì)胞是目前公認(rèn)的成功受體。3重構(gòu)胚核質(zhì)適應(yīng)機(jī)理核質(zhì)間細(xì)胞周期是否同期化、核重編程的能力如何和核質(zhì)相適應(yīng)的機(jī)制等。4克隆技術(shù)支持體系的研究包括供核細(xì)胞和胞質(zhì)受體的采集技術(shù)和培養(yǎng)體系的研究；核移植操作技術(shù)及有關(guān)設(shè)備的研究。5重構(gòu)胚胎的體內(nèi)和體外培養(yǎng)技術(shù)6克隆技術(shù)的使用化研究現(xiàn)在是18頁\一共有52頁\編輯于星期二克隆的理論基礎(chǔ)及發(fā)展史1932年，英國作家赫胥黎的小說《美麗新世界》中預(yù)言人類科技發(fā)展到足以復(fù)制自身之時(shí)，便是世界陷入混亂之日。

1938年，德國胚胎學(xué)家提出動(dòng)物克隆的設(shè)想：即從發(fā)育后期的胚胎中取出細(xì)胞核，將其移植到一個(gè)卵子中去，使其繁殖。

1950年，首次成功地冷藏牛的精于，稍后與母牛的卵子進(jìn)行了人工授精。

1951年，科學(xué)家培育出第一個(gè)人體腫瘤細(xì)胞系。

1952年，皮科克醫(yī)生宣稱他找到了370多種不用精子生殖海膽的方法。

1952年，第一次進(jìn)行動(dòng)物克隆，羅伯特·布瑞格和托馬斯·金對(duì)小蝌蚪的細(xì)胞核進(jìn)行無性繁殖。1953年，沃森和克里克發(fā)表了震驚世界的千字論文，揭開了生命遺傳物質(zhì)即DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。

現(xiàn)在是19頁\一共有52頁\編輯于星期二1970年，英國科學(xué)家約翰·戈德和同事利用經(jīng)過培養(yǎng)的成年青蛙表皮細(xì)胞核克隆成功成年青蛙。

1976年，美國設(shè)立“重組DNA管理委員會(huì)”，負(fù)責(zé)管理人體基因工程。

1977年，數(shù)百名美國人來到美國國家科學(xué)院舉行示威，其口號(hào)是：“我們不要克隆”，“不要碰我的基因”!這是第一次對(duì)生物技術(shù)提出抗議。

1978年，由英國科學(xué)家史德彼逑和愛德華茲共同培育出第一個(gè)試管嬰兒--路易斯。

1981年，日內(nèi)瓦大學(xué)的研究人員利用胚胎移植技術(shù)培育出正常的老鼠。

1983年，第一次成功地進(jìn)行了人類胚胎由一個(gè)母體向另一個(gè)母體的轉(zhuǎn)移。

1986年，作為人工授精試驗(yàn)的志愿者懷特·海德懷胎十月產(chǎn)下一女嬰，但當(dāng)她提出要撫養(yǎng)“自己的孩子”時(shí)，遭到了拒絕。

1986年，英國科學(xué)家首次利用胚胎細(xì)胞細(xì)胞核移植技術(shù)克隆出一頭羊?，F(xiàn)在是20頁\一共有52頁\編輯于星期二1988年，格雷納德生物公司成功地利用改進(jìn)型的細(xì)胞核移植技術(shù)來克隆奶牛。

1991年，美國國家衛(wèi)生與醫(yī)學(xué)博物館宣布，打算復(fù)制林肯身體組織樣本。

1991年，文特爾提出要對(duì)人體大腦中發(fā)現(xiàn)的337個(gè)基因擁有專利保護(hù)權(quán)和所有權(quán)。

1993年，電影《株羅紀(jì)公園》“克隆”了一大堆恐龍。

1994年，美國利用牛胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)克隆牛成功。

1994年，中國利用山羊胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)克隆山羊成功。

1996年，一部令人迷惑的電視動(dòng)畫片《蜘蛛人》創(chuàng)造了一個(gè)克隆蜘蛛人的英雄形象。

1997年，英國胚胎學(xué)家維爾穆特和他的同事宣稱用母羊的乳腺細(xì)胞克隆成功了第一只克隆羊。開創(chuàng)了成年哺乳動(dòng)物克隆的先河。

1998年，克隆羊“多利”當(dāng)上了媽媽，生下了一只名叫“邦尼”的小羊?，F(xiàn)在是21頁\一共有52頁\編輯于星期二動(dòng)物克隆研究的三個(gè)階段

