細胞染色體顯示和分帶技術(shù)演示文稿

細胞染色體顯示和分帶技術(shù)演示文稿目前一頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點（優(yōu)選）細胞染色體顯示和分帶技術(shù)目前二頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點一、X染色質(zhì)顯示法女性：X染色質(zhì)：Barr氏體位于間期細胞核內(nèi)面，呈三角形或半月形小體，易被碳酸復(fù)紅或硫堇等染料著色結(jié)果：細胞質(zhì)不著色，細胞核染成紫紅色，核內(nèi)Barr小體呈三角形/半月形。目前三頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點二、Y染色質(zhì)顯示法男性：Y染色質(zhì)：鹽酸阿的平染色法結(jié)果：Y染色質(zhì)呈特別明亮的黃綠色熒光園點，可位于核內(nèi)任何位置，但多見于中央部位，目前四頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點第二節(jié)培養(yǎng)細胞染色體

顯示法

一、原理顯示染色體要選擇分裂中期細胞，因細胞分裂處于中期時，染色體的長短和大小恰到好處，是研究染色體的最好階段。獲得多量的中期分裂相及染色體分散均勻的理想分裂相可采取的措施如下:目前五頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點1．提高細胞分裂相數(shù)（1）細胞的選擇和處理大多數(shù)傳代細胞應(yīng)選擇對數(shù)生長期的細胞。初代淋巴細胞常用有絲分裂源PHA、ConA等刺激細胞。（2）阻抑中期分裂用秋水仙素(Colchicine)，現(xiàn)常用它的衍生物秋水仙胺(Colcemid)來破壞細胞有絲分裂中的紡錘絲，以發(fā)揮阻抑分裂中期的作用。由于DNA合成并無干擾，因此隨時間延長可截獲很多中期分裂相，一般的用量：秋水仙素0.04～0.8mg/L培養(yǎng)液，秋水仙胺0.004～0.08mg/L培養(yǎng)液。作用時間為2～6小時。目前六頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點2．促染色體分散措施

（1）低滲處理一般用0.075mol/L，在37℃水浴中將上述細胞處理20～40分鐘，可使細胞體積脹大，染色體松散。（2）固定常用醋酸甲醇(1:3)混合液，用時現(xiàn)用現(xiàn)配。顯示染色體方法很多，以下幾種方法較為常用。目前七頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點二、傳代細胞染色體檢查

一、原理：秋水仙堿可使細胞停止在分裂中期，染色體長短恰倒好處。二、方法：細胞類型：傳代細胞系，外周血LC，羊水，絨毛細胞等方法：秋水仙素低滲固定染色鏡檢目前八頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點末梢血培養(yǎng)法，Giemsa染色法顯示人染色體目前九頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點第三節(jié)染色體結(jié)構(gòu)顯示和檢測一、染色體顯帶原理和種類二、染色體顯帶方法要點三、原理四、常用染色體顯帶法五、姐妹染色單體分化染色目前十頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點一、染色體顯帶原理和種類（一）原理染色體顯帶是沿著整個染色體的長軸，能顯現(xiàn)出著色深淺不同。橫行走向的帶(Band)經(jīng)特殊染色后，易著色的陽性帶(PositiveBand)為含有A-T多的染色體節(jié)段，相反，G-C多的則不易著色，為陰性帶(NegativeBand)。有報道，已被定位的正?；蚝彤惓；蚪^大部分都在陰性帶區(qū)。人們推測，看家基因在陰性區(qū)帶，人染色體能顯示出近2000個G帶。目前十一頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點（二）種類

染色體顯帶是指沿著整個染色體軸能出現(xiàn)著色深淺不同的橫紋。根據(jù)顯帶方法不同可分為：用奎吖因(QM)、阿的平(QD)熒光染色的帶，稱“Q”帶；用Giemsa染色顯帶稱“G”帶；用Giemsa染色顯示異染色質(zhì)部分稱“C”帶；用特殊方法處理后，顯現(xiàn)出與Q帶和G帶相反的帶型稱“K”帶等。目前，Q、G和C三種帶型較為常用，其中G帶更為多用。目前十二頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點二、染色體顯帶方法要點“老化”處理：將染色體制片后存放3~10分鐘或86℃干燥20～30分鐘顯Q帶法：用奎吖因(QM)或阿的平(QM)染色顯帶Giemsa顯G帶：胰酶消化Giemsa染色顯帶顯C帶法：在預(yù)熱至65℃的5%Ba(OH)2液中15分鐘Giemsa染色15分鐘顯帶注意：1、標(biāo)本片老化處理很重要；2、胰酶濃度和消化時間要事先熟知，消化要充分但不能過度；3、中期分裂相要多而均勻，稍長一些為佳目前十三頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點1．中期染色體

