生化分析攜帶污染的發(fā)現(xiàn)與排除課件

攜帶污染的來(lái)源測(cè)試項(xiàng)目A試劑針，比色杯等試劑成分殘留干擾下一個(gè)測(cè)試項(xiàng)目B引起攜帶污染的原因原因一

生化儀的發(fā)展變化：①、多項(xiàng)目，多樣本處理，②、處理能力的提高（高速化）共有化：①、樣本針，試劑針；②、比色杯；③、攪拌棒攜帶污染原因二生化儀狀態(tài)不良，使用不當(dāng)：①、清洗力的低下（日常維護(hù)欠缺，儀器老化）②、生化儀內(nèi)污垢的積聚③、測(cè)試順序安排不當(dāng)常規(guī)清洗不能有效的消除污染攜帶污染主要內(nèi)容1試劑針攜帶污染2樣本針攜帶污染3比色杯攜帶污染4攪拌棒攜帶污染5攜帶污染的消除一、試劑針攜帶污染原因一全自動(dòng)生化分析儀一般采用雙試劑針，即所有項(xiàng)目的一試劑都共用試劑針R1，所有項(xiàng)目的二試劑都共用試劑針R2。試劑針R1或R2在每吸取一次試劑后都會(huì)進(jìn)行一次清洗，之后會(huì)立即吸取下一個(gè)項(xiàng)目的試劑。當(dāng)自身清洗能力下降，試劑針在吸取試劑時(shí)會(huì)將部分殘留的前項(xiàng)目試劑成分帶入到后項(xiàng)目反應(yīng)杯中，對(duì)后項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果造成影響。

原因二從各個(gè)項(xiàng)目設(shè)置的參數(shù)可知，試劑體積量遠(yuǎn)大于樣本體積量。因此試劑針攜帶污染影響程度會(huì)高于樣本針攜帶污染。

試劑針攜帶污染的類型1、試劑成分間的直接影響試劑中含有下一個(gè)檢測(cè)所要測(cè)定的底物，或是含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)的底物有作用，因而直接干擾下一反應(yīng)的測(cè)定結(jié)果。2、試劑成分間的間接影響前一個(gè)測(cè)定試劑與后一個(gè)測(cè)定試劑反應(yīng)原理相近，或者都會(huì)通過相同的中間產(chǎn)物。該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對(duì)下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來(lái)間接的干擾，因?yàn)樵谟性噭┪廴镜那闆r下，下一個(gè)測(cè)試所測(cè)定的是前后兩個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。

部分常用試劑間可能產(chǎn)生的干擾如下：1.pH值改變：試劑中反應(yīng)緩沖液之間因儀器攜帶污染而使下一反應(yīng)的pH值改變，使下一反應(yīng)達(dá)不到最佳狀態(tài)。如雙縮脲法測(cè)血清總蛋白，若其他條件相同，反應(yīng)在堿性(pH值8-9)條件時(shí)，蛋白肽鍵（—CONH）才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應(yīng)，完全測(cè)出血清蛋白的總量。若pH＜8時(shí)，總蛋白測(cè)定結(jié)果偏低，直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結(jié)果。酶活力測(cè)定在最適pH值時(shí)，反應(yīng)最快，靈敏度最高，但是因?yàn)榫彌_能力有限，可因攜帶污染使酶促反應(yīng)出現(xiàn)無(wú)效值。大多數(shù)酶反應(yīng)pH值在6.0-7.5之間；ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下最適宜。

2.TG、T-CH、UA、MG試劑中含有膽酸鹽，對(duì)循環(huán)酶法測(cè)定膽汁酸能產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。3.ALT（IFCC）、AST（IFCC）試劑中含有高活力LD成分，有可能會(huì)對(duì)LD的測(cè)定帶來(lái)干擾。4.CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）試劑中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過程，因此可能對(duì)Glu測(cè)定帶來(lái)干擾，尤其對(duì)Glu的HK法測(cè)定可能帶來(lái)嚴(yán)重干擾。

5.Glu(HK)、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、TG、HDL-C、LDL-C(直接法)等試劑中使用了鎂鹽，可能會(huì)對(duì)其后的Mg2+測(cè)定帶來(lái)干擾；TP試劑中高濃度的Cu2+對(duì)Mg2+測(cè)定也會(huì)產(chǎn)生干擾。6.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液，可能會(huì)對(duì)無(wú)機(jī)磷的測(cè)定帶來(lái)干擾。