1、胚胎細(xì)胞克隆階段1981年，IIImensee和Hoppe報(bào)道他們用小鼠的正常囊胚或孤雌活化囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞作為供核體，直接注入去掉雌雄原核的受精卵胞質(zhì)中，重構(gòu)胚體外發(fā)育到桑葚胚或囊胚后移植寄母子宮，獲得了克隆小鼠，這是在哺乳類第一次用胚胎細(xì)胞進(jìn)行核移植獲得成功。1983年，美國科學(xué)家利用核移植技術(shù)結(jié)合細(xì)胞融合方法獲得了克隆小鼠。1986年，英國的Willadsen用綿羊的8－16個(gè)細(xì)胞階段的胚胎細(xì)胞作供體進(jìn)行核移植，首次應(yīng)用電融合的方法克隆出一只小羊。此后,其他科學(xué)家也相繼成功地克隆出小鼠、綿羊、牛、兔豬和猴等。我國科學(xué)家也在20世紀(jì)90年代成功開展了胚胎細(xì)胞克隆兔、山羊、小鼠、牛和豬等研究。以上這些克隆實(shí)驗(yàn)中所用供核細(xì)胞均屬發(fā)育至不同階段的胚胎細(xì)胞。現(xiàn)在是22頁\一共有52頁\編輯于星期二2、同種體細(xì)胞克隆階段1997年2月，英國羅斯林研究所Wilmut等人宣布他們用6歲成年羊的高度分化的乳腺細(xì)胞進(jìn)行了核移植，成功地獲得了克隆羊“多莉”。1998年5月，美國科學(xué)家Robl的研究組利用胎兒成纖維細(xì)胞克隆出了3頭牛，而且攜帶了轉(zhuǎn)移的基因。1998年7月，日本科學(xué)家Dato等用牛的輸卵管細(xì)胞克隆出了8頭小牛。1998年7月，美國夏威夷大學(xué)Yanagimachi領(lǐng)導(dǎo)的研究小組獲得小鼠卵丘細(xì)胞進(jìn)行克隆再克隆小鼠成功的結(jié)果。1999年6月，Yanagimachi的研究小組又利用成年雄性小鼠尾尖的成纖維細(xì)胞為供核體細(xì)胞成功地克隆出了一只雄性小鼠，這也是第一只供體細(xì)胞不是來源于雌性動(dòng)物被克隆的動(dòng)物。此后，同種體細(xì)胞克隆山羊、豬、貓和兔也都相繼誕生。我國體細(xì)胞克隆山羊和克隆牛不論雌的還是雄的也都已獲得成功。在同種體細(xì)胞克隆研究中。所用供核體細(xì)胞為高度分化的體細(xì)胞?，F(xiàn)在是23頁\一共有52頁\編輯于星期二3、異種體細(xì)胞克隆階段異種體細(xì)胞克隆是將一種動(dòng)物的體細(xì)胞核移植到另一種動(dòng)物的去核（遺傳物質(zhì)）卵母細(xì)胞中。由于瀕危物種的個(gè)體數(shù)量少，很難提供用于克隆的卵母細(xì)胞和代孕受體，這就促使科學(xué)家提出了異種克隆的設(shè)想。異種克隆研究面臨著許多問題，如體細(xì)胞核能否在異種卵胞質(zhì)中去分化并支持早期胚泡發(fā)育？異種核質(zhì)能否相容？異種重構(gòu)胚能否著床并進(jìn)行全程發(fā)育等問題。1999年，中科院動(dòng)物所實(shí)驗(yàn)室將成年大熊貓?bào)w細(xì)胞作為供核體細(xì)胞移植到去核（遺傳生物）日本大耳白兔卵母細(xì)胞中成功地構(gòu)建異種重構(gòu)胚，體外培養(yǎng)獲得孵化囊胚。2001年將重構(gòu)胚移植寄母子宮，獲得了著床的重大進(jìn)展。2002年，不僅異種重構(gòu)胚能夠在異種寄母子宮中著床，而且還能發(fā)育，這是異種克隆大熊貓研究中攻克的最后一個(gè)難題中的最新進(jìn)展。美國（1952年前）→英國（1963年）→中國（1970年前后）→英國

第一階段第二階段第三階段現(xiàn)在是24頁\一共有52頁\編輯于星期二芬多席特白面羊（6歲）蘇格蘭黑面羊乳腺上皮細(xì)胞（凍存3個(gè)月）卵細(xì)胞細(xì)胞核