為了獲得滿意的顯帶效果，需制備質(zhì)量好的中期染色體標(biāo)本，即須達到以下要求：①長度適宜，一般稍長一些，能顯出更多的條帶，這與加入秋水仙素的濃度和作用時間有關(guān)，要控制好。②染色體分散均勻無重疊，這與低滲有關(guān)，低滲不足染色體易發(fā)生重疊，過度易流失。③無嚴重單體分叉。目前十四頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點2．特殊處理

中期染色體標(biāo)本顯帶效果的提高要經(jīng)三個步驟：（1）標(biāo)本片應(yīng)先放置一段時間，稱“老化”處理，以3～10天為宜。（2）顯帶染色前要將標(biāo)本加溫預(yù)處理利于顯帶，預(yù)處理后的標(biāo)本不必再老化。常用80℃干燥20～30分鐘。（3）胰蛋白酶消化較好(比用NaOH、尿素等好)。目前十五頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點三、常用染色體顯帶法1．顯Q帶法（1）將標(biāo)本片于pH6.0緩沖液中浸5～10分鐘后，再轉(zhuǎn)浸入用Soresen氏緩沖液(pH6.0)配制的0.2%的QD或QM染液中染色5～10分鐘(見表12-3-1)。（2）用pH6.0的磷酸緩沖液漂洗2次，每次5分鐘，于玻片上滴加1～2滴新鮮緩沖液，加蓋片。（3）在熒光顯微鏡下觀察。目前十六頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點表12-3-1Soresen(100ml)緩沖液PHNa2HPO4(1/15mol/L)kH2PO4(1/15m0l/L)pHNa2HPO4(1/15mol/L)kH2HPO4(1/15mol/L)5.292.597.56.8150505.595956.9860405.9110907.1770306.2420807.3880206.4736747.7390106.6440608.04955目前十七頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點2．胰酶一Giemsa顯G帶法(1)將中期染色體標(biāo)本于60～80℃烘箱中烘24小時或過夜，然后再浸入0.025m磷酸緩沖液中(pH6.8)，56℃溫浴10分鐘后，用現(xiàn)配的胰酶一Giemsa混合液消化和染色10～30分鐘，染色后用自來水沖洗，再用蒸餾水漂洗數(shù)次，涼干，二甲苯透明2～3分鐘，封入中性樹脂中。(2)將標(biāo)本放于40～80℃烤箱中數(shù)小時或更長，用0.25%胰蛋白酶熱消化7～15分鐘，并不斷輕輕擺動玻片，水洗后再用Giemsa染液染5～10分鐘，用自來水沖洗，蒸餾水漂洗，涼干，二甲苯透明2～3分鐘，封入中性樹脂中。目前十八頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點3．顯C帶法

將中期染色體玻片先投入預(yù)熱至65℃的5%Ba(OH)2液中15分鐘，取出玻片用自來水沖洗后，再將玻片投入預(yù)熱至65℃的2×SCC液中1小時10分鐘，待自來水沖洗后再過pH7.4磷酸沖液，用Giemsa染色15分鐘后鏡檢。附：2×SCC液配方：稱NacL17.5g和枸椽酸鈉8.82g液于1000mL蒸餾水中。

5%Ba(OH)2：稱Ba(OH)22.5g溶于50mL生理鹽水中。必須注意：①胰蛋白酶消化顯帶過程中，消化不足，帶不出現(xiàn)。②消化過度，染色體變得膨脹和不著色。③要注意胰蛋白酶濃度和消化時間。④預(yù)處理或老化是顯帶的重要環(huán)節(jié)，干熱處理簡單易行，效果好。（見書后照片6）目前十九頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點末梢血培養(yǎng)法，Giemsa染色分帶法顯示人染色體目前二十頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點人染色體G帶目前二十一頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點慢性粒細胞白血病患者骨髓細胞PH染色體核型目前二十二頁\總數(shù)二十四頁\編于十九點四、姐妹染色單體分化染色

(一)原理細胞被培養(yǎng)在含有5-溴脫氧尿苷(5-BromodeOxyurdine;BUdR)的培養(yǎng)基中，當(dāng)細胞DNA合成時，BUdR取代胸腺嘧啶核苷(Thymidine.TdR)進入細胞增殖周期，第一周期每條染色單體DNA雙鏈都被BUdR摻入(TB、TB)，第二周期只有一條單體保留了無BUdR舊鏈，另一條單體雙鏈都有BUdR(TB、TB)，經(jīng)熒光染料著色時TB有強熒光，BB熒光弱。目前二十三頁