7.Mg2+試劑(Calmagite)中含有EDTA成分，為Ca2+絡(luò)合劑，可能對(duì)Ca2+的測(cè)定帶來(lái)干擾。8.CK檢測(cè)不應(yīng)在ALP、Ca檢測(cè)之前，因CK反應(yīng)液中加入EDTA-Na，能抑制ALP活性，結(jié)合Ca而使結(jié)果偏低。9.BUN酶法測(cè)定因谷氨酸脫氫酶（GLDH）消耗NADH，不能放在底物NADH如ALT、AST項(xiàng)目前檢測(cè)。

試劑針攜帶污染排查和發(fā)現(xiàn)1、思路目前絕大部分實(shí)驗(yàn)室開展的生化檢測(cè)項(xiàng)目至少都在20項(xiàng)以上，評(píng)價(jià)全部項(xiàng)目之間的攜帶污染會(huì)非常耗時(shí)，并且試劑成本消耗量大。且不同儀器的動(dòng)作原理不完全相同，設(shè)計(jì)一個(gè)較為簡(jiǎn)單、合理的實(shí)驗(yàn)方法是需要重點(diǎn)考慮的內(nèi)容。

2、原理通過設(shè)置特定的標(biāo)本檢測(cè)順序，每個(gè)樣本只做一個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)，可以控制不同項(xiàng)目的先后吸取順序，實(shí)現(xiàn)任何一個(gè)項(xiàng)目都能與其他項(xiàng)目相遇。為了有效評(píng)價(jià)項(xiàng)目之間攜帶污染影響程度，污染實(shí)驗(yàn)所用的病人樣本的混合血清應(yīng)盡量包含醫(yī)學(xué)決定水平濃度。

試劑針攜帶污染實(shí)驗(yàn)方法一1、攜帶污染初實(shí)驗(yàn)

假設(shè)本次實(shí)驗(yàn)以A、B、C、D、E五個(gè)項(xiàng)目來(lái)考察各個(gè)項(xiàng)目之間的試劑針攜帶污染。先在生化儀中輸入樣本測(cè)試號(hào)碼和選擇項(xiàng)目，每個(gè)樣本號(hào)碼只選擇一個(gè)項(xiàng)目，目的是使試劑針吸取項(xiàng)目的順序完全按照樣本測(cè)試號(hào)碼的選后順序進(jìn)行，五個(gè)項(xiàng)目的測(cè)試順序表見表1。測(cè)試完成后，將數(shù)據(jù)輸入到處理表格2和表格3中，按照判斷標(biāo)準(zhǔn)，尋找可能存在的污染項(xiàng)目組合。

測(cè)試順序號(hào)123456789101112測(cè)試項(xiàng)目AAAAABACADAE測(cè)試順序號(hào)131415161718192021222324測(cè)試項(xiàng)目ABBBBBCBDBEB測(cè)試順序號(hào)252627282930313233343536測(cè)試項(xiàng)目CCCCCDCECDDD測(cè)試順序號(hào)373839404142434445測(cè)試項(xiàng)目DDEDEEEEE表1測(cè)試項(xiàng)目數(shù)為5時(shí)測(cè)試順序安排表表2各項(xiàng)目單獨(dú)測(cè)試5次時(shí)測(cè)試結(jié)果列表，數(shù)字代表對(duì)應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果測(cè)試次數(shù)ABCDE11142534412215263542331627364344172837445518293845平均值A(chǔ)vBvCvDvEv表3項(xiàng)目之間交叉列表縱向代表施污染項(xiàng)目橫向代表受污染項(xiàng)目ABCDEA6(A→B)8(A→C)10(A→D)12(A→E)6/Bv*100%8/Cv*100%10/Dv*100%12/Ev*100%B7(B→A)19(B→C)21(B→D)23(B→E)7/Av*100%19/Cv*100%21/Dv*100%23/Ev*100%C9(C→A)20(C→B)30(C→D)32(C→E)9/Av*100%20/Bv*100%30/Dv*100%31/Ev*100%D11(D→A)22(D→B)31(D→C)39(D→E)11/Av*100%22/Bv*100%31/Cv*100%39/Ev*100%E13(E→A)24(E→B)33(E→C)40(E→D)13/Av*100%24/Bv*100%33/Cv*100%40/Dv*100%攜帶污染實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表3中顯示了試劑之間攜帶污染初實(shí)驗(yàn)后的結(jié)果：◆將表格內(nèi)測(cè)試順序號(hào)代表的位置處輸入該項(xiàng)目對(duì)應(yīng)的測(cè)試結(jié)果；◆對(duì)每個(gè)測(cè)試順序號(hào)下面對(duì)應(yīng)的測(cè)試結(jié)果和該項(xiàng)目單獨(dú)5次重復(fù)結(jié)果的均值相比；◆比值以百分比形式表示，通過觀察百分比的大小來(lái)初步判斷攜帶污染的可能性。目前的判斷標(biāo)準(zhǔn)以正負(fù)百分之五作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，超過范圍時(shí)懷疑有攜帶污染。

