演示文稿土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)已用

演示文稿土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)已用當(dāng)前第1頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)（優(yōu)選）土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)已用當(dāng)前第2頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)一、課題背景1、尿素的利用

尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因

土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH33、本課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌②統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌當(dāng)前第3頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)1、實(shí)例：啟示：尋找目的菌種時(shí)要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。原因：因?yàn)闊崛獪囟?0～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有耐熱的Taq細(xì)菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。一、研究思路㈠篩選菌株㈡統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目㈢設(shè)置對照當(dāng)前第4頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)

要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等；方法：⑴抑制大多數(shù)微生物的生長⑵造成有利于該菌生長的環(huán)境結(jié)果：培養(yǎng)一定時(shí)間后，該菌數(shù)量上升，再通過平板劃線法或稀釋涂布平板法等方法對它進(jìn)行純化培養(yǎng)分離。2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：

人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。當(dāng)前第5頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素〖思考1〗當(dāng)前第6頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基，是由于加入了凝固劑

。②從功能上看屬于

培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基的

只有尿素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培養(yǎng)基上生長，此培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基?！妓伎?〗該培養(yǎng)基對微生物

（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是

。具有

只有能夠以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長選擇固體瓊脂選擇氮源〖思考3〗15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4當(dāng)前第7頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)

培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。4、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4當(dāng)前第8頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)活學(xué)活用1.在缺乏氮源的培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長。利用上述選擇培養(yǎng)基依次能從混雜的微生物群體中分離出(

)A.乳酸菌、金黃色葡萄球菌、放線菌B.固氮細(xì)菌、大腸桿菌、放線菌C.固氮細(xì)菌、霉菌、放線菌D.固氮細(xì)菌、金黃色葡萄球菌、放線菌C當(dāng)前第9頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)（1）原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。（2）常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：1.活菌計(jì)數(shù)法（3）計(jì)算公式：（間接計(jì)數(shù)法）當(dāng)前第10頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)想一想，如何根據(jù)平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板上的菌落數(shù)的平均值，然后按以下公式進(jìn)行計(jì)算。旁欄思考題每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。當(dāng)前第11頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)實(shí)例分析P22

第二位同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果更接近真實(shí)值。因?yàn)榈谝晃煌瑢W(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。

你認(rèn)為哪個(gè)同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值？你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)？

都需要。第一位同學(xué)在該濃度下可以多涂布幾個(gè)平板；第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了三個(gè)平板，但是其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另外2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值，可以在該濃度下重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。當(dāng)前第12頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)注意事項(xiàng)①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。②為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度涂布三個(gè)或三個(gè)以上的平板，培養(yǎng)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，計(jì)算出菌落平均值。③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。④恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵，一般以三個(gè)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右時(shí)為最好。當(dāng)前第13頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)2、顯微鏡直接計(jì)數(shù)：

利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。（二）.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：

不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；缺點(diǎn)當(dāng)前第14頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)將含已知數(shù)目的紅細(xì)胞液體與待測的菌液按1：1均勻混合，在顯微鏡下數(shù)出各自的數(shù)目，然后求菌液中的細(xì)胞數(shù)目。（比例計(jì)數(shù)法，類似與標(biāo)志重捕法）待測樣品等量的已知含量的紅細(xì)胞混勻涂抹測定：

紅細(xì)胞數(shù)目細(xì)菌數(shù)目計(jì)算單位體積內(nèi)的細(xì)菌數(shù)目細(xì)菌紅細(xì)胞【補(bǔ)充】顯微鏡直接計(jì)數(shù)是測定微生物的方法。當(dāng)前第15頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)舉例：已知紅細(xì)胞濃度為M個(gè)/mL，從體積為NmL的大腸桿菌培養(yǎng)液中取出大桿菌液與紅細(xì)胞液等量均勻混合后，涂片，染色，鏡檢。在同一視野中發(fā)出有紅細(xì)胞W個(gè)，大腸桿菌Y個(gè)，求NmL大腸桿培養(yǎng)液中大腸桿菌的個(gè)數(shù)X是多少？X＝N×M×YW(個(gè))觀察到的紅細(xì)胞平均數(shù)/觀察到的細(xì)菌平均數(shù)＝紅細(xì)胞含量/細(xì)菌含量（類似于標(biāo)志重捕法）公式W/Y＝M/X(每mL中）NmL大腸桿培養(yǎng)液中大腸桿菌的個(gè)數(shù)X為：當(dāng)前第16頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)2.用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。在某稀釋濃度下某同學(xué)做了若干個(gè)平板并統(tǒng)計(jì)每個(gè)平板的菌落數(shù)，最接近樣品中菌體數(shù)真實(shí)值的是(

