病毒學(xué)檢驗第二章雞胚和動物接種技術(shù)

關(guān)于病毒學(xué)檢驗第二章雞胚和動物接種技術(shù)第1頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月2本章內(nèi)容第一節(jié)雞胚接種技術(shù)第二節(jié)動物接種技術(shù)第三節(jié)雞胚和動物接種技術(shù)在

病毒檢驗中的應(yīng)用第2頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月3掌握雞胚接種途徑及方法、病毒的檢測實驗動物的種類、實驗動物接種途徑和接種方法熟悉雞胚孵育與檢查、雞胚接種所需實驗材料與器械實驗動物編號和分組、接種后的觀察等問題了解雞胚的解剖與生理；雞胚和實驗動物接種技術(shù)在病毒檢驗中的應(yīng)用教學(xué)要求第3頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月4方法應(yīng)用價值存在問題動物接種應(yīng)用最早；方法簡便；結(jié)果易于觀察自身帶病毒；有的接種后不敏感；動物飼養(yǎng)問題雞胚培養(yǎng)來源客觀，易于管理，帶病毒機會少；多途徑接種敏感病毒譜窄細胞培養(yǎng)應(yīng)用廣泛，敏感病毒譜廣設(shè)備技術(shù)要求條件高病毒分離培養(yǎng)常用方法第4頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)雞胚接種技術(shù)

第5頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月6概況1911年Rous和Murphy首先應(yīng)用雞胚培養(yǎng)研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。1938年Goodpasture和Burnet等應(yīng)用雞胚繁殖病毒、Cox應(yīng)用卵黃囊培養(yǎng)立克次氏體。第6頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月7雞胚接種技術(shù)的優(yōu)點雞胚為一整體，有神經(jīng)血管的分布及臟器的構(gòu)造；雞胚的組織分化程度低，可選擇適當(dāng)途徑接種，病毒易復(fù)制，感染病毒的膜和液體含大量病毒；來源充足，操作簡單，通常是無菌的，對接種的病毒不產(chǎn)生抗體。第7頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月8雞胚接種技術(shù)的缺點通常不產(chǎn)生特異性的感染指征；食入的抗生素會傳遞給雞胚，使病原體在雞胚中的繁殖受到抑制；某些細菌和病毒能夠從感染的雞傳遞到雞胚。第8頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月9一、雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚是由外胚層、中胚層和內(nèi)胚層三個胚層發(fā)育起來的，它們共同構(gòu)成了胚胎的組織與器官。卵白尿囊腔卵黃氣室卵殼殼膜絨毛尿囊膜羊膜羊膜腔雞胚胎9～11日齡雞胚結(jié)構(gòu)第9頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月10第10頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月11卵殼與殼膜卵殼位于最外層的堅硬殼層殼膜位于卵殼的下層，允許氣體和液體分子交換氣室功能主要是呼吸和調(diào)節(jié)壓力絨毛尿囊膜殼膜之下，主要是胚胎的呼吸器官羊膜胚胎的最內(nèi)層包被，含羊水，胚胎在其中。第11頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月12尿囊腔位于絨毛尿囊腔和羊膜之間，胚胎排泄器官；含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸鹽卵黃囊主要營養(yǎng)的儲藏場所，為胚胎提供營養(yǎng)卵白外于卵的銳端，為胚胎發(fā)育晚期提供營養(yǎng)第12頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月13第13頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月14二、雞胚的孵育和檢查一、受精雞卵的選擇沒有受到病毒和細菌的污染如新城雞瘟病毒、布氏桿菌等；

培養(yǎng)立克次體和衣原體，不能來自食用抗生素的雞群。二、雞胚的孵育孵育的溫度38℃～39℃孵育的濕度40％～70％翻卵每天180°轉(zhuǎn)動雞胚1～2次通風(fēng)排出CO2，吸入O2