2、確認(rèn)實(shí)驗(yàn)◆由攜帶污染初實(shí)驗(yàn)篩選出懷疑有污染的項(xiàng)目組合，假設(shè)（A→B）同（D→E）◆即A項(xiàng)目對(duì)B項(xiàng)目（A項(xiàng)目做好后緊接著做B項(xiàng)目），D項(xiàng)目對(duì)E項(xiàng)目（D項(xiàng)目做好后緊接著做E項(xiàng)目）懷疑有污染◆由于初實(shí)驗(yàn)的項(xiàng)目交叉結(jié)果只是一次測(cè)試的結(jié)果，可能有偶然因素，還必須進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。

確認(rèn)實(shí)驗(yàn)◆以（A→B）為例，（D→E）的情況相同◆先單獨(dú)做A項(xiàng)目，緊接著連續(xù)測(cè)試3次B項(xiàng)目，第一個(gè)B項(xiàng)目的結(jié)果受A項(xiàng)目影響最大，第三個(gè)B項(xiàng)目的結(jié)果因?yàn)橛?次自身沖洗，結(jié)果比較準(zhǔn)確。比較第一個(gè)B項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果同第三個(gè)B項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果，如果影響百分比同初實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響趨勢(shì)和程度相近，可以判斷A項(xiàng)目對(duì)B項(xiàng)目有攜帶污染。

確認(rèn)實(shí)驗(yàn)AB1B2B3DE1E2E3表4攜帶污染確認(rèn)實(shí)驗(yàn)

施污染項(xiàng)目AD受污染項(xiàng)目BE測(cè)試值1B1E1測(cè)試值2B2E2測(cè)試值3B3E3測(cè)試值1/測(cè)試值3*100%B1/B3*100%E1/E3*100%試劑針攜帶污染實(shí)驗(yàn)方法二1、攜帶污染初實(shí)驗(yàn)

假設(shè)本次實(shí)驗(yàn)以A、B、C、D、E五個(gè)項(xiàng)目來(lái)考察各個(gè)項(xiàng)目之間的試劑針攜帶污染。先在生化儀中輸入樣本測(cè)試號(hào)碼和選擇項(xiàng)目，每個(gè)樣本號(hào)碼只選擇一個(gè)項(xiàng)目，目的是使試劑針吸取項(xiàng)目的順序完全按照樣本測(cè)試號(hào)碼的選后順序進(jìn)行，五個(gè)項(xiàng)目的測(cè)試順序表見表1。測(cè)試完成后，將數(shù)據(jù)輸入到處理表格2和表格3中，按照判斷標(biāo)準(zhǔn)，尋找可能存在的污染項(xiàng)目組合。

