丹皮酚偶氮類化合物抑菌活性的初步研究-生物科學(xué)畢業(yè)設(shè)計論文

第第21頁共21頁ADDINCNKISM.UserStyle丹皮酚偶氮類化合物抑菌活性的初步研究摘要一直以來，研究和開發(fā)高效，低毒，廣譜的抑菌劑用于植物病害的防治是眾多科研工作者的目標(biāo)。丹皮酚作為來源于植物的天然活性物質(zhì)，因其具有廣譜的抑菌活性而受到廣泛關(guān)注，已有的研究表明，其衍生物也有著不同的抑菌活性。本文選取丹皮酚及10種丹皮酚偶氮類化合物，采用抑菌圈生長速率法，研究了其對玉米大斑病菌Exserohilumturcicum(Pass)LeonardetSuggs、馬鈴薯早疫病菌Alternariadauci(Kuhn)GrovesetSkolkof.sp、番茄葉霉病菌Cladosporiumfulvum和番茄灰霉病菌Botrytiscinerea四種病原真菌的抑菌活性。實驗結(jié)果表明，10種丹皮酚偶氮類化合物在濃度為0.05mg/mL時對四種病原真菌的抑菌率均在58.23%以上；丹皮酚偶氮類化合物抑菌效果明顯好于母體化合物丹皮酚，尤其是化合物3d和3j對四種病原真菌具有較高的抑菌活性，其抑菌率都在96.77%以上。本研究的開展為新型植物源抑菌劑的開發(fā)奠定了一定的理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：丹皮酚，偶氮類化合物，菌絲生長速率，抑菌活性

APRELIMINARYSTUDYONANTIFUNGALACTIVITYOFPAEONOLAZOCOMPOUNDSABSTRACTResearchandexploitationhighefficient,lowtoxicity,broad-spectrumantifungalpesticides,andusedfortheplantdiseasepreventionandcontrolisalwaysthekeyprobleminagriculture.Paeonolwasseparatedfromplants,anditiswidelyattentionbecauseofitsspectrumofantimicrobialactivity.Recentstudydemonstratesthethatpaeonolderivativesalsohavedifferentantifungalactivity.Thispaperinvestigates

Theinhibitoryeffectsof

tenkindsofpaeonolazocompoundsand

on

pathogenicfungusExserohilumturcicum(Pass)LeonardetSuggs,Alternariadauci(Kuhn)GrovesetSkolkof.Sp,CladosporiumfulvumangBotrytiscinereaweretestedbyadoptingmyceliumgrowthratemethod.Theresultsshowthatwhentheconcentrationis0.05mg/ml,paeonolazocompoundsantifungalrateover58.23%,andthe10kindsofazocompoundswerestrongerthanthatofpaeonol.Andinparticulartheantifungalratesofcompounds3dand3jaremorethan96.77%.Thisstudywillprovidetheforthedevelopmentofnewplant-basedantifungalpesticides.Keywords:paeonol,azocompound,mycelialgrowthrate,antifungalactivity目錄第1章緒論 41.1丹皮酚簡介和活性 41.1.1丹皮酚簡介 41.1.2丹皮酚活性 41.2偶氮類化合物簡介和活性 51.2.1偶氮類化合物簡介 51.2.2偶氮類化合物活性 51.3研究目的和意義 5第2章實驗材料和方法 72.1實驗材料 72.1.1供試菌種 72.1.2供試化合物 72.2主要儀器設(shè)備和試劑 82.2.1儀器與設(shè)備 82.2.2試劑 92.3實驗方法和步驟 92.3.1實驗方法 92.3.2實驗步驟 9第3章結(jié)果與分析 113.1抑菌活性結(jié)果 113.2抑菌活性結(jié)果分析 153.3結(jié)構(gòu)與活性關(guān)系分析 15第4章 174.1結(jié)論 174.2討論 17致謝 19參考文獻(xiàn) 20第1章緒論1.1丹皮酚簡介和活性1.1.1丹皮酚簡介丹皮酚（Paeonol），又稱為牡丹酚或芍藥醇。分子式為C9H10O3，相對分子質(zhì)量為166.18，化學(xué)式為2-羥基-4-甲氧基苯乙酮,是從毛茛科植物牡丹根皮和蘿科植物徐長卿Pyc-nostelmaPaniculatum(Bunge)K.Schum干燥根或全草中分離得到的主要活性物質(zhì)[1]。牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr）是芍藥科、芍藥屬，多年生的小灌木[2]。牡丹是我國特有的木本花卉，在河北柏山、陜西漢中、河南洛陽、山東荷澤、安徽銅陵等地均有大面積種植，有調(diào)查顯示，我國牡丹的種植面積已超過100萬畝。我國有著大量的牡丹植物資源，是丹皮酚的自然資源寶庫，而且，目前對丹皮酚也有了多種提取技術(shù)，并且可以得到較高的提取率，現(xiàn)在通常用水蒸汽蒸餾法、溶劑法、02超臨界流體萃取法等方法分離提取丹皮酚[3-5]；同時，還有文獻(xiàn)報道了5種丹皮酚人工合成途徑，例如汪秋安以間苯二酚和冰醋酸作為原料，通過進(jìn)行傅-克酰基化反應(yīng)，甲基化反應(yīng)得到丹皮酚，產(chǎn)率可達(dá)到84%[6]；Ramesh等人通過微波輻射，以2,4-二甲氧基苯乙酮為原料,合成丹皮酚,產(chǎn)率為75%[7]。1.1.2丹皮酚活性牡丹皮始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是一味常用的藥材，其性微寒，味略苦。常用來活血化癖，清熱涼血。臨床藥理學(xué)方面的研究表明丹皮具有非常廣的藥理活性，例如在抗菌、抗炎、抗病毒、還有對心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等都有一定的作用。在臨床上牡丹經(jīng)常用來對多種頑固皮膚病、跌打損傷等病癥的治療，是一味重要中藥。由于丹皮酚結(jié)構(gòu)簡單，結(jié)構(gòu)式見圖1.1，卻有明顯的生物活性，受到國內(nèi)外科研人員的廣泛關(guān)注，同時因為易揮發(fā)、水溶性差等缺點在應(yīng)用方面受到限制[8]。目前，對丹皮酚有著非常廣泛的研究和應(yīng)用，在對其結(jié)構(gòu)修飾和改造也有大量的研究和相關(guān)文獻(xiàn)，包括合成了一系列的丹皮酚衍生物，并對其進(jìn)行相關(guān)活性的研究。但是對丹皮酚的研究主要集中在臨床應(yīng)用和日化產(chǎn)品方面，還未見到關(guān)于丹皮酚偶氮類化合物抑菌活性的相關(guān)文獻(xiàn)。圖1.1丹皮酚結(jié)構(gòu)式1.2偶氮類化合物簡介和活性1.2.1偶氮類化合物簡介偶氮類化合物（AZO）是指偶氮基─N=N─與兩個基團(tuán)相連接的一類化合物，化學(xué)通式為R′─N=N─R。目前主要通過重氮鹽的偶聯(lián)反應(yīng)途徑來合成偶氮類化合物，例如方治坤等人用多鉬酸氧化合成偶氮苯并噻唑[9]?，F(xiàn)在偶氮類化合物被廣泛應(yīng)用于化學(xué)染料，化學(xué)指示劑，食品著色劑等方面。1.2.2偶氮類化合物活性目前大量研究表明一些具有生物活性的物質(zhì)通過偶聯(lián)反應(yīng)生成偶氮類化合物后，會具有更好的生物活性。例如曹陽等人對丹皮酚與對氨基苯胂酸進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，合成了丹皮酚偶氮化合物，并采用合成的丹皮酚偶氮化合物對人體肝癌細(xì)胞株（HepG2細(xì)胞）進(jìn)行了抑制活性試驗，研究表明其合成化合物作用明顯強(qiáng)于母體化合物丹皮酚和阿散酸的單獨(dú)作用[10]。呂春霞等人以8-羥基喹啉為母體化合物合成了8種偶氮類化合物，并采用抑制菌絲生長速率法對所合成的一系列偶氮化合物進(jìn)行了抑菌活性測試。研究結(jié)果表明在供試化合物濃度為0.05mg/ml時，8種供試化合物中有2種具有良好的抑制活性[11]。1.3研究目的和意義我國作為一個農(nóng)業(yè)大國和人口大國，要用全世界約7%的耕地和約6%的淡水資源來供養(yǎng)全世界約22%的人口。在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展中農(nóng)藥的使用是維持農(nóng)作物高產(chǎn)的重要因素之一，化學(xué)農(nóng)藥由于價格低廉、抑菌殺菌效果好而被廣泛使用，有統(tǒng)計顯示，全世界每年使用近200萬噸農(nóng)藥，其中我國就占了占33.4萬噸[12-13]。隨著近年來化學(xué)農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)中的大規(guī)模使用，化學(xué)農(nóng)藥不僅對環(huán)境造成了嚴(yán)重的破壞，而且嚴(yán)重的危險到了人類和許多動物的健康。同時由于化學(xué)農(nóng)藥的長期使用，許多生物都產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，人們只能增加農(nóng)藥的使用頻率和劑量來達(dá)到殺菌效果，從而形成了使用量和使用頻率逐年增加的惡性循環(huán)。近年來研究報道表明眾多的化學(xué)農(nóng)藥對人體有著致畸、致癌的副作用，所以目前科研學(xué)者把研究方向轉(zhuǎn)向無毒或低毒的生物源殺菌劑的研發(fā)和利用上[14]。