第14頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月雞卵發(fā)育中的胚胎發(fā)育中的胚胎破殼而出的小雞卵白卵黃系帶胚盤第15頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月16第16頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月17三、檢卵目的了解雞胚的存活情況，標記氣室邊界和胚胎位置；觀察接種后胚胎的狀況觀察內(nèi)容血管是否明顯有無胎動絨毛尿囊膜發(fā)育之界線第17頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月18第18頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月19三、雞胚的接種途徑及方法一、實驗材料與器械受精雞卵孵卵箱檢卵燈、照明燈、卵杯、卵盤、雞胚開孔器其它器材第19頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月20二、接種途徑與方法羊膜腔接種：主要用于臨床材料（如患者咽漱液等）分離流感病毒。絨毛尿囊膜接種：常用于牛痘病毒、天花病毒、單純皰疹病毒的分離；病毒滴定、中和試驗。尿囊腔接種：廣泛應(yīng)用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒、新城雞瘟病毒的適應(yīng)和傳代。卵黃囊接種：主要用于蟲媒病毒、衣原體、立克次體等分離和繁殖；抗流感病毒藥物實驗。第20頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月211、羊膜腔接種分離流感病毒，收獲羊水和尿囊液。羊膜腔接種示意圖第21頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月接種步驟與方法將10~12日齡的雞胚在檢卵燈上照視，標記氣室及胚胎的位置。消毒氣室部位的蛋殼，在氣室頂端鉆出一約10mm×6mm的長方形裂痕，注意勿鉆破殼膜。再次消毒鉆孔區(qū)后，用滅菌的小鑷子除去長方形卵殼和外層殼膜，并滴加滅菌液體石蠟一滴于下層殼膜上，使其透明，以便觀察胚胎的位置。將注射器刺向胚胎的腭下胸前，以針頭撥動下顎及腿，當(dāng)進入羊膜腔內(nèi)時，可看到雞胚隨針頭的撥動而動，此時可注入O.1～0.2ml病毒液。拔出針頭，孔區(qū)消毒后用沾有碘酒通過火焰的小塊膠布將卵殼的窗口封住，于33～35℃孵育48～72h，要保持雞胚鈍端朝上。第22頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月解剖與收獲收獲前雞胚須置4℃冰箱6h或過夜，但不能放置時間過長(過長會引起散黃)。如急于收獲亦可置-20℃冰箱lh左右。預(yù)冷的目的是，將雞胚凍死，使血液凝固，避免收獲時流出紅細胞，并同尿囊液的病毒發(fā)生凝集，造成病毒滴度下降。病毒通過胚胎機體后被排泄入尿囊腔，因此當(dāng)羊水過少時，可用同胚少量尿囊液沖洗羊膜腔并吸取該洗液。第23頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月242、絨毛尿囊膜接種牛痘病毒、天花病毒、單純皰疹病毒的分離，可在膜上可形成斑點狀或痘皰狀病灶。病毒滴定，感染性病毒顆粒的數(shù)目可以通過產(chǎn)生的斑和痘的數(shù)目來計算?？贵w滴定，即在有抗體存在的情況下，痘皰形成受到抑制。第24頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月25定位將胎盤部分及自然氣室部分用鉛筆畫出；在與胚胎略近氣室端的絨毛尿囊膜發(fā)育較好的卵殼上劃一直徑約1cm的等邊三角形卵窗接種步驟與方法第25頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月26絨毛尿囊膜接種示意圖取卵殼；造人工氣室；接種；消毒；培養(yǎng)。第26頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月27用2.5％的碘酒和75％的酒精分別消毒人工氣室上的卵殼，去除窗孔上的膠布。用剪刀沿人工氣室邊緣將膜剪下，放入加有滅菌生理鹽水的培養(yǎng)皿內(nèi)，觀察病灶形狀或用于傳代，或用50％甘油保存。同時作無菌培養(yǎng)。解剖與收獲第27頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月283.尿囊腔接種流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的傳代。尿囊腔接種示意圖第28頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月29照胚：取9~11日齡發(fā)育良好的雞胚，觀察氣室及胚胎位置，標出氣室底邊，在無大血管處標出尿囊腔注射部位。接種步驟與方法第29頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月30標記氣室和胚胎位置第30頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月31消毒氣室向上放置雞胚于卵架上；先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋殼所標記的位置。打孔在所標記注射部位用剪刀尖端打孔；注意用力要穩(wěn)，恰好使蛋殼打通而不傷及殼膜。距氣室底邊0.5cm第31頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月32接種部位消毒第32頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月33注入病毒材料用1mL注射器抽取接種物；針頭垂直刺入注射部位1-1.2cm即達尿囊腔內(nèi)；注入待接種的病毒液：接種量為0.1~0.2mL。第33頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月34封孔用熔好的石蠟或消毒膠布封閉注射孔。孵育與觀察氣室朝上于37℃溫箱中孵育；以后每天檢卵1~2次。棄去24h內(nèi)的死亡雞胚：機械損傷、細菌或霉菌污染等引起。第34頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月35收集24h后死亡雞胚，置4℃冰箱過夜，以免收獲時流血;取出冷卻的雞胚，消毒氣室端卵殼表面；用鑷子擊破氣室部卵殼并去除殼膜，撕破絨毛尿囊膜；以眼科鑷鑷住絨毛尿囊膜，用吸管吸取尿囊液，置無菌容器中保存?zhèn)溆谩Ｒ话隳苣蚰乙?-10mL。取出雞胚胎，于平皿內(nèi)觀察胚胎有無病理變化，如出血、蜷縮、侏儒胚等。解剖與收獲第35頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月36收獲尿囊液—每枚雞胚收獲尿囊液6～8ml第36頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月374.卵黃囊接種用于蟲媒病毒、衣原體及立克次體等的分離和繁殖。卵黃囊接種示意圖第37頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月38四、病毒的檢測（一）無菌試驗?zāi)康模鹤C實雞胚收獲物是否受到細菌的污染。方法：將雞胚組織或收獲的第一滴液體接種無菌肉湯；