測(cè)試順序號(hào)123456789101112測(cè)試項(xiàng)目AAAAABACADAE測(cè)試順序號(hào)131415161718192021222324測(cè)試項(xiàng)目AAAAABBBBBCB測(cè)試順序號(hào)252627282930313233343536測(cè)試項(xiàng)目DBEBBBBBCCCC測(cè)試順序號(hào)373839404142434445464748測(cè)試項(xiàng)目CDCECCCCCDDD測(cè)試順序號(hào)495051525354555657585960測(cè)試項(xiàng)目DDEDDDDDEEEE測(cè)試順序號(hào)616263646566測(cè)試項(xiàng)目EEEEEE表1測(cè)試項(xiàng)目數(shù)為5時(shí)測(cè)試順序安排表表2各項(xiàng)目測(cè)試10次時(shí)測(cè)試結(jié)果列表，數(shù)字代表對(duì)應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果測(cè)試次數(shù)ABCDE1118334657221934475833203548594421364960552237506161328415262714294253638153043546491631445565101732455666平均值A(chǔ)vBvCvDvEv平均值±3SDAv±3SDBv±3SDCv±3SDDv±3SDEv±3SD表3項(xiàng)目之間交叉列表縱向代表施污染項(xiàng)目橫向代表受污染項(xiàng)目ABCDEA6(A→B)8(A→C)10(A→D)12(A→E)B7(B→A)23(B→C)25(B→D)27(B→E)C9(C→A)24(C→B)38(C→D)40(C→E)D11(D→A)26(D→B)39(D→C)51(D→E)E13(E→A)28(E→B)41(E→C)52(E→D)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析(方法二)◆各項(xiàng)目的均值如表2，計(jì)算10次測(cè)試結(jié)果的均值，并計(jì)算SD值◆表3中顯示了試劑之間攜帶污染初實(shí)驗(yàn)后的初步結(jié)果：a將表格內(nèi)測(cè)試順序號(hào)代表的位置處輸入該項(xiàng)目對(duì)應(yīng)的測(cè)試結(jié)果；b以（A→B）A項(xiàng)目對(duì)B項(xiàng)目為例，縱向施污染項(xiàng)目A對(duì)橫向受污染項(xiàng)目B的交叉，對(duì)應(yīng)測(cè)試序號(hào)6號(hào)，項(xiàng)目B的結(jié)果同B項(xiàng)目的（均值±3SD）比較，在范圍內(nèi)認(rèn)為沒有影響，不在范圍內(nèi)，則初步判斷有攜帶污染。

2、確認(rèn)實(shí)驗(yàn)◆由攜帶污染初實(shí)驗(yàn)篩選出懷疑有污染的項(xiàng)目組合，假設(shè)（A→B）同（D→E）◆即A項(xiàng)目對(duì)B項(xiàng)目（A項(xiàng)目做好后緊接著做B項(xiàng)目），D項(xiàng)目對(duì)E項(xiàng)目（D項(xiàng)目做好后緊接著做E項(xiàng)目）懷疑有污染◆由于初實(shí)驗(yàn)的項(xiàng)目交叉結(jié)果只是一次測(cè)試的結(jié)果，可能有偶然因素，還必須進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。

確認(rèn)實(shí)驗(yàn)◆以（A→B）為例，（D→E）的情況相同◆先單獨(dú)做A項(xiàng)目，緊接著連續(xù)測(cè)試3次B項(xiàng)目，第一個(gè)B項(xiàng)目的結(jié)果受A項(xiàng)目影響最大，第三個(gè)B項(xiàng)目的結(jié)果因?yàn)橛?次自身沖洗，結(jié)果比較準(zhǔn)確。比較第一個(gè)B項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果是否在B項(xiàng)目（均值±3SD）以內(nèi)，如果影響程度和初實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近，可以判斷A項(xiàng)目對(duì)B項(xiàng)目有攜帶污染。

確認(rèn)實(shí)驗(yàn)AB1B2B3DE1E2E3表4攜帶污染確認(rèn)實(shí)驗(yàn)

施污染項(xiàng)目AD受污染項(xiàng)目BE測(cè)試值1B1E1測(cè)試值2B2E2測(cè)試值3B3E3二、樣本針攜帶污染方案一：方法：同一檢測(cè)項(xiàng)目濃度相差較大的A標(biāo)本（高濃度），B標(biāo)本（低濃度）。檢測(cè)順序：a1、a2、b1、b2、b3

計(jì)算：Q=（b1-b3）/（a2-b3）*100%

評(píng)價(jià)：以Q小于10%為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

局限性：結(jié)果與選擇的標(biāo)本濃度有關(guān)系例1：選擇高濃度的ALT樣本濃度值為2020U/L，低濃度ALT樣本第一次檢測(cè)結(jié)果為40U/L，第三次檢測(cè)結(jié)果為20U/L。通過計(jì)算攜帶污染率：Q=(40-20)/2000*100%=1%。

例2：選擇高濃度的Cl樣本濃度值為140mm/L，低濃度Cl樣本第一次檢測(cè)結(jié)果為86mm/L，第三次檢測(cè)結(jié)果為80mm/L。通過計(jì)算攜帶污染率：Q=(86-80)/60*100%=10%。上例中，例1的攜帶污染率只有1%，由于結(jié)果正好在醫(yī)學(xué)決定水平附近，因此對(duì)臨床判斷有較大影響。例2的攜帶污染率盡管達(dá)到了10%，但是對(duì)臨床判斷不會(huì)產(chǎn)生大的影響。因此，使用該方法評(píng)價(jià)樣本針攜帶污染需考慮樣本的實(shí)際濃度。