取出細(xì)胞核去核卵換核卵細(xì)胞體外培養(yǎng)代孕母羊“多莉”（白面羊的復(fù)制品）動(dòng)物克隆史上的豐碑——“多莉”的誕生（體細(xì)胞的克?。┈F(xiàn)在是25頁\一共有52頁\編輯于星期二Wilmut克隆“多莉”的生物學(xué)意義具有豐富的保存卵細(xì)胞和其它細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)掌握了熟練的核移植．等關(guān)鍵性技術(shù)對(duì)受精卵進(jìn)行了電刺激處理，起激活作用采用細(xì)胞同步化技術(shù)，使受體和供體細(xì)胞均處在細(xì)胞周期的G0期已經(jīng)成功的進(jìn)行了先期克隆實(shí)驗(yàn)現(xiàn)在是26頁\一共有52頁\編輯于星期二克隆的技術(shù)方法克隆的技術(shù)方法主要指以細(xì)胞核移植為核心技術(shù)的無性繁殖技術(shù)。細(xì)胞核移植技術(shù)：是一種利用顯微操作技術(shù)將一種動(dòng)物的細(xì)胞核移入同種或異種動(dòng)物的去核成熟卵內(nèi)的精細(xì)操作技術(shù)。包括胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植兩種。通過此技術(shù)可獲得核質(zhì)雜種?，F(xiàn)在是27頁\一共有52頁\編輯于星期二（1）受體細(xì)胞的去核：受體為成熟的卵細(xì)胞。盲吸去核法：用細(xì)胞骨架松弛劑（細(xì)胞松弛素或秋水仙素）處理卵母細(xì)胞，固定卵母細(xì)胞，吸管刺入透明帶，吸取核輕輕拉出透明帶，完成卵母細(xì)胞去核。功能去核法：通過紫外照射或者激光照射使染色體失活而達(dá)到去核的目的。化學(xué)誘導(dǎo)去核法：用脫羰秋水仙素處理減數(shù)分裂2期的卵母細(xì)胞使其排放第二極體。細(xì)胞核移植的技術(shù)要點(diǎn)第二極體：動(dòng)物的卵原細(xì)胞減數(shù)第一次分裂結(jié)束形成的兩個(gè)子細(xì)胞中的大細(xì)胞叫次級(jí)卵母細(xì)胞，小的叫第一極體（1個(gè)）；減數(shù)第二次分裂完形成的4個(gè)子細(xì)胞中那1個(gè)大細(xì)胞叫卵細(xì)胞，3個(gè)小的叫第二極體（3個(gè)）?，F(xiàn)在是28頁\一共有52頁\編輯于星期二（2）供體細(xì)胞的準(zhǔn)備：供體通常選用胚胎細(xì)胞（發(fā)育至32-64個(gè)卵裂球的胚胎細(xì)胞）和胚胎干細(xì)胞（來自胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）以及成年動(dòng)物體細(xì)胞。供體細(xì)胞通常采用處于G0期的細(xì)胞。G0期細(xì)胞又稱為“靜止細(xì)胞”，“休止細(xì)胞”，其適合在適宜的條件下刺激進(jìn)入增殖狀態(tài)。血清“饑餓”法能夠獲得G0期的細(xì)胞?，F(xiàn)在是29頁\一共有52頁\編輯于星期二血清“饑餓”法如何使處在細(xì)胞周期不同階段上的核供體和受體處于同步狀態(tài)？血清“饑餓法”使細(xì)胞核和去核卵細(xì)胞處于細(xì)胞周期中相匹配的階段，使結(jié)合在基因（DNA）上的調(diào)控蛋白脫落下來，細(xì)胞進(jìn)入重新編程過程（reprogram,remodel