37℃培養(yǎng)36h。結(jié)果判定肉湯清亮透明，說明沒有污染；肉湯混濁，或有菌落出現(xiàn)，說明雞胚被細菌污染。第38頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月39（二）檢測方法直接觀察法絨毛尿囊膜上形成損害或痘皰：如痘類病毒和皰疹病毒。引起雞胚死亡：如新城疫病毒、流行性乙型腦炎病毒。造成雞胚特殊損害和胚胎生長遲緩，如馬流感病毒。實驗檢測法血凝和血凝抑制試驗：流感病毒補體結(jié)合試驗：腮腺炎病毒其他：PCR等第39頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月40第40頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)動物接種技術(shù)

第41頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月42實驗動物（experimentalanimals）是指經(jīng)人工飼養(yǎng)，遺傳背景明確、來源清楚，控制其攜帶的微生物，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)、鑒定以及其它科學(xué)實驗的所有動物。第42頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月43發(fā)現(xiàn)年份發(fā)現(xiàn)人所用動物血液循環(huán)1628哈維蛙、蛇、魚、蟹、其他醚麻醉1846瑪?shù)区B類、其他細菌與疾病的關(guān)系1878科赫牛、羊、其他細菌致弱用免疫1880巴斯德鳥類狂犬病免疫1885巴斯德鳥類、家兔蟲媒傳播疾病1898史密斯等牛蚊傳播瘧疾1898羅斯鳥類醫(yī)學(xué)科學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)與動物實驗的關(guān)系第43頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月44發(fā)現(xiàn)年份發(fā)現(xiàn)人所用動物腫瘤的病毒病原1910洛斯雞胰島素1921班定狗休克治療1927博萊羅克狗抗細菌藥物（百浪多息）1935多麥克小鼠心肺旁道器1953葛明貓小兒麻痹癥疫苗1954索爾克恒河猴變性腦病的病毒病原1965格但斯克猩猩心臟移植1967伯納德狗醫(yī)學(xué)科學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)與動物實驗的關(guān)系第44頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月45

登革病毒對新生乳鼠的致病作用

1-3日齡乳鼠接種病毒6日后，小鼠陸續(xù)出現(xiàn)體弱、弓背、行動遲緩等癥狀。第45頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月46一、實驗動物的種類和基本操作方法（一）實驗動物的種類按微生物控制分類普通動物（CV）、清潔動物（CL）、無特定病原體動物（SPF）、無菌動物（GF）和悉生動物（GN）按遺傳學(xué)控制分類近交系、封閉群、突變系、雜交群、轉(zhuǎn)基因動物第46頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月47按微生物學(xué)控制分類1、普通動物一級動物，指不攜帶主要人獸共患病病原和動物烈性傳染病病原的動物。實驗結(jié)果不穩(wěn)定；僅供教學(xué)示范及作為預(yù)備試驗。第47頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月482、清潔動物二級動物，除不攜帶普通動物病原體外，要求不攜帶對動物危害大、對實驗干擾大的病原體。適用于大多數(shù)教學(xué)和科研實驗。第48頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月493、無特定病原體動物(SPF)三級動物，除普通動物、清潔動物不得攜帶的病原體外，還要求排除潛在感染或條件致病的病原體。目前國際公認的標準級別的實驗動物。第49頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月50飼養(yǎng)管理：SPF動物必須飼養(yǎng)在溫濕度衡定的空氣凈化的屏障系統(tǒng)中，實行嚴格的微生物控制。第50頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月514、無菌動物和悉生動物四級動物。無菌動物要求現(xiàn)有的檢測技術(shù)在動物體內(nèi)外的任何部位均檢不出任何微生物和寄生蟲。悉生動物又稱已知菌動物，是指在無菌動物體內(nèi)植入已知微生物的動物，必須飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)。第51頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月52無菌動物飼養(yǎng)條件：無菌隔離器。第一代通過無菌手術(shù)剖腹取胎,飼養(yǎng)在無菌隔離器內(nèi)，人工喂乳或保姆代養(yǎng)培育而成。第52頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月53悉生動物飼養(yǎng)條件：無菌隔離器。來源：人為將已知的微生物投給無菌動物，使其體內(nèi)帶有已知菌，可分為單菌動物、雙菌動物和多菌動物。第53頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月54按遺傳學(xué)控制分類1、近交系(inbredstrain)概念：又叫純系，經(jīng)過連續(xù)20代以上全同胞或親子交配培育的動物品系。特點基因型相同，表現(xiàn)型一致；對外來刺激反應(yīng)一致；實驗結(jié)果重復(fù)性好，可比性強。第54頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月55第55頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月56