方案二：方法：收集高濃度樣本H和低濃度樣本L，將高濃度樣本H等體積分成10個(gè)高濃度樣本；另將低濃度樣本L等體積分成11個(gè)低濃度樣本，總共得到21個(gè)樣本。檢測(cè)順序：3L2H1L2H4L2H1L2H1L2H1L(注：順序前的數(shù)字代表測(cè)試次數(shù)，如3L代表連續(xù)測(cè)試3個(gè)低值樣本)

定義：L-L值為緊跟在低值標(biāo)本后低值標(biāo)本的結(jié)果

H-L值為緊跟在高值標(biāo)本后低值標(biāo)本的結(jié)果

攜帶污染指標(biāo)：=（H-L）結(jié)果的平均值

減

（L-L）結(jié)果的平均值判斷標(biāo)準(zhǔn)：攜帶污染指標(biāo)小于3SDSD是（L-L）結(jié)果的SD值

應(yīng)用舉例某次實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下樣本結(jié)果L-LH-LL130L22828L32929H11205H21210L44545H31201H41218L54343L63131L73232L83232H51224H61204L94242H71221H81218L104747H91209H101217L114040Mean29.843.4SD1.482.70結(jié)果分析：H-L均值43.4L-L均值29.8攜帶污染指標(biāo)=13.63SD=4.44攜帶污染指標(biāo)>3SD樣本針存在攜帶污染三、比色杯攜帶污染

以日立7600P模塊為例：P模塊生化分析儀有160個(gè)比色杯，根據(jù)P模塊的分析流程，進(jìn)入開始狀態(tài)，儀器機(jī)械部分進(jìn)行復(fù)位后，開始清洗比色杯，之后進(jìn)入加樣狀態(tài)，首先從1號(hào)樣本杯進(jìn)行加樣，之后按照固定規(guī)律進(jìn)行加樣。比色杯污染實(shí)驗(yàn)利用比色杯重復(fù)使用的特點(diǎn)，即第1個(gè)測(cè)試和第161個(gè)測(cè)試的比色杯是同一個(gè)比色杯的特點(diǎn)，現(xiàn)在第一圈測(cè)試施污染項(xiàng)目，在第二圈即161號(hào)測(cè)試開始，輸入受污染項(xiàng)目。Mg2+(來(lái)自AMYKit)Mg2+(來(lái)自樣本)比色杯污染AMY測(cè)定Mg2+測(cè)定Mg2+來(lái)自AMYKit的Mg2+在比色杯中殘留產(chǎn)生正誤差比色杯污染實(shí)驗(yàn)方法以項(xiàng)目A對(duì)B、C、D、E4個(gè)項(xiàng)目比色杯污染（項(xiàng)目輸入順序）

順序號(hào)檢測(cè)項(xiàng)目順序號(hào)檢測(cè)項(xiàng)目1A161B(A→B)2A162B(A→B)3A163B(A→B)4A164B(A→B)5A165C(A→C)6A166C(A→C)7A167C(A→C)8A168C(A→C)9A169D(A→D)10A170D(A→D)11A171D(A→D)12A172D(A→D)順序號(hào)檢測(cè)項(xiàng)目順序號(hào)檢測(cè)項(xiàng)目13A173E(A→E)14A174E(A→E)15A175E(A→E)16A176E(A→E)17B177B18B178B19B179B20B180B21C181C22C182C23C183C24C184C

順序號(hào)檢測(cè)項(xiàng)目順序號(hào)檢測(cè)項(xiàng)目25D185D26D186D27D187D28D188D29E189E30E190E31E191E32E192E…Water…Water…Water160WaterWater代表可用一個(gè)項(xiàng)目試劑盒裝入蒸餾水，按照測(cè)試順序填滿第一圈結(jié)果分析各項(xiàng)目比色杯不受影響時(shí)測(cè)試結(jié)果

測(cè)試次數(shù)BCDE118222630219232731320242832417818218619051791831871916180184188192平均值BvCvDvEv結(jié)果分析各項(xiàng)目受A項(xiàng)目比色杯影響時(shí)測(cè)試結(jié)果

測(cè)試次數(shù)BCDE1161165169173216216617017431631671711754164168172176平均值BvACvADvAEvA影響率BvA/Bv*100%CvA/Cv*100%DvA/Dv*100%EvA/Ev*100%四、攪拌棒攜帶污染