）。現(xiàn)在是30頁\一共有52頁\編輯于星期二（3）細(xì)胞移核：選擇合適的微吸管穿過透明帶注入去核卵母細(xì)胞中，避免移入過多的細(xì)胞質(zhì)、控制溫度，短時(shí)間內(nèi)完成。還可用供核細(xì)胞和卵母細(xì)胞的融合實(shí)現(xiàn)核轉(zhuǎn)移。直接注射法透明帶注射法直接注射法現(xiàn)在是31頁\一共有52頁\編輯于星期二（4）重組胚激活激活是通過某種刺激使卵子內(nèi)鈣離子濃度升高，給卵一個(gè)啟動(dòng)信號(hào)，促使細(xì)胞周期的恢復(fù)。電激活：通過電流刺激，使重組胚的核和質(zhì)進(jìn)行融合，從而激活重組胚?；瘜W(xué)激活：使用化學(xué)物質(zhì)（7%乙醇，離子霉素，鈣離子載體等）刺激重組胚。（5）重組胚的培養(yǎng)和移植重組胚可以采用體外培養(yǎng)和體內(nèi)培養(yǎng)兩種方式。體外培養(yǎng)是將重組胚在特定培養(yǎng)液中培養(yǎng)至囊胚，選擇優(yōu)質(zhì)胚移植入同期的受體中繼續(xù)發(fā)育的過程。（6）核移植后代的鑒定常用分子生物學(xué)方法現(xiàn)在是32頁\一共有52頁\編輯于星期二根據(jù)細(xì)胞核的來源不同，一般分為胚胎細(xì)胞核移植法、胚胎干細(xì)胞移植法、胎兒成纖維細(xì)胞移植法和體細(xì)胞核移植法，其基本程序大體一致?？寺?dòng)物的制備程序1）胚胎細(xì)胞核移植法：將未著床的早期胚胎分散成單個(gè)細(xì)胞，然后分別取核進(jìn)行核移植，發(fā)育成胚胎后再行胚胎移植、發(fā)育分娩。也可通過細(xì)胞融合法將供體核移入去核卵的方法。2）胚胎干細(xì)胞移植：首先制作胚胎干細(xì)胞系，再進(jìn)行細(xì)胞核移植，可克隆出更多的動(dòng)物個(gè)體。此法在小鼠較為成熟。3）胎兒成纖維細(xì)胞核移植：從早期胎兒分離成纖維細(xì)胞進(jìn)行核移植。4）體細(xì)胞克隆技術(shù)：1997年2月，英國羅斯林研究所Wilmut等人宣布他們用6歲成年羊的高度分化的乳腺細(xì)胞進(jìn)行了核移植，成功地獲得了克隆羊“多莉”。榮登Science雜志評(píng)出的1997年世界十大科技成就之首。現(xiàn)在是33頁\一共有52頁\編輯于星期二核供體動(dòng)物的選擇與細(xì)胞核的獲得核受體動(dòng)物的選擇與細(xì)胞核的移出供體核的移入及原核的取出胚泡的體外試管培養(yǎng)代母的選擇與胚泡移入子宮克隆動(dòng)物的體內(nèi)發(fā)育與出生動(dòng)物克隆的過程現(xiàn)在是34頁\一共有52頁\編輯于星期二爪蟾的核移植實(shí)驗(yàn)1958年JohnGurdon和Machineer現(xiàn)在是35頁\一共有52頁\編輯于星期二現(xiàn)在是36頁\一共有52頁\編輯于星期二現(xiàn)在是37頁\一共有52頁\編輯于星期二克隆技術(shù)的實(shí)踐應(yīng)用及意義遺傳素質(zhì)完全一致的克隆動(dòng)物將有利于開展對(duì)動(dòng)物（人）生長發(fā)育、衰老和疾病健康等機(jī)理的研究拯救瀕臨滅絕的動(dòng)物（異種克隆、借腹懷胎），保護(hù)基因資源大量快速擴(kuò)大和繁殖高經(jīng)濟(jì)性狀（品質(zhì)優(yōu)良）的牲畜（禽）克隆轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，創(chuàng)建活的藥廠，提供廉價(jià)的藥品和保健品提高臨床醫(yī)學(xué)的治療手段（提供易被接受的移植器官）解決不育癥，作為生育的輔助措施——“克隆人”DNA大量拷貝（DNA克?。┛寺〖夹g(shù)最重要的用途體現(xiàn)在兩方面：一是大規(guī)模繁殖良種動(dòng)物，包括轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；二是克隆瀕危動(dòng)物?