fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值

fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第1頁摘要：目標探討熒光原位雜交技術(FISH)痰脫落細胞檢測診療肺癌價值。

方法分別采取FISH、常規(guī)痰脫落細胞學檢驗(常規(guī)方法)檢測60例疑似肺癌患者3、7、17染色體和9號染色體p16位點異常，以病理診療為金標準，分析FISH、常規(guī)方法及二者聯(lián)合檢測診療肺癌敏感度和特異度。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第2頁

結(jié)果病理診療為肺癌43例，肺良性病變17例。FISH與常規(guī)方法診療肺癌敏感性分別為65.1％、32.5％，P=0.003；特異性分別為76.5％、100％，P=l；常規(guī)方法+FISH聯(lián)合檢測敏感性與特異性分別為72.1％、100％，與常規(guī)方法相比，P分別=0、l。FISH與常規(guī)方法檢測對TNM分期為I~Ⅱ期敏感性分別為55.6％、22.2％，P=0.040；Ⅲ~IV期敏感性分別為72％、40％，P=0.025；常規(guī)方法+FISH聯(lián)合對TNM分期為I~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期敏感性分別為66.7％、76％，與常規(guī)方法相比，P分別=0.007、0.010。FISH、常規(guī)方法及二者聯(lián)合檢測對肺癌分期診療特異性無統(tǒng)計學差異。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第3頁

結(jié)論

FISH診療肺癌敏感性顯著高于常規(guī)方法，與常規(guī)方法聯(lián)合檢測可顯著提升痰液標本診療肺癌準確性。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第4頁

胸片、CT及痰細胞學檢驗為當前肺癌早期主要篩查伎倆，但特異性及敏感性均較低，早期漏診率高；而大個別肺癌患者就診時病情已發(fā)展到晚期，病死率高。熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)是多年發(fā)展起來一項新技術，其可快速檢測出中期分裂相／間期核細胞中染色體數(shù)目等異常改變，為肺癌遺傳學研究提供了新方法。本文就采取雙色FISH技術檢測了60例初診疑似肺癌患者痰液中脫落細胞3、7、17染色體和9號染色體P16位點異常情況，并以組織病理確診為肺癌金標準，探討FISH技術在肺癌診療中應用價值。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第5頁1.資料與方法1.1臨床資料

60例初診疑似肺癌患者，男42例，女18例；年紀46—76歲，中位年紀63歲。長久吸煙35例，有慢性咳嗽咳痰病史47例。經(jīng)病理或細胞學檢驗診療證實為肺癌43例(肺癌組)，其中鱗癌26例、小細胞肺癌6例、腺癌11例；TNM分期I一Ⅱ期(早期)18例，Ⅲ～Ⅳ期(晚期)25例。肺良性病變17例(良性組)，其中結(jié)核10例，肺炎7例。另選取同期20例體檢健康者為對照組，年紀4l一80歲，中位年紀61歲。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第6頁1.2痰脫落細胞檢驗搜集三組新鮮痰液標本(取清晨漱口后深部第2、3口痰，連續(xù)3d，留置于無菌瓶中)，每例搜集約20mL，分為兩等分各10mL，分別用于FISH檢測和常規(guī)痰脫落細胞學檢驗(常規(guī)方法)。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第7頁1.2.1FISH檢測

標本處理

1)將10ml痰液放入5~10ml消化液中，搖勻，靜置，去上清，離心，留取細胞沉淀

2)加入預熱膠原酶B，吹打，水浴，離心，去上清，再加入預熱0.075mol\LKCL低滲液

3)放入37℃水浴箱低滲30分鐘

4)取出后加入新鮮固定液5ml，混勻，靜置，離心，去上清

5)遲緩加入5ml固定液，靜置10分鐘后離心

6)去除上清液加固定液離心（重復2~3次直到細胞成份洗潔凈為止）fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第8頁玻片制備

1)滴制備好細胞樣本到載玻片上（用顯微鏡觀察細胞分布情況） 2)（胃蛋白酶工作液）在2×SSC（pH7.0）液中浸泡2分鐘 3)依次在70%、85%、100%乙醇中浸泡2分鐘，脫水fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第9頁1.2.2對照組痰脫落細胞染色體數(shù)目畸變閾值(畸變率)