因此研發(fā)一種低成本，低毒，高效，低殘留和易降解的生物源農(nóng)藥對農(nóng)業(yè)發(fā)展、人類健康和環(huán)境保護(hù)有著重要的意義。本研究采用的是天然產(chǎn)物丹皮酚及其丹皮酚偶氮類化合物，與化學(xué)農(nóng)藥相比生物源藥物一般具有無毒或毒性小、易降解、對環(huán)境更友好、在人體和動物體內(nèi)無富集等優(yōu)點，但是由于天然提取藥物一般具有穩(wěn)定性差、提取成本高、成分復(fù)雜、檢測難等原因而使其使用受到限制。本文對丹皮酚和丹皮酚偶氮類化合物的活性進(jìn)行研究，一方面可以探究這10種化合物的抑菌活性，另一方面為新型植物源抑菌藥劑的研發(fā)奠定了一定的理論基礎(chǔ)，而且為深入研究其構(gòu)效與抑菌活性的關(guān)系，確定藥效最佳的化學(xué)結(jié)構(gòu)模型，為發(fā)現(xiàn)活性更佳、更有應(yīng)用開發(fā)前景的抑菌類植物源藥物。第2章實驗材料和方法2.1實驗材料2.1.1供試菌種4種供試病植物原真菌見表2.1，病原真菌由北方民族大學(xué)實驗室課題小組提供。表2.1供試菌種名稱編號供試菌株中文名供試菌株拉丁文名A玉米大斑病菌Exserohilumturcicum（Pass.）LeonardetSuggsB馬鈴薯早疫病菌Alternariadauci(Kuhn)GrovesetSkolkof.spC番茄葉霉病菌CladosporiumfulvumD番茄灰霉病菌Botrytiscinerea2.1.2供試化合物供試化合物由北方民族大學(xué)實驗室課題小組提供，通過丹皮酚與2，4-二硝基苯胺，鄰甲氧基苯胺，對甲苯胺，對甲氧基苯胺，3-硝基苯胺，對硝基苯胺，2-硝基苯胺，4-溴苯胺，苯胺，鄰氯苯胺，鄰甲苯胺，對氯苯胺的偶聯(lián)反應(yīng)，合成10種丹皮酚偶氮類化合物，偶聯(lián)反應(yīng)路線見圖2.1，10種供試化合物3a-3j的分子結(jié)構(gòu)見圖2.2。圖2.1偶氮類化合物合成路線圖目標(biāo)產(chǎn)物3a目標(biāo)產(chǎn)物3b目標(biāo)產(chǎn)物3c目標(biāo)產(chǎn)物3d目標(biāo)產(chǎn)物3e目標(biāo)產(chǎn)物3f目標(biāo)產(chǎn)物3g目標(biāo)產(chǎn)物3h目標(biāo)產(chǎn)物3i目標(biāo)產(chǎn)物3j圖2.210種供試化合物（3a-3j）的化學(xué)機(jī)構(gòu)2.2主要儀器設(shè)備和試劑2.2.1儀器與設(shè)備表2.2實驗所用儀器與設(shè)備序號儀器名稱型號生產(chǎn)廠家1電爐EH20Aplus北京伯泰科儀器有限公司2生化培養(yǎng)箱SHP-250上海精宏實驗設(shè)備有限公司3微生物潔凈工作臺SW-CG-1CV蘇凈集團(tuán)安泰公司4冰箱BCD-265F海爾公司5電子天平BS2000S北京賽多利斯天平有限公司6立式壓力蒸汽滅菌器XXQ-LS-50SⅡ上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療公司2.2.2試劑丙酮，葡萄糖，瓊脂粉，乙醇等（以上試劑均為分析純）2.3實驗方法和步驟本實驗流程圖見圖2.3。PDA培養(yǎng)基的制備10種丹皮酚偶氮類化合物的準(zhǔn)備PDA培養(yǎng)基的制備10種丹皮酚偶氮類化合物的準(zhǔn)備四種供試菌株活化 四種供試菌株活化配置丙酮藥液和制備帶藥培養(yǎng)基 配置丙酮藥液和制備帶藥培養(yǎng)基接菌并于(27接菌并于(27±1)℃培養(yǎng)3天1.抑菌率的計算1.抑菌率的計算2.抑菌活性分析圖2.3抑菌實驗流程圖2.3.1實驗方法目前，化合物抑菌活性測定的方法主要有兩種：生長速率法和孢子萌發(fā)法，本研究采用了菌絲生長速率法，生長速率法又稱為培養(yǎng)基加藥法。是將供試藥劑溶液與45℃-50℃的培養(yǎng)基混合均勻后制作平板，然后接上供試菌種，用含供試藥劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)病原菌，通過病原菌的菌絲生長速率來研究供試藥劑的抑菌活性[15-20]。2.3.2實驗步驟（1）PDA培養(yǎng)基的制備：（去皮的馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000ml），制作方法：本實驗需要約3000ml培養(yǎng)基，故稱取600g去皮馬鈴薯并切成小塊，在鐵鍋內(nèi)先加3000ml蒸餾水，并用記號筆標(biāo)記水的液面，待水煮沸后放入已經(jīng)切好的馬鈴薯小塊，待再次煮沸后計時30分鐘，然后用4層紗布濾除馬鈴薯塊，濾液仍倒入鐵鍋內(nèi)，加適量蒸餾水使其液面仍保持原標(biāo)記處，待煮沸后加入60g瓊脂，使瓊脂溶化后再加60g葡萄糖，并用玻璃棒不停地攪動，以免糊底，直到溶化后再次補(bǔ)足水量。充分溶解后趁熱用4層紗布過濾，然后用分裝在250ml的錐形瓶中并封口。