康欣口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)

康欣口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)

【關(guān)鍵詞】康欣口服液；丹參；地骨皮；高效液相法；淫羊藿苷

摘要：目的建立改進(jìn)康欣口服液標(biāo)準(zhǔn)的方法。方法采用薄層色譜法對(duì)康欣口服液中的丹參、地骨皮進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定淫羊藿苷的含量。結(jié)果定性鑒別方法專屬性強(qiáng)。在~μg范圍內(nèi)淫羊藿苷峰面積與濃度線性關(guān)系良好，r=8；樣品平均加樣回收率為%(n=9)，RSD為%。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制康欣口服液的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：康欣口服液；丹參；地骨皮；高效液相法；淫羊藿苷

ImprovementoftheQualityStandardofKangxinOralLiquid

Abstract：ObjectiveToimprovethestandardforqualityofKangxinOrallayerchromatography(TLC)wasusedforqualitiveidentificationofSalviamiltiorrrhizaandLyciumicariinwasdeterminedbyTLCidentificationwashighlyicariinareaandcontentshowedagoodlinearrelationshipattherangeof~μgandcorrelationcoeffcientwas8.Theaveragerecoveryoftheaddedsamplewas%(n=9),RSDwas%.ConclusionThemethodissimple,quick,accurateforthequalitycontrolofKangxinOralLiquid.

Keywords：KangxinOral;Salviamiltiorrhiza;Lyciumchinensis;HPLC;Icariin

康欣口服液由何首烏、淫羊藿、丹參、地骨皮、黃芪等13味中藥組成，具有補(bǔ)腎填精、健脾益氣、養(yǎng)血活血、抗老防衰的功能。用于脾腎虛衰，氣血不足，早衰神疲，腰膝酸軟，失眠健忘等癥其療效確切。為了提高產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，保證其臨床療效，在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了對(duì)方中丹參、地骨皮的TLC鑒別，原定量指標(biāo)是測(cè)定何首烏中大黃素，我們根據(jù)本品作用和用途，現(xiàn)改為測(cè)定淫羊藿中的淫羊藿苷作為定量指標(biāo)，采用HPLC法，并優(yōu)選了提取、測(cè)定條件，建立了本品的含量測(cè)定方法。

1儀器與試藥1儀器Waters-600高效液相色譜儀；Waters2996DAD檢測(cè)器；WatersMillennum32色譜工作站；SartoriusBP211D型電子天平；電熱恒溫干燥箱；KQ-500DE型醫(yī)用數(shù)控超聲清洗儀；TDL-408型臺(tái)式離心機(jī)。2試藥薄層色譜用硅膠G、硅膠H、羧甲基纖維素鈉；原兒茶醛對(duì)照品；淫羊藿苷對(duì)照品；康欣口服液；乙腈；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

薄層色譜鑒別

丹參取康欣口服液50ml置分液漏斗中，加乙醚萃取3次，20ml/次，合并乙醚取液，水浴蒸干，殘?jiān)蒙倭考状既芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸Ｈ∪钡⒌年幮灾苿┩ㄖ苽潢幮詫?duì)照液，再取原兒茶醛對(duì)照品，加甲醇適量制成每毫升含1mg的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［1］，吸取供試品溶液和陰性對(duì)照液各10μl，對(duì)照品溶液2μl分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上。以苯醋酸乙酯甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以3%FeCl3乙醇液，于105℃下加熱至斑點(diǎn)清晰。置日光下檢視，供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

地骨皮取康欣口服液50ml分液漏斗中，加乙醚萃取3次，50ml/次，合并乙醚萃取液，水浴蒸干，殘?jiān)蒙倭考状既芙庾鳛闉楣┰嚻啡芤骸Ｈ∪钡毓瞧さ年幮灾苿┩ㄖ苽潢幮詫?duì)照液，再取地骨皮對(duì)照藥材2g，加甲醇50ml提取，制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［1］，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上。以苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同著色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖2?？敌揽诜?.康欣口服液3.康欣口服液4.原兒茶醛對(duì)照品5.缺丹參陰性樣品

圖1康欣口服液中丹參的TLC康欣口服液2.康欣口服液3.康欣口服液4.地骨皮對(duì)照藥材5.缺地骨皮的陰性樣品

圖2康欣口服液中地骨皮的TLC

含量測(cè)定

對(duì)照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含8mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加稀乙醇超聲提取3次，20min/次，乙醇加入量分別為10，10，5ml，濾過(guò)，濾液定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，即得。