常用近交系小鼠名稱縮寫

品系名縮寫品系名縮寫AKRAKC57BL/10B10BALB/cCC57BRBRCBACBDBA/1D1C3HC3DBA/2D2C57LLHRS/JHRC57BL/6B6STSS第56頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月57C3H/He系BALB/c系C57BL

第57頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月582、封閉群(closedcolony)概念：也稱遠交群，在不從其外部引入新個體的條件下，以非近親交配方式至少連續(xù)繁殖4代以上生產(chǎn)的一個實驗動物種群。特點群體遺傳特異性相對穩(wěn)定；個體間具有雜合性，存在一定差異。

第58頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月59常用封閉群的嚙齒類的實驗動物昆明（KM）小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、ICR小鼠、Wistar大鼠、SD大鼠、Hartley豚鼠、大耳白兔和青紫藍兔等。KM小鼠青紫藍兔Wistar大鼠第59頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月603、突變系(mutantstrain)概念：由于遺傳基因發(fā)生突變而具有某些特殊性狀的動物，如肥胖癥小鼠、糖尿病小鼠等。BALB/cA-nu1973年丹麥的C.W.Friis在BALB/cA近交系小鼠中發(fā)現(xiàn)自發(fā)性突變的無毛小鼠，該突變小鼠胸腺發(fā)育不良，免疫T細胞缺失，而培育成了BALB/cA-nu。

第60頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月61突變系小鼠SCID小鼠裸小鼠第61頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月624、雜交群概念：又稱異系雜交，是由不同的品系雜交所產(chǎn)生的后代。由兩個近交系之間交配產(chǎn)生的動物稱為雜交一代。特點：雜交一代動物遺傳和表型均一性好；生命力、適應(yīng)力和抗病力較近交系動物強；實驗結(jié)果重復(fù)性好，適應(yīng)實驗范圍更大。第62頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月63繁殖方法：將兩個用于生產(chǎn)雜交一代的親本品系或種群進行交配，所得第一代即為F1動物。

第63頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月645、轉(zhuǎn)基因動物與基因缺陷動物將外源性基因插入生殖細胞基因組并能正常繁衍的動物稱為轉(zhuǎn)基因動物。采用基因剔除技術(shù)構(gòu)建基因缺陷動物，通過刪減單一基因或相關(guān)基因組，研究基因的功能。第64頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月65二、常用實驗動物第65頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月66（一）小鼠近交系BALB/c、C3H、DBA、C57BL、615、129等。突變系nude、scid、dw、hr等。封閉群KM、ICR、NIH、CFW等。第66頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月67

1、昆明小鼠(KM)

遠交群，基因庫大，基因雜合率高。第67頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月682、BALB/c小鼠

近交系，白化小鼠，血壓較高。易患慢性肺炎。BALB/c白化第68頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月693、裸鼠

先天性無胸腺的突變系小鼠。

裸鼠是腫瘤研究的常用模型，也可研究病毒感染與特定免疫功能的關(guān)系。第69頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月704、SCID鼠(severecombinedimmunodeficiency,SCID)

體液免疫和細胞免疫嚴重聯(lián)合缺陷的突變系小鼠。缺乏T和B淋巴細胞免疫功能。目前多用于病毒免疫學(xué)和腫瘤學(xué)的研究。

第70頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月71（二）豚鼠在免疫學(xué)和病毒學(xué)實驗中豚鼠可制備補體和抗體及提供紅細胞做血吸附實驗等。