（2）培養(yǎng)基的濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋先加蒸餾水至環(huán)形管刻度線，放上鋁鍋，鍋內(nèi)擺放需要滅菌的器材（其中包括盛有培養(yǎng)基的錐形瓶、洗凈包好的燒杯、裝有蒸餾水的錐形瓶等）。蓋上鍋蓋，關(guān)閉安全閥門并檢查密封，打開放氣閥，打開電源并觀察顯示器顯示的水位，設(shè)置高壓蒸汽滅菌鍋參數(shù)，121℃、0.11MP滅菌30分鐘，待冷空氣排空之后關(guān)閉排氣閥，滅菌結(jié)束后打開放氣閥，注意控制排氣速度，過快容易使錐形瓶內(nèi)的培養(yǎng)基飛濺，待高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)氣壓降到0MP后取出滅菌器材并放到無菌操作臺備用。（3）超凈工作臺的滅菌：實驗前將接種環(huán)、4mm的打孔器、鑷子和酒精燈放入超凈工作臺。每次使用超凈工作臺之前，都應(yīng)該提前30分鐘打開紫外燈。使用時關(guān)閉紫外燈，開啟日光燈，并用75%的酒精擦拭消毒手和工作臺面。

實驗結(jié)束后，用75%的酒精擦擦拭手和工作臺面，關(guān)閉日光燈，重新開啟紫外燈照射20分鐘。（4）菌種準(zhǔn)備：在超凈工作臺內(nèi)用90mm的培養(yǎng)皿倒入約12mlPDA培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將4種供試病原真菌接入培養(yǎng)皿的中心位置，標(biāo)記接菌時間和菌名編號，(27±1)℃培養(yǎng)3天后，4℃冰箱中保存，然后在試驗前3天再接種一次，在(27±1)℃的條件下培養(yǎng)備用。（5）藥液準(zhǔn)備：將精確度為0.01mg的電子天平調(diào)平校準(zhǔn)后，分別稱量11.25mg的丹皮酚和10種供試藥劑并分別溶于5ml丙酮中，按照供試藥劑編號備用。（6）帶藥培養(yǎng)基的制備：參考劉小紅等人[21]的菌絲生長速率法測定的配制方法。先用量筒量取225ml蒸餾水于錐形瓶中，用記號筆標(biāo)記液面高度，之后將PDA培養(yǎng)基分裝在錐形瓶中，并定容至225ml后封口并滅菌，將滅菌后的培養(yǎng)基放在無菌操作臺，待溫度降到45℃-50℃后在每瓶中加入準(zhǔn)備好的5ml藥液使其混合均勻，并按藥液編號對應(yīng)編號，然后趁熱倒入直徑為90mm的培養(yǎng)皿中制成薄厚均勻的平板備用。（7）接菌與培養(yǎng)：在超凈工作臺內(nèi)，將備用的供試菌種在同一半徑下用4mm的打孔器打出一定數(shù)量的菌餅。用接種環(huán)小心將菌餅置于帶要培養(yǎng)皿中心，菌絲一面向下，每種藥液的培養(yǎng)基分別接4個不同的菌，每皿1個菌餅，每個處理設(shè)3個重復(fù)，每個培養(yǎng)皿加蓋后標(biāo)記接菌的編號、帶藥培養(yǎng)基編號和接菌時間。置于(27±1)℃的恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)3天后取出培養(yǎng)皿，觀察菌絲生長情況，并用游標(biāo)卡尺測量菌落直徑，須十字交叉量取兩次，取其平均數(shù)。第3章結(jié)果與分析3.1抑菌活性結(jié)果化合物丹皮酚、3a-3j對玉米大斑病菌、馬鈴薯早疫病菌、番茄葉霉病菌和番茄灰霉病菌這4種供試病原真菌的生長抑制作用實驗結(jié)果見表3-1；圖3-1、圖3-2、圖3-3、圖3-4、圖3-5和圖3-6。抑菌率由公式2.1計算所得。（處理組菌落生長直徑=菌落兩次直徑平均數(shù)–4mm）公式2.1抑菌率計算公式表3.1化合物的抑菌活性化合物抑菌率（%）玉米大斑病菌馬鈴薯早疫病菌番茄葉霉病菌番茄灰霉病菌Paeonol14.11±（0.76）50.65±（5.04）—39.31±（2.72）3a74.84±（12.37）83.58±（2.28）99.18±（0.55）98.66±（1.27）3b70.81±（4.01）76.85±（2.50）78.35±（12.72）93.72±（1.07）3c72.34±（3.34）58.23±（8.16）65.44±（6.29）92.54±（1.51）3d97.39±（2.39）98.67±（0.67）96.77±（1.63）97.99±（0.06）3e87.13±（2.90）88.92±（4.57）99.41±（0.61）99.74±（0.15）3f82.03±（3.95）68.35±（3.20）82.22±（15.33）93.91±（2.37）3g83.56±（2.16）66.23±（5.32）98.77±（1.46）92.88±（2.25）3h84.49±（4.99）78.50±（4.23）95.99±（2.06）98.20±（0.43）3i85.55±（7.23）73.51±（2.42）91.19±（2.15）96.85±（1.49）3j98.26±（0.52）96.02±（0.39）99.75±（0.08）98.37±（0.38）CK0000（注：表3.1中括號內(nèi)的內(nèi)容為標(biāo)準(zhǔn)方差，通過Excel計算所得；化合物濃度