提取時(shí)間的考察精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加稀乙醇超聲提取不同時(shí)間，放冷后濾過(guò)，濾注定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，注入高效液相色譜儀測(cè)定其含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1不同時(shí)間超聲處理的比較

以上結(jié)果表明，超聲20min含量不再增加，為提取完全，故確定超聲處理時(shí)間為20min。

提取方法考察精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加稀乙醇分別用不同的提取方法提取20min，放冷后濾過(guò)，濾液定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，注入高效液相色譜儀測(cè)定其含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2不同提取方法的比較

以上結(jié)果表明，超聲提取含量的同時(shí)超聲簡(jiǎn)便，故確定提取方法為超聲提取。

提取溶劑的考察精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，加不同溶劑20ml，用超聲提取3次，20min/次，放冷后濾過(guò)，濾液定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，注入高效液相色譜儀測(cè)定其含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3不同溶劑提取的比較

以上結(jié)果表明，50%乙醇提取最完全，故確定提取溶劑為50%乙醇。

空白對(duì)照溶液的制備取按處方量及制法工藝要求制成的不含羊藿的陰性對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

色譜條件色譜柱為DiamonsilC18(mm×250mm,μm)柱；檢測(cè)波長(zhǎng)270nm；流動(dòng)相為乙腈-水；流速ml/min；進(jìn)樣量20μl。按上述條件，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、空白對(duì)照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4、圖5。從色譜圖可見(jiàn)，其他成分對(duì)淫羊藿苷的測(cè)定無(wú)干擾，符合測(cè)定要求。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別精密吸取對(duì)照品溶液，，，，，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。各進(jìn)樣20μl，以峰面積Y與濃度X進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=98，r=8。以上結(jié)果表明：在~μg/ml范圍內(nèi)淫羊藿苷峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表4。

圖3淫羊藿苷對(duì)照品色譜圖

圖4康欣口服液樣品色譜圖

圖5空白對(duì)照色譜圖

表4淫羊藿苷對(duì)照品測(cè)定結(jié)果

精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，淫羊藿苷峰面積的RSD為%。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液在0，4，8，12，16h，分別進(jìn)樣20μl，測(cè)得樣品中淫羊藿苷峰面積的RSD為%。

重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品分別制備5份供試品溶液，測(cè)得峰面積并計(jì)算含量，RSD為%。

回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，取同一批號(hào)樣品9份，每份ml，分別按樣品中淫羊藿苷含量的80%，100%，120%加入淫羊藿苷對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

n=6，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，此方法可靠性良好。

樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，按上述色譜條件測(cè)定(n=3)。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6樣品測(cè)定結(jié)果

3討論

在鑒別丹參時(shí)，供試液的制備方法，曾比較了加醋酸乙酯和乙醚萃取，相比較乙醚萃取提取效率較高；在選擇展開(kāi)劑時(shí)，比較了文獻(xiàn)報(bào)道的十幾種展開(kāi)系統(tǒng)并改變相應(yīng)的比例［2，3］，發(fā)現(xiàn)以苯-醋酸乙酯-甲酸為展開(kāi)系統(tǒng)適合本方鑒別。

在鑒別地骨皮時(shí)，曾用環(huán)已烷醋酸乙酯冰醋酸、環(huán)已烷醋酸乙酯冰醋酸、苯-醋酸乙酯冰醋酸、環(huán)已烷丙酮、環(huán)已烷氯仿醋酸乙酯甲酸為展開(kāi)劑［3］，分離效果不理想，且陰性有干擾；經(jīng)不斷調(diào)整后改為以環(huán)已烷醋酸乙酯甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照色譜中無(wú)此斑點(diǎn)。分離結(jié)果較理想。

原標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定以何首烏中的2，3，5，4’四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷作為定量指標(biāo)控制制劑的質(zhì)量，但2，3，4，5，4’四羥基二苯乙烯2OβD葡萄苷在水溶液中的穩(wěn)定性不好，故改測(cè)淫羊藿中的淫羊藿苷含量為制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)，以淫羊藿苷為定量指標(biāo)較原標(biāo)準(zhǔn)方法準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性及重現(xiàn)性均更好，可更有效控制康欣口服液的質(zhì)量。

目前，中成藥中淫羊藿含量測(cè)定多以數(shù)是采用HPLC法測(cè)定淫羊藿苷。在流動(dòng)相的選擇方面，曾采用甲醇mol/L磷酸二氫鈉、乙腈水、乙腈水［4］，最終確定乙腈水為本品含量測(cè)定的流動(dòng)相。