)A.菌落數(shù)量最多的平板B.菌落數(shù)量最少的平板C.菌落數(shù)量適中的平板D.取若干個(gè)平板菌落數(shù)量的平均值D活學(xué)活用當(dāng)前第17頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)

設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。（三）設(shè)置對照：設(shè)置對照的方法：①空白對照：不給對照組任何處理因素；②條件對照：

給對照組施以部分實(shí)驗(yàn)因素，但不是所要研究的處理因素；③自身對照：

對照組和實(shí)驗(yàn)組都在同一研究對象上進(jìn)行；④相互對照：

不單設(shè)對照組，而是幾個(gè)實(shí)驗(yàn)組相互對照。當(dāng)前第18頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)教材提供的案例中A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種：

一是由于土樣不同；

二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。如何設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)來確定原因？方案一：

其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A同學(xué)操作無誤；

如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。實(shí)例：教材P23當(dāng)前第19頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)教材提供的案例中A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種：

一是由于土樣不同；

二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。如何設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)來確定原因？方案二：

將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。

實(shí)例：教材P23小結(jié)：通過這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置是必不可少的。當(dāng)前第20頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)9當(dāng)前第21頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括對實(shí)驗(yàn)方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實(shí)施步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。當(dāng)前第22頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)二實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作下面是土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，請結(jié)合教材提供的資料，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，并寫出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案：當(dāng)前第23頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)菌落計(jì)數(shù)配制土壤溶液系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)方案：當(dāng)前第24頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)（一）土壤取樣（三）樣品的稀釋（四）取樣涂布（五）微生物的培養(yǎng)與觀察并計(jì)數(shù)（六）鑒定

實(shí)驗(yàn)的具體操作

（二）制備培養(yǎng)基：當(dāng)前第25頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)◆應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行◆分離不同的微生物采用不同的稀釋度。原因：不同微生物在土壤中含量不同。目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。（三）樣品的稀釋特別注意的幾個(gè)具體操作

當(dāng)前第26頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)

為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？①土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的。

測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？

為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。旁欄思考題微生物細(xì)菌放線菌真菌稀釋度104、105、106103、104、105102、103、104③保證獲得菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。②稀釋度當(dāng)前第27頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)（四）取樣涂布◆實(shí)驗(yàn)時(shí)要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等?！羧绻玫搅?個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。特別注意的幾個(gè)具體操作

當(dāng)前第28頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)3.下列是關(guān)于“檢測土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是(

)A.用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板。B.取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上。C.將實(shí)驗(yàn)組和對照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)。D.確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)?；顚W(xué)活用D當(dāng)前第29頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)4.測定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用104、105和106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，而測定真菌的數(shù)量一般選用102、103和104倍稀釋，其原因是(

)A.細(xì)菌個(gè)體小，真菌個(gè)體大B.細(xì)菌易稀釋，真菌不易稀釋C.細(xì)菌在土壤中數(shù)量比真菌多D.隨機(jī)的，沒有原因C活學(xué)活用當(dāng)前第30頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)（五）微生物的培養(yǎng)與觀察并計(jì)數(shù)

在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。

選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。

培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。

細(xì)菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d

放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d

霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。

當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。

特別注意的幾個(gè)具體操作

當(dāng)前第31頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)微生物的培養(yǎng)與觀察

關(guān)注菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細(xì)菌的重要手段。當(dāng)前第32頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)當(dāng)前第33頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)〖注意〗研究未知的微生物，一定要注意進(jìn)行規(guī)范的無菌操作，以防被致病的微生物感染，實(shí)驗(yàn)后，一定要洗手。（六）鑒定：篩選后必鑒定鑒定（鑒別）培養(yǎng)基：加入某種指示劑或化學(xué)藥品，不影響微生物的生存。1、酚紅培養(yǎng)基：鑒定分解尿素的細(xì)菌是否存在2、伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基：鑒定大腸桿菌是否存在特別注意的幾個(gè)具體操作

當(dāng)前第34頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)1、酚紅培養(yǎng)基：

鑒定分解尿素的細(xì)菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)→酚紅變紅→脲酶陽性2、伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基：

鑒定大腸桿菌。原理：代謝產(chǎn)物與伊紅—美藍(lán)結(jié)合→菌落呈深紫色并帶有金屬光澤。鑒定（鑒別）培養(yǎng)基的實(shí)例：當(dāng)前第35頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作提示步驟實(shí)驗(yàn)操作操作提示土壤取樣從酸堿度接近

潮濕的土壤中取樣。先鏟去表層土_____左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。取樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封都要經(jīng)過____制備培養(yǎng)基分別配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和