為0.05mg/ml；—表示該組污染）圖3.1化合物3d對玉米大斑病菌的抑菌活性圖（A-4對應(yīng)化合物3d；A-CK為空白對照）圖3.2化合物3e對玉米大斑病菌的抑菌活性圖（A-5對應(yīng)化合物3e；A-CK為空白對照）圖3.3化合物3f對玉米大斑病菌的抑菌活性圖（A-4對應(yīng)化合物3f；A-CK為空白對照）圖3.4化合物3g對玉米大斑病菌的抑菌活性圖（A-7對應(yīng)化合物3g；A-CK為空白對照）圖3.5化合物3h對玉米大斑病菌的抑菌活性圖（A-8對應(yīng)化合物3h；A-CK為空白對照）圖3.6化合物3j對玉米大斑病菌的抑菌活性圖（A-10對應(yīng)化合物3j；A-CK為空白對照）3.2抑菌活性結(jié)果分析從表3-1中可以看出，3a-3j10種供試化合物對玉米大斑病菌、馬鈴薯早疫病菌、番茄葉霉病菌和番茄灰霉病菌四種病原真菌的抑菌率均在58.23%以上，母體丹皮酚對玉米大斑病菌的抑菌率為14.11%、對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率為50.65%、對番茄灰霉病菌的抑菌率為39.31%，其抑菌活性明顯都低于供試時化合物3a-3j的抑菌活性。10種丹皮酚偶氮類化合物中對玉米大斑病菌抑制活性最好的是化合物3j（98.26%），對馬鈴薯早疫病菌抑制活性最好的是化合物3d（98.67%），對番茄葉霉病菌抑制活性最好的是化合物3j（99.75%），對番茄灰霉病菌抑制活性最好的是化合物3e（99.74%）。3a-3d10種供試化合物中3d和3j對四種病原真菌都有較好的抑菌活性，化合物3d玉米大斑病菌抑制活性率為97.39%，對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率為98.67%，對番茄葉霉病菌的抑菌率為96.77%，對番茄灰霉病菌的抑菌率為97.99%；化合物3j玉米大斑病菌抑制活性率為98.26%，對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率為96.02%，對番茄葉霉病菌的抑菌率為99.75%，對番茄灰霉病菌的抑菌率為98.37%。3a、3b、3c、3e、3f、3g、3h、3i8種供試化合物因供試菌種的不同，其抑菌活性差異較大。例如，供試化合物3g對番茄葉霉病菌的抑菌率為98.77%，但對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率僅為66.23%。綜上所述，10種丹皮酚偶氮類化合物的抑菌活性明顯高于母體丹皮酚的抑菌活性，其中3d和3j兩種供試化合物對四種供試病原真菌都具有非常高的抑菌活性。從圖2.2和表3.1對照可以明顯看出母體丹皮酚與3a-3j10種供試化合物抑菌活性的差異與其化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，3a-3j10種供試化合物的抑菌活性與構(gòu)效關(guān)系分析見圖3.7。3a-3j10種供試化合物的抑圖3.73a-3j10種化合物結(jié)構(gòu)通式菌活性明顯高于母體丹皮酚的抑菌活性，說明偶氮雙鍵與取代基團(tuán)類型對該化合物的抑菌活性有重要影響?；衔?a和3f抑菌活性的差異是因為取代基團(tuán)甲基的位置不同，當(dāng)R1位置上為甲基時，即化合物3a對玉米大斑病菌的抑菌率為74.84%，對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率為83.58%，對番茄葉霉病菌的抑菌率為99.18%，對番茄灰霉病菌的抑菌率為98.66%；當(dāng)R3位置上為甲基時，即化合物3f對玉米大斑病菌的抑菌率為82.03%，對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率為68.35%，對番茄葉霉病菌的抑菌率為82.22%，對番茄灰霉病菌的抑菌率為93.91%；化合物3a和3f對番茄灰霉病菌的抑菌率差異約5%，對番茄葉霉病菌的抑菌率差異約17%，對玉米大斑病菌的抑菌率差異約8%，對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率差異約15%，化合物3a和化合物3f的抑菌活性差異較小，說明該化合物的抑菌活性受甲基的位置效應(yīng)影響較小?；衔?b、3d、3e和3j抑菌活性的差異是因為硝基的位置和數(shù)量不同，4種化合物的綜合抑菌能力依次是3j＞3d＞3e＞3b，而且化合物3j和化合物3d在10種供試化合物中的抑菌活性最高，說明在該化合物的R1和R3位置上同時存在兩個硝基時，或者該化合物的R2位置上是硝基都可以增加抑菌活性，而在R1或R3位置上的單個硝基基團(tuán)則對該化合物的抑菌活性影響較小；化合物3g的氯基在R3位置上，化合物3h的氯基在R1位置上，而化合物3g和3h的抑菌活性差異較小，說明該化合物受氯基基團(tuán)的位置上效應(yīng)影響較小。