，F(xiàn)在是38頁\一共有52頁\編輯于星期二克隆技術(shù)存在的問題技術(shù)尚不成熟，成本高、效率及成活率低移植434只成體綿羊的乳腺上皮細(xì)胞核至相同數(shù)量的綿羊卵子中，產(chǎn)生了277個(gè)融合細(xì)胞（成功率為63.8%）。將此融合細(xì)胞移入母羊輸卵管成功247個(gè)（89.2%），只獲得29個(gè)發(fā)育到桑椹期或囊胚期的胚胎11.7%）。移植到13只代孕母羊的子宮中，僅有一頭羊懷胎（7.7%）最后產(chǎn)下一只小羊——“多莉”(總成功率為0.23%)。存在嚴(yán)重的生理或免疫缺陷克隆動(dòng)物的壽命問題，克隆動(dòng)物存在嚴(yán)重的早衰問題，夭折率高達(dá)75%。（多莉DNA遭損傷，明顯衰老，端粒比同齡羊縮短約20%，與6歲供體核母羊相似）現(xiàn)在是39頁\一共有52頁\編輯于星期二驚世駭俗的計(jì)劃——“克隆人”自從2003年邪教組織雷爾教派的科學(xué)家布里吉特·布瓦瑟利耶聲稱已“培育出世界第一個(gè)克隆嬰兒”后，國際輿論一直沸沸揚(yáng)揚(yáng)，科學(xué)界則始終持質(zhì)疑的態(tài)度。多數(shù)西方國家政府，領(lǐng)袖以及宗教界人士紛紛發(fā)表聲明反對(duì)克隆人，也有不少國家制定了禁止克隆人的法令。在這種情況下，依然在國際社會(huì)還有人要進(jìn)行克隆人。1998年新年伊始，美國一位物理學(xué)家公開向新聞媒體宣布了他自己輝煌的“克隆人”計(jì)劃。此人名叫理查德.錫德，70歲，哈佛大學(xué)教授。意大利胚胎學(xué)家安蒂諾里和美國一女科學(xué)家，已經(jīng)征集了200多位女性在公海的一只游船上進(jìn)行克隆人的試驗(yàn)。英國和韓國已于1998年用人的體細(xì)胞克隆成功人的胚胎，由于法律約束又銷毀了。維爾穆特1999年月初在英國宣布他領(lǐng)導(dǎo)的科研小組正著手實(shí)施克隆人體胚胎的計(jì)劃。1999年6月，美國馬薩諸州成功克隆出人的胚胎?，F(xiàn)在是40頁\一共有52頁\編輯于星期二2001年11月25日美國先進(jìn)細(xì)胞技術(shù)公司（ACT）報(bào)道了利用克隆技術(shù)培育出人類早期胚胎（4、6細(xì)胞期），這個(gè)消息一瞬間就傳遍了世界，在全球引發(fā)軒然大波，激起了各國爭議，因?yàn)樗x克隆人只有一步之遙。三位“瘋子科學(xué)家”執(zhí)意要開始克隆人美國“克隆基金”主任布瓦瑟利耶、肯塔基州列克星頓大學(xué)激素學(xué)院院長扎沃斯和意大利科學(xué)家安提諾里。是克隆人的堅(jiān)定推崇者，因此被學(xué)術(shù)界稱為“科學(xué)瘋子”。三位“瘋子科學(xué)家”最近在美國科學(xué)院的研討會(huì)上暗示，他們最近幾周將開始實(shí)施克隆人的計(jì)劃，克隆人可能明年就會(huì)問世。由于三人大肆鼓吹其克隆人計(jì)劃，結(jié)果招致了美國國家科學(xué)院大廳內(nèi)的一場對(duì)罵?，F(xiàn)在是41頁\一共有52頁\編輯于星期二克隆人的問題誰生他？鑒于這個(gè)孩子是人類試驗(yàn)品的現(xiàn)實(shí)，這位母親起到的也僅僅是一個(gè)生育機(jī)或孵化器的作用。這對(duì)母子之間的感情，在孩子出生前就被異化了。這位母親自然也就被剝奪了享受正常親情的權(quán)利，更談不到親自撫育這個(gè)孩子了。因此，母愛將是克隆人終生享受不到的奢侈品。誰養(yǎng)他？科學(xué)創(chuàng)造了他，那么養(yǎng)育他的權(quán)利自然落到了科學(xué)家以及用金錢支持這些科學(xué)實(shí)驗(yàn)的人身上。他大部分的生命將在實(shí)驗(yàn)室里度過，他將要面對(duì)的是無數(shù)未知的兇險(xiǎn)和危機(jī)以及比這些還要可怕的歸屬感的天然缺失。誰愛他？誰對(duì)他投注真誠的情感？當(dāng)然，克隆人的生命將比地球上任何一個(gè)生命都要值錢，所有科學(xué)家都會(huì)竭盡全力挽救他的生命，心理學(xué)家們會(huì)對(duì)他的任何情