對采集20例正常人痰液每組探針組合分析100個細胞。統(tǒng)計出現(xiàn)不一樣異常情況百分比，閾值=平均數(shù)(M)+3×標準差(sD)，3、7、17號染色體探針各需要建立2個閾值(1個點、≥3個點)，9p16探針需要建立3個閾值(0、1、≥3個點)。任意≥2個位點出現(xiàn)異常(3號和17號染色體出現(xiàn)非整倍增加)可判斷為陽性；一個位點有≥2種異常(9p16有0信號點異常和3信號點異常)也可判斷為陽性。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第10頁

若只有一個位點出現(xiàn)一個異常，擴充計數(shù)細胞后再重新判斷。統(tǒng)計信號種類及與之相對應細胞數(shù)目百分比并錄入圖像分析儀。在鏡下觀察雜交效果，以細胞雜交率>80％為有效標本。細胞核膜須完整，在細胞核內(nèi)可見清楚明亮橘紅色或黃綠色熒光信號，如出現(xiàn)2個或3個熒光點，兩個位點之間距離大于單個信號直徑以上，且熒光強度相近，計為含有2條或3條染色體。假如兩個信號之間距離<1個信號直徑則計數(shù)為1條染色體。

fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第11頁正常表現(xiàn)：3(紅),7(綠)染色體著絲粒fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第12頁正常表現(xiàn)：P16(紅)位點,17染色體著絲粒(綠)fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第13頁異常表現(xiàn)：出現(xiàn)染色體非整倍體fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第14頁異常表現(xiàn)：P16(紅)缺失，出現(xiàn)染色體非整倍體fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第15頁1.2.3疑似肺癌患者染色體畸變

20例正常人痰脫落細胞染色體數(shù)目畸變閾值(畸變率)為標準，判定疑似肺癌患者染色體畸變數(shù)。每組探針均組合分析100個細胞，計算異常率，判斷陽性個數(shù)。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第16頁2結(jié)果

20例正常人痰脫落細胞染色體數(shù)目畸變閾值(畸變率)見表1。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第17頁2.2診療價值

FISH與常規(guī)方法診療敏感性分別為65.1％(28/43)、32.5％(14/43)，P=0.003；特異性分別為76.5％(13/17)、100％(17/17)，P=1；聯(lián)合檢測敏感性與特異性分別為72.1％(31/43)、100％(17/17)，與常規(guī)方法比較，P分別=0、1。FISH、常規(guī)方法判斷TNM分期為I～Ⅱ期敏感性分別為55.6％(10/18)、22.2％(4/18)，P=0.040；Ⅲ～Ⅳ期敏感性分別為72％(18/25)、40％(10/25)，P=0.025；聯(lián)合檢測判斷I～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期敏感性分別為66.7％(12/18)、76％(19/25)，與常規(guī)方法比較，P分別=0.007、0.010；三種方法判斷不一樣分期患者特異性無統(tǒng)計學差異。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第18頁3討論

FISH是一個細胞遺傳學與分子生物學相結(jié)合新技術，其采取熒光素直接標識遺傳物質(zhì)DNA制備探針，與染色體或?qū)嶓w腫瘤及脫落細胞間期核進行雜交，經(jīng)過熒光顯微鏡觀察腫瘤細胞內(nèi)有沒有染色體數(shù)目和結(jié)構改變；可直接用于檢測肺癌患者脫落細胞間期核染色體改變。已經(jīng)有相關文件報道，利用支氣管鏡檢刷取標本進行FISH檢測可顯著提升早期肺癌檢出敏感性，但支氣管鏡含有一定創(chuàng)傷性。用FISH技術對痰標本進行肺癌高危人群篩查，對肺癌發(fā)生進行早期干預是當前研究熱點。多年來我國外關于FISH檢測痰脫落細胞診療肺癌報道較少，且結(jié)論差異較大。fish痰脫落細胞檢查診斷肺癌的價值第19頁

本研究FISH結(jié)果顯示，3，7，17號染色體和9號染色體p16在肺癌組與良性組均發(fā)生一定數(shù)目標畸變，說明染色體畸變在肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中起主要作用。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)ISH聯(lián)合常規(guī)方法檢測診療肺癌敏感性為72.1％，顯著高于常規(guī)方法，但特異性無統(tǒng)計學差異。相關報道，經(jīng)過支氣管鏡檢驗疑似肺癌患者得到刷檢樣本，F(xiàn)ISH及聯(lián)合方法診療肺癌敏感性顯著高于常規(guī)方法，特異性無統(tǒng)計學差異