綜上所述，通過化合物3a-3j的抑菌活性比較，以及構(gòu)效分析可知，3a-3j10種丹皮酚偶氮類化合物對四種病原真菌的抑菌活性都明顯高于丹皮酚對四種病原真菌的抑菌活性，與偶氮雙鍵的存在和取代基團(tuán)的類型有重要關(guān)系，這與偶氮類化合物普遍具有抑菌活性的結(jié)果一致；化合物中硝基對抑菌活性的影響大于其他四種基團(tuán)對該化合物抑菌活性的影響，并且當(dāng)R1和R3位置上同時是硝基時，或者R2位置上是硝基時該化合物對四種病原真菌具有最佳的抑菌活性，其整體抑菌率高于99.75%，而在R1或R3位置上是硝基時該化合物的抑菌率則相對較低。取代基團(tuán)甲基、甲氧基、醚基和氯基的不同或位置不同也會使其抑菌活性不同，但是對化合物整體的抑菌活性影響較小，只會造成對個別供試真菌的抑菌活性差異略大。當(dāng)R3位置上為氯基時，即化合物3g對玉米大斑病菌的抑菌率為83.56%，對馬鈴薯早疫病菌的抑菌率為66.23%，對番茄葉霉病菌的抑菌率為98.77%，對番茄灰霉病菌的抑菌率為92.88%；當(dāng)R3位置上為甲氧基時，即化合物3i對玉米大斑病菌抑制活性率為85.55%，對馬鈴薯早疫病菌抑的制率為73.51%，對番茄葉霉病菌抑的制率為91.19%，對番茄灰霉病菌的抑菌率為96.85%；第4章4.1結(jié)論研究表明，在濃度為0.05mg/mL下，3a-3j10種丹皮酚偶氮類化合物對玉米大斑病菌、馬鈴薯早疫病菌、番茄葉霉病菌和番茄灰霉病菌四種病原真菌的抑菌率均在58.23%以上，明顯高于母體丹皮酚的抑菌活性。在濃度為0.05mg/mL下，10種供試化合物中3d和3j的抑菌活性最佳，對四種供試病原真菌的抑菌率都在96.77%，為新型植物源抑菌劑的開發(fā)奠定了一定的基礎(chǔ)。（3）通過對母體丹皮酚和3a-3j10種化合物的構(gòu)效分析與抑菌活性比較得出結(jié)論：①偶氮雙鍵是丹皮酚偶氮類化合物抑菌活性高于丹皮酚抑菌活性的關(guān)鍵因素之一；②硝基對該化合物的抑菌活性影響較大，甲基、甲氧基、醚基和氯基對該化合物的整體抑菌活性影響較小，只會造成對個別供試真菌的抑菌活性差異略大；③硝基位于同時位于R1和R3位置上或位于R2位置上時該化合物具有最佳的抑菌活性。4.2討論本文對丹皮酚以及10種丹皮酚偶氮類化合物進(jìn)行了抑菌活性測試，為植物源農(nóng)藥的研發(fā)奠定了一定的理論基礎(chǔ)，但是由于時間等方面的原因，本課題的研究還不完善。第一，因為提供的丹皮酚偶氮類化合物數(shù)量有限，所以未進(jìn)行濃度梯度對抑菌活性影響的測試，所以化合物濃度變化對抑菌活性的影響尚未清楚；第二，丹皮酚對番茄葉霉病菌抑菌活性的測試因受到污染而未得到數(shù)據(jù)，對實驗的整體對照有一定的影響；第三，對構(gòu)效關(guān)系的分析不夠深入，只是簡單分析了平面結(jié)構(gòu)不同取代基團(tuán)-甲基、甲氧基、醚基、硝基和氯基對化合物抑菌活性的影響。第四，本研究為室內(nèi)抑菌活性實驗，實驗室理化條件穩(wěn)定，對化合物的影響較小，但在實際應(yīng)用中還有一定的局限性，需要進(jìn)一步的研究。在今后的研究中可以根據(jù)本研究得到的抑菌活性結(jié)果與其構(gòu)效關(guān)系的簡單分析，進(jìn)一步研究化合物構(gòu)效與其抑菌活性的關(guān)系，有助于人們在化學(xué)結(jié)構(gòu)方面設(shè)計出具有高效抑菌活性的化學(xué)結(jié)構(gòu)模型，設(shè)計出具有不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的丹皮酚偶氮類化合物，并為開發(fā)高效的植物源抑菌藥物提供一定的理論指導(dǎo)。致謝為期幾個月的畢業(yè)設(shè)計終于結(jié)束了，這期間的實驗生活，緊張，快樂而充實。在此，我感謝我的指導(dǎo)老師屈歡老師，從課題的選擇，實驗方案的設(shè)計到本文的撰寫，屈歡老師一直給予我細(xì)心的指導(dǎo)和幫助，屈歡老師嚴(yán)肅的科學(xué)態(tài)度，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)精神，精益求精的工作作風(fēng)讓我受益匪淺。在此向屈歡老師致上崇高的敬意和誠摯的謝意。感謝在實驗過程中幫助過我的所有老師和同學(xué)，是老師的悉心教導(dǎo)和同學(xué)的熱心幫助，才使我能的實驗和本文能夠順利完成?；厥姿哪甑拇髮W(xué)生活，輕松而愜意，短暫而充實，同時也是美好的，因為有你們的關(guān)心和幫助……

