免疫組化技術簡介及相關臨床應用

免疫組化技術簡介及相關臨床應用

朱勝章黔南州人民醫(yī)院病理科提綱

1、背景知識簡介2、定義及基本原理3、所用抗體及標本類型4、常用染色方法5、操作步驟及結果判斷6、臨床應用7、相關圖片

7、開展該項目注意事項背景知識簡介免疫組化技術是20世紀70年代初SterbBerger在酶標法的基礎上,以免疫學的抗原抗體反應為理論基礎發(fā)展起來的一門方法學。20世紀80年代該項技術在國外開始應用于診斷疾病，國內比國外約晚10年，即90年代開始運用于疾病的病理診斷。最近20多年來，該項技術得到飛速發(fā)展，特別是絕大多數(shù)抗體能夠應用在福爾馬林固定的石蠟切片上，因而大大促進了它在臨床病理學上的應用。從開始發(fā)展至今，該項技術一直在基礎醫(yī)學和臨床研究中發(fā)揮重要作用,為疾病尤其是腫瘤性疾病的診斷、鑒別診斷及發(fā)病機制的研究提供了強有力的手段。目前絕大多數(shù)大中型醫(yī)院都開展了該項技術檢查，我院有待開展此項技術。定義及基本原理

定義：免疫組化，也稱為免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術，是應用免疫學基本原理—抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究。

基本原理：抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。然后再通過化學顯色方法將抗原抗體結合所在的部位顯示出來，從而達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。有如下基本特點：1、特異性強2、敏感性高3、定位準確4、形態(tài)與功能相結合所用抗體及標本類型所用抗體類型常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。所用標本類型：主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本最常用、最基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復，是免疫組化中首選的組織標本制作方法。常用染色方法免疫組織化學技術按照標記物的種類不同可分為：1，免疫熒光法，標記物為熒光素，通過熒光顯微鏡觀察；2，免疫酶法，以酶標記抗體，抗原抗體反應后顯色，通過光鏡或電鏡觀察，目前最常用；3，其它如親和組織化學法、免疫鐵蛋白法、免疫膠體金法及放射免疫自顯影法等。操作步驟流程簡介如下：常規(guī)石蠟切片→脫蠟→抗原修復（根據(jù)需要）→緩沖液沖洗（3min/2次）→室溫下孵育5min→緩沖液沖洗（5min/2次）→室溫下孵育5min→緩沖液沖洗（5min/2次）→滴加一抗37℃孵育1-2小時→緩沖液沖洗（5min/2次）→室溫下孵育30分鐘→滴加二抗室溫下孵育1小時→緩沖液沖洗（5min/2次）→滴加DAB液→孵育3-5分鐘→自來水充分沖洗→復染→脫水→透明→封片→出診斷。結果判斷

（表達部位、檢測物質及常用標記物）表達部位：細胞膜、細胞漿、核膜、細胞核、細胞多部位及組織等；檢測物質：組織或細胞中凡是能作為抗原或半抗原的物質，如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。常用于腫瘤病理鑒別診斷的免疫標記物

（舉例）上皮組織：CK、EMA；特異性上皮標記：如TG、PSA，TTF－1等；間葉組織：vinmentin；肌組織：desmin、SMA、MSA、myosin、myogenin、myoD1；血管內皮細胞：CD31、CD34、FVIIIRAg或FVIII；組織細胞：CD68、Mac387、溶菌酶等；神經(jīng)內分泌：1、激素標記物：兒茶酚胺、5－HT、多肽和肽釋放因子等；2、非激素標記物：NSE、CGA、Syn等；神經(jīng)組織：S－100、MBP、Leu7、NSE、GFAP、NFP等；淋巴造血組織：CD45（LCA）、CD20（L26）、CD79a、CD3、CD45RO、CD誰15、CD胸30、Bc母l—2、Si送g(謎Ig寒M和Ig撫D)等；胚胎盛性抗覆原：CE夜A、AF昆P等；細胞逝增殖伸抗原發(fā)：PC糖NA、Ki姿-6拋7等；激素廁：ER、PR、AR等；病毒醬：HB喂V、EB致V、HP瞞V等；癌基潤因和溫抑癌奸基因忙：c-肺er悅Bb錦-2、nm駱23、P5燒3、P1炮6和Bc廢l-竄2等臨床們應用免疫片組化別的臨某床應條用主韻要包攏括以校下幾條方面固：⑴惡燭性腫躲瘤的宵診斷遍與鑒膚別診情斷；⑵確充定轉穩(wěn)移性宏惡性帆腫瘤迫的原撫發(fā)部單位；⑶對齒某類若腫瘤冰進行蒼進一泥步的故病理譽分型阿；⑷軟偷組織搭腫瘤滲的治璃療一濾般需幟根據(jù)隸正確玻的陪組漏織傍學分她類，激因其鞭種類諒多、飼組織日形態(tài)斑相像寸，有時瞞難以園區(qū)分換其組鞋織來愚源，守應用居多種勾標志尾物進城行免早疫組天化研裹究對進軟組奶織腫寬瘤的河診斷克是不域可缺孤少的卵；⑸發(fā)她現(xiàn)微尋小轉貪移灶灶，有消助于低臨床喪治療紗方案蛋的確津定，碗包括倒手術企范圍突的確性定。⑹為賠臨床蓄提供久治療旦方案怖的選貼擇。小圓叛細胞腫瘤的要免疫組化鑒約別診稈斷ＣＫVimＥＭＡLCANSEDes

S-100CgA小細胞未分化癌＋－＋－－－－－神經(jīng)內分泌癌＋－＋－＋－－＋神經(jīng)母細胞瘤－＋－－＋－－

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NSEKER泌乳素細胞腺瘤＋－－－－－＋＋生長激素細胞腺瘤－＋－－－－－＋促皮質激素細胞腺瘤－－

＋－－－＋＋促性腺激素細胞腺瘤－－－

＋－＋＋＋/－促甲狀腺素細胞腺瘤－－－－＋＋＋＋/－乳腺內浸潤濟性導城管癌愿免疫顆組化如分子針分型宮與覆治療敘預后愉關系ERPRHER-2預后治療有效藥物LuminalA＋＋－最好他莫昔芬LuminalB＋＋＋較好他莫昔芬+阿那曲唑TripleNegative－－－一般含鉑藥物+EGFR抑制劑HER-2+－－＋最差曲妥珠單抗部分孫相關濤相關獎圖片免疫底組化昂檢測P5萬3在結膨直腸芹癌組梁織中器的表改達SP嚴×4附00P5畢3在結幣直腸賤癌組斗織中醋腫瘤轟細胞誤胞核寬表達CE甚ACO光X2Ki藝-6醒7Bc釣l-雄2ce酸rB頃b-粗2CD葛20ERCK開展恭該項術目注喉意事緣瑞項標本號的固膏定方躍面組織陪標本諷及時易的取甜材和垂固定街是做閉好免例疫組遺化染暴色的相