為唯一氮源的

培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為

，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了

作用3cm選擇滅菌選擇中性尿素對照填一填當(dāng)前第36頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)樣品的稀釋和涂布①稱取

g土樣加到盛有

mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻；②吸取上清液

mL，轉(zhuǎn)移至盛有

mL的無菌水的無菌大試管中，按照上圖流程進(jìn)行樣品的稀釋；③按照由107～103稀釋度的順序分別吸取

mL進(jìn)行

操作。按照濃度

到

的順序涂布平板，不必更換移液管①應(yīng)在

旁稱取土樣；②由于初次實(shí)驗(yàn)，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍

______倍的稀釋液；③實(shí)驗(yàn)時(shí)要對所用的平板、試管作好

。如培養(yǎng)皿要注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、

、培養(yǎng)物等高稀釋度1090190.1平板涂布低火焰103～107標(biāo)記當(dāng)前第37頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)培養(yǎng)將涂布好的培養(yǎng)皿放在______℃溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，會有不同的菌落產(chǎn)生。比較牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯____選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，才說明選擇培養(yǎng)基有____作用30～37選擇多于當(dāng)前第38頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)計(jì)數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目____時(shí)，選取菌落數(shù)在__

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對

___個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出_

，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目①如果得到了____________菌落數(shù)目符合要求的平板，則說明稀釋操作比較成功；②如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明實(shí)驗(yàn)不精確，需要___

；③在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目平均值重新實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定30～30032個(gè)或2個(gè)以上當(dāng)前第39頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)三、操作提示

無菌操作

做好標(biāo)記

制定計(jì)劃

四、結(jié)果分析與評價(jià)

（一）如何判斷培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落？

對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。

牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。當(dāng)前第40頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)（二）如何判斷樣品的稀釋操作是否成功？

如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，需要進(jìn)一步分析產(chǎn)生差異的原因。

（三）重復(fù)組的結(jié)果是否一致的判定方法：四、結(jié)果分析與評價(jià)

當(dāng)前第41頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)課題小結(jié)稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法目的菌株當(dāng)前第42頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)1.對細(xì)菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是（）

A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行B.至少接種一種細(xì)菌

C.接種一個(gè)細(xì)菌D.及時(shí)補(bǔ)充消耗的營養(yǎng)物質(zhì)2.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（）

A.培養(yǎng)細(xì)菌B.培養(yǎng)真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素課堂訓(xùn)練A

CD當(dāng)前第43頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)4.下列說法不正確的是（）

A.科學(xué)家從70－80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶

B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值

C.設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度

D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）

A.較多的氮源物質(zhì)B.較多的碳源物質(zhì)

C.青霉素類藥物D.高濃度食鹽BC當(dāng)前第44頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)（寧夏，15分）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮______、______和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、______、___________________等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。（2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行________（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和______；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能__________。（3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_______。（4）通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的____________。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_________。

（6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_______處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。溫度

酸堿度易培養(yǎng)生活周期短滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)比例合適鑒定(或分類)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。滅菌當(dāng)前第45頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)8當(dāng)前第46頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)當(dāng)堂檢測1.通常用來作為菌種鑒定的重要依據(jù)是(

)A.菌落

B.細(xì)菌形態(tài)

C.細(xì)菌體積

D.細(xì)菌結(jié)構(gòu)A2.從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，下列實(shí)驗(yàn)操作不正確的是(

)A.將土壤用無菌水稀釋，制備103～106土壤稀釋液

B.將不同濃度的土壤稀釋液涂布于不同平板上

C.用加入剛果紅指示劑的選擇培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌

D.從周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落中挑取能夠分泌脲酶的菌株C當(dāng)前第47頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)3.請選出下列正確的操作步驟(

)①土壤取樣②稱取10g土壤，取出加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中③吸取0.1mL土壤溶液進(jìn)行平板涂布④依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A.①→②→③→④ B.①→③→②→④C.①→②→④→③ D.①→④→②→③C4.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑的目的是(

)A.篩選出能分解尿素的細(xì)菌

B.對分離的菌種作進(jìn)一步鑒定

C.作細(xì)菌的營養(yǎng)成分

D.如指示劑變藍(lán)就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素B當(dāng)前第48頁\共有57頁\編于星期四\3點(diǎn)5.甘蔗是南方地區(qū)燃料酒精生產(chǎn)的重要原料。利用甘蔗生產(chǎn)燃料酒精的一般工藝流程為：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母菌發(fā)酵→蒸餾→成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種，對野生酵母菌進(jìn)行誘變后通過篩選可以得到具有這些特性的突變菌，誘變及篩選過程如下：步驟1：野生菌液體培養(yǎng)一段時(shí)間后接受紫外線照射誘變處理。步驟2：制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基