分光光度測定方法

關(guān)于分光光度測定方法第1頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月一、普通分光光度法1.單組分的測定

通常采用A-C

標準曲線法定量測定。2.多組分的同時測定

⑴若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質(zhì)上與單組分測定沒有區(qū)別。

⑵若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。

Aλ1=εaλ1bca

＋εbλ1bcb

Aλ2=εaλ2bca

＋εbλ2bcb

第2頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月二、示差分光光度法（示差法）

普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分含量較高時，將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。

設(shè)：待測溶液濃度為cx，標準溶液濃度為cs(cs<cx)。則：

Ax=εb

cx

As=εbcsΔＡ＝Ａx

－Ａs=εb(cx

－cs

）=εbΔc

測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差ΔＡ。第3頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月示差分光光度法（示差法）

ΔA＝Ax

－As=εb(cx

－cs

）=εbΔc

測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差ΔA

。

示差法測得的吸光度與Δc呈直線關(guān)系。由標準曲線上查得相應(yīng)的Δc值，則待測溶液濃度cx

：

cx=cs+Δc

第4頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月示差法標尺擴展原理：普通法：cs的T=10%；cx的T=5%示差法：cs做參比，調(diào)T=100%則：cx的T=50%；標尺擴展10倍第5頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月三、雙波長分光光度法

不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色光(λ1和λ2)；以參比波長λ1處的吸光度Aλ1作為參比，來消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復(fù)雜試樣時顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。

ΔA

＝Aλ2

－Aλ1

＝(ελ2

－ελ1)bc

兩波長處測得的吸光度差值ΔA與待測組分濃度成正比。ελ1和ελ2分別表示待測組分在λ1和λ2處的摩爾吸光系數(shù)。

第6頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月關(guān)鍵問題:測量波長λ2和參比波長λ1的選擇與組合

以兩組分x和y的雙波長法測定為例：設(shè)：x為待測組分，y為干擾組分，二者的吸光度差分別為:

ΔAx和ΔAy，則該體系的總吸光度差ΔAx+y為：

ΔAx+y=ΔAx+ΔA

y如何選擇波長λ1

、λ2有一定的要求。第7頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月選擇波長組合λ1

、λ2的基本要求是：

⑴選定的波長λ1和λ2處干擾組分應(yīng)具有相同吸光度，即：ΔAy=ΔAyλ2

－ΔAyλ1=0故：ΔAx+y=ΔAx=(εxλ2－εxλ1)bcx此時：測得的吸光度差ΔA只與待測組分x的濃度呈線性關(guān)系，而與干擾組分y無關(guān)。若x為干擾組分，則也可用同樣的方法測定y組分。

可采用作圖法選擇符合上述兩個條件的波長組合。⑵在選定的兩個波長λ1和λ2處待測組分的吸光度應(yīng)具有足夠大的差值。第8頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月四、導數(shù)分光光度法

導數(shù)分光光度法在多組分同時測定、渾濁樣品分析、消除背景干擾、加強光譜的精細結(jié)構(gòu)以及復(fù)雜光譜的辨析等方面，顯示了很大的優(yōu)越性。

利用吸光度(或透光度)對波長的導數(shù)曲線來進行分析：

Ｉ＝Ｉ0e-εbc假定入射光強度Ｉ0在整個波長范圍內(nèi)保持恒定：

dI

0/dλ＝0則：dI/dλ＝－Ｉ0

bce-εbcdε/dλ

＝－Ｉ0

bcdε/dλ

第9頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月導數(shù)分光光度法

dI/dλ

＝－Ｉ0

bcdε/dλ

一階導數(shù)信號與試樣濃度呈線性關(guān)系；測定靈敏度依賴于摩爾吸光系數(shù)對波長的變化率dε/dλ。吸收曲線的拐點處dε/dλ最大，故其靈敏度最高(見圖）。同理可以導出其二階和三階導數(shù)光譜（略）第10頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月請選擇內(nèi)容：第一節(jié)基本原理第二節(jié)紫外