在這里，我再次感謝所有幫助過我的人，我的大學(xué)生活因為有你們而過的充實和多彩。參考文獻(xiàn)[1]王江愷.丹皮酚及其衍生物的合成與抗腫瘤活性研究[D].西北大學(xué)，2010.[2]魯滌非．花卉學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998：333－336[3]湯明杰，張旗，葉永山等.牡丹皮中丹皮酚提取及分析方法研究進(jìn)展[A].中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥化學(xué)分會第八屆學(xué)術(shù)年會論文集[C].中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥化學(xué)分會，2013:6.[4]康業(yè)斌，商鴻生.溶劑法提取丹皮酚的工藝優(yōu)化[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報，2006，10:240-242.[5]康業(yè)斌，商鴻生，成玉梅.水蒸汽蒸餾法提取丹皮酚工藝的研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2006，11:133-135[6]汪秋安，張春香，麻秋娟.7,3′-二甲氧基-4′,5′-次乙二氧基黃烷酮的合成[J].合成化學(xué)，2005，13(1):67-69.[7]胡春弟，張杰.丹皮酚的藥理作用及合成研究進(jìn)展[J].化學(xué)與生物工程，2009，08:16-18.[8]孫言才，沈玉先，孫國平.丹皮酚的主要藥理活性研究進(jìn)展[J].中成藥，2004，07:65-68.[9]方治坤.新型連環(huán)哌啶醇的合成及多鉬酸氧化合成偶氮苯并噻唑反應(yīng)的研究[D].上海師范大學(xué)，2009.[10]曹陽，祁俊生，王遠(yuǎn)亮等.2-甲氧基-4-羥基-5-乙?；嫉?4′-胂酸的合成及生物活性初探[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，05：426-430.[11]呂春霞.5-苯偶氮-8-羥基喹啉類衍生物的合成及抑菌活性研究[D].西北農(nóng)林科技大學(xué)，2009.[12]鄭愛萍，李平.微生物生物防治存在的問題及發(fā)展方向[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2000，06:28-29+32.[13]陳曉明，王程龍，薄瑞.中國農(nóng)藥使用現(xiàn)狀及對策建議[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2016，02:4-8.[14]王儲炎.鹿蹄草提取物的抑菌作用和應(yīng)用研究[D].西南大學(xué)，2007.[15]劉春云，武廷章，周大喜等.鳳丹丹皮酚抗菌作用的研究[J].生物學(xué)雜志，2000，03:23-24.[16]周德慶.微生物學(xué)教程[M].高等教育出版社，1992，199.[17]沈萍，范秀榮，李廣武.微生物學(xué)實驗[M].高等教育出版社，1999，69.[18]任玉鋒，劉雅琴，董博博等.生姜汁、大蒜汁對靈武長棗采后病原真菌抑菌效果的研究[J].北方園藝，2010，07:145-147.[19]郭成瑾，沈瑞清，楊晉等.牛心樸子提取物抑菌效果研究[J].北方園藝，2012，06:175-177.[20]任玉鋒，蘇振峰，劉雅琴.殼聚糖、海藻酸鈉、百里香酚及其復(fù)合物對靈武長棗采后主要病原真菌的抑制作用[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，01:84-87.[21]劉小紅，鄧業(yè)成，唐煌等.羅默堿的抑菌活性測定[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，13:2664-2667.基于C8051F單片機(jī)直流電動機(jī)反饋控制系統(tǒng)的設(shè)計與研究基于單片機(jī)的嵌入式Web服務(wù)器的研究MOTOROLA單片機(jī)MC68HC（8）05PV8/A內(nèi)嵌EEPROM的工藝和制程方法及對良率的影響研究基于模糊控制的電阻釬焊單片機(jī)溫度控制系統(tǒng)的研制基于MCS-51系列單片機(jī)的通用控制模塊的研究基于單片機(jī)實現(xiàn)的供暖系統(tǒng)最佳啟停自校正（STR）調(diào)節(jié)器單片機(jī)控制的二級倒立擺系統(tǒng)的研究基于增強(qiáng)型51系列單片機(jī)的TCP/IP協(xié)議棧的實現(xiàn)基于單片機(jī)的蓄電池自動監(jiān)測系統(tǒng)基于32位嵌入式單片機(jī)系統(tǒng)的圖像采集與處理技術(shù)的研究基于單片機(jī)的作物營養(yǎng)診斷專家系統(tǒng)的研究基于單片機(jī)的交流伺服電機(jī)運(yùn)動控制系統(tǒng)研究與開發(fā)基于單片機(jī)的泵管內(nèi)壁硬度測試儀的研制基于單片機(jī)的自動找平控制系統(tǒng)研究基于C8051F040單片機(jī)的嵌入式系統(tǒng)開發(fā)基于單片機(jī)的液壓動力系統(tǒng)狀態(tài)監(jiān)測儀開發(fā)模糊Smith智能控制方法的研究及其單片機(jī)實現(xiàn)一種基于單片機(jī)的軸快流CO〈,2〉激光器的手持控制面板的研制基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究基于CYGNAL單片機(jī)的在線間歇式濁度儀的研制基于單片機(jī)的噴油泵試