第71頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月72（三）家兔免疫學(xué)和病毒學(xué)實驗中常用動物。免疫反應(yīng)靈敏，血清量產(chǎn)生較多；對許多病毒和致病菌非常敏感，適用于各種微生物學(xué)的研究新西蘭兔青紫藍兔大耳白兔第72頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月73三、實驗動物常用基本操作技術(shù)（一）實驗動物的捕捉和固定小鼠第73頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月74先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒炁_向后拉。第74頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月75在鼠向前爬行時，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚。第75頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月76將鼠體置于左手心中，把后肢拉直。第76頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月77以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。

第77頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月78第78頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月79大鼠第79頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月80先用右手抓取大鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒炁_向后拉。第80頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月81在鼠向前爬行時，用左手拇指和食指抓住大鼠的兩耳和頸部皮膚。第81頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月82以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。如果大鼠體積太大,可由第二個人協(xié)助固定后肢。第82頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月83第83頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月84豚鼠第84頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月85先用手掌迅速扣住鼠背。第85頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月86抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，

中指和無名指輕輕扣住胸廓。第86頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月87抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，

中指和無名指輕輕扣住胸廓。第87頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月88或像抓取大鼠一樣抓住雙耳和頸背部皮膚。第88頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月89另一只手托住臀部。第89頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月90家兔第90頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月91按住兔子的雙耳和頸背部。第91頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月92一只手抓住兔子雙耳和頸背部的毛皮提起。第92頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月93然后另一只手托其臀部，讓其體重的大部分集中在這一只手上。第93頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月94注意：不能單純抓雙耳或抓提背腹部的毛皮。第94頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月95第95頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月96將兔子放入盒式固定器內(nèi)；露出頭部。第96頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月97（二）實驗動物編號和分組1、編號：區(qū)別實驗組和對照組動物打號法：適用于耳朵較大的動物針刺法：適用于大小鼠、豚鼠染色法打孔或剪缺口法第97頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月98染色法3%-5%苦味酸溶液，可染成黃色。0.5%中性紅或品紅溶液,可染成紅色。第98頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月99打孔或剪缺口法第99頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月1002、分組分組應(yīng)按隨機分配的原則。每組動物數(shù)量應(yīng)按實驗周期長短、實驗類型及統(tǒng)計學(xué)要求而定。為了實驗的科學(xué)性和客觀性，實驗中必須設(shè)置對照組。第100頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月101（三）實驗動物常用的麻醉方法

局部麻醉浸潤麻醉：普魯卡因、利多卡因全身麻醉乙醚吸入、戊巴比妥鈉、氨基甲酸乙酯第101頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月102（四）實驗動物接種途徑和接種方法皮下接種第102頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月103腹腔接種第103頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月104

以一只手抓取和固定動物，使腹部向上，以及使鼠頭稍朝下大約15度角（頭低位）。第104頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月105用消毒酒精進行進針部位消毒。第105頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月106另一只手將注射器針頭于左（或右）小腹部刺入皮下。第106頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月107靜脈接種第107頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月108將小鼠放進固定器里。第108頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月109露出尾巴。用45～50℃的溫水浸潤尾部半分鐘或用酒精擦拭使血管擴張和使表皮角質(zhì)軟化。第109頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月110用食指和中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，大拇指再輕輕按住尾部。第110頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月111右手持注射器，使針頭與靜脈平行（小于30度角），從尾下四分之一處（約距尾尖2-3厘米）處進針。第111頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月112將兔子放入固定架第112頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月113先拔去注射部位的被毛；用手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈；用消毒酒精消毒注射部位。第113頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月114用一只手的食指和中指托住注射部位的耳緣，

大拇指順勢按在耳上面固定住兔耳。第114頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月115另一只手持6號針頭（連注射器）盡量從靜脈的遠端刺入。第115頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月116當(dāng)針頭有回流血時，移動拇指于針頭上以固定針頭。第116頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月117將藥液以均勻的速度注入；或以均勻的速度抽取血液。第117頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月118注射（采血）完畢，用消毒棉球（簽）輕輕按住針眼，拔出針頭。第118頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月119用消毒棉球（棉簽）壓迫針眼片刻止血。第119頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月120消化道接種第120頁，課件共134頁，創(chuàng)作于2023年2月121右手持注射器，將灌胃針插入動物口中，沿口腔頂壁和咽后壁徐徐插入食道。第121頁，課件共134頁