驗臺控制器的研制基于單片機(jī)的軟起動器的研究和設(shè)計基于單片機(jī)控制的高速快走絲電火花線切割機(jī)床短循環(huán)走絲方式研究基于單片機(jī)的機(jī)電產(chǎn)品控制系統(tǒng)開發(fā)基于PIC單片機(jī)的智能手機(jī)充電器基于單片機(jī)的實時內(nèi)核設(shè)計及其應(yīng)用研究基于單片機(jī)的遠(yuǎn)程抄表系統(tǒng)的設(shè)計與研究基于單片機(jī)的煙氣二氧化硫濃度檢測儀的研制基于微型光譜儀的單片機(jī)系統(tǒng)單片機(jī)系統(tǒng)軟件構(gòu)件開發(fā)的技術(shù)研究基于單片機(jī)的液體點滴速度自動檢測儀的研制基于單片機(jī)系統(tǒng)的多功能溫度測量儀的研制基于PIC單片機(jī)的電能采集終端的設(shè)計和應(yīng)用基于單片機(jī)的光纖光柵解調(diào)儀的研制氣壓式線性摩擦焊機(jī)單片機(jī)控制系統(tǒng)的研制基于單片機(jī)的數(shù)字磁通門傳感器基于單片機(jī)的旋轉(zhuǎn)變壓器-數(shù)字轉(zhuǎn)換器的研究基于單片機(jī)的光纖Bragg光柵解調(diào)系統(tǒng)的研究單片機(jī)控制的便攜式多功能乳腺治療儀的研制基于C8051F020單片機(jī)的多生理信號檢測儀基于單片機(jī)的電機(jī)運(yùn)動控制系統(tǒng)設(shè)計Pico專用單片機(jī)核的可測性設(shè)計研究基于MCS-51單片機(jī)的熱量計基于雙單片機(jī)的智能遙測微型氣象站MCS-51單片機(jī)構(gòu)建機(jī)器人的實踐研究基于單片機(jī)的輪軌力檢測基于單片機(jī)的GPS定位儀的研究與實現(xiàn)基于單片機(jī)的電液伺服控制系統(tǒng)用于單片機(jī)系統(tǒng)的MMC卡文件系統(tǒng)研制基于單片機(jī)的時控和計數(shù)系統(tǒng)性能優(yōu)化的研究基于單片機(jī)和CPLD的粗光柵位移測量系統(tǒng)研究單片機(jī)控制的后備式方波UPS提升高職學(xué)生單片機(jī)應(yīng)用能力的探究基于單片機(jī)控制的自動低頻減載裝置研究基于單片機(jī)控制的水下焊接電源的研究基于單片機(jī)的多通道數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于uPSD3234單片機(jī)的氚表面污染測量儀的研制基于單片機(jī)的紅外測油儀的研究96系列單片機(jī)仿真器研究與設(shè)計基于單片機(jī)的單晶金剛石刀具刃磨設(shè)備的數(shù)控改造基于單片機(jī)的溫度智能控制系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)基于MSP430單片機(jī)的電梯門機(jī)控制器的研制基于單片機(jī)的氣體測漏儀的研究基于三菱M16C/6N系列單片機(jī)的CAN/USB協(xié)議轉(zhuǎn)換器基于單片機(jī)和DSP的變壓器油色譜在線監(jiān)測技術(shù)研究基于單片機(jī)的膛壁溫度報警系統(tǒng)設(shè)計基于AVR單片機(jī)的低壓無功補(bǔ)償控制器的設(shè)計基于單片機(jī)船舶電力推進(jìn)電機(jī)監(jiān)測系統(tǒng)基于單片機(jī)網(wǎng)絡(luò)的振動信號的采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的大容量數(shù)據(jù)存儲技術(shù)的應(yīng)用研究基于單片機(jī)的疊圖機(jī)研究與教學(xué)方法實踐基于單片機(jī)嵌入式Web服務(wù)器技術(shù)的研究及實現(xiàn)基于AT89S52單片機(jī)的通用數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)基于單片機(jī)的多道脈沖幅度分析儀研究機(jī)器人旋轉(zhuǎn)電弧傳感角焊縫跟蹤單片機(jī)控制系統(tǒng)基于單片機(jī)的控制系統(tǒng)在PLC虛擬教學(xué)實驗中的應(yīng)用研究基于單片機(jī)系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)通信研究與應(yīng)用基于PIC16F877單片機(jī)的莫爾斯碼自動譯碼系統(tǒng)設(shè)計與研究基于單片機(jī)的模糊控制器在工業(yè)電阻爐上的應(yīng)用研究基于雙單片機(jī)沖床數(shù)控系統(tǒng)的研究與開發(fā)基于Cygnal單片機(jī)的μC/OS-Ⅱ的研究基于單片機(jī)的一體化智能差示掃描量熱儀系統(tǒng)研究基于TCP/IP協(xié)議的單片機(jī)與Internet互聯(lián)的研究與實現(xiàn)變頻調(diào)速液壓電梯單片機(jī)控制器的研究基于單片機(jī)γ-免疫計數(shù)器自動換樣功能的研究與實現(xiàn)HYPER