治療性抗體研發(fā)的進(jìn)展和關(guān)鍵技術(shù)

治療性抗體研發(fā)的進(jìn)展和關(guān)鍵技術(shù)第一頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日主要內(nèi)容治療性抗體研發(fā)概況治療性抗體研發(fā)的主要進(jìn)展治療性抗體研發(fā)中要注意的問題第二頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第三頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第四頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日用抗體藥物治療的疾病腫瘤自身免疫病感染性疾病抗移植排斥心血管疾病骨質(zhì)疏松罕見病眼黃斑變性炭疽第五頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日抗體結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系第六頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日抗體藥物的作用機(jī)理直接效應(yīng)誘導(dǎo)凋亡抑制增殖阻斷生長因子或生長因子受體干擾血管生成間接效應(yīng)依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒（CDC）依賴抗體的細(xì)胞毒（ADCC)

作為毒素、放射性同位素和細(xì)胞毒藥物的載體形成抗獨(dú)特型抗體通過雙特異性抗體靶向效應(yīng)細(xì)胞第七頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日抗體藥物在臨床應(yīng)用中面臨的挑戰(zhàn)免疫原性殺傷靶細(xì)胞的活性弱成藥性問題新靶點(diǎn)第八頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日抗體藥物研發(fā)的主要進(jìn)展降低抗體的免疫原性改變抗體的效應(yīng)功能提高抗體表達(dá)量引入先進(jìn)的抗體表征和質(zhì)控方法改進(jìn)抗體規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)第九頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日CDR移植FR移植SDR移植表面氨基酸重塑Phagedisplay轉(zhuǎn)基因鼠單細(xì)胞PCR人工設(shè)計抗體人源化和人源抗體第十頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日人源抗體制備的主要技術(shù)EB病毒轉(zhuǎn)化人B細(xì)胞人-人雜交瘤技術(shù)抗體庫技術(shù)轉(zhuǎn)基因小鼠人工設(shè)計和合成人源抗體第十一頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日抗體庫技術(shù)轉(zhuǎn)基因小鼠第十二頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日人工設(shè)計和合成人源抗體Her2晶體結(jié)構(gòu)D4SDS非還原電泳155KDaHF人源表達(dá)抗體的純化和功能鑒定HF人源抗體基因合成、構(gòu)建、表達(dá)人源化抗體設(shè)計、虛擬篩選抗體專家分析系統(tǒng)抗原抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)信息分析HF人源抗體對Her2+

+細(xì)胞的ADCC殺傷效應(yīng)分析HFSKVO3–Her2+++MCF7-Her2+HerceptinSKVO3–Her2+++MCF7-Her2+HF人源抗體對Her2靶點(diǎn)的特異性識別第十三頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日1986199419971998200020012002200320042006200720082009201020112012鼠源

嵌合

人源化

人源FDA批準(zhǔn)的抗體藥物OKT3ReoProRituxanZenapaxSimulectSynagisRemicadeHerceptinEnbrelMylotargCampathZevalinHumiraXolairBexxarRaptivaAvastinErbituxTysabriLucentisVectibixSolirisCimziaActemraStelaraSimponiIlarisArzerraNumaxProliaABThraxBenlystaYervoyPerjeta第十四頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第二代抗體藥物抗TNFadalimuab(Humira，全人抗體）

certolizumab（Cimzia，PEG修飾的Fab）

golimumab（Simponi，全人抗體）抗CD20ofatumumab（Arzerra，全人抗體）抗RSVmotarizumab（親和力更高）抗EGFRpanitumumab（Vectibix，全人抗體）第十五頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日抗體效應(yīng)功能的改造定點(diǎn)突變改造Fc改變糖基化雙特異性或多特異性抗體第十六頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日減弱抗體的效應(yīng)功能Fc上進(jìn)行定點(diǎn)突變

Teplizumab(Leu234Ala,Leu235Ala)去糖基化

Otelixizumab(去糖基化，Asn297Ala)選擇IgG4亞型或雜合亞型（IgG2/IgG4）Fc融合蛋白第十七頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日提高抗體的效應(yīng)功能雙特異性抗體改變抗體效應(yīng)功能偶聯(lián)細(xì)胞毒物質(zhì)抗體Fc突變改變抗體糖基化細(xì)胞內(nèi)抗體抗體融合蛋白第十八頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第十九頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日1抗體Fc突變提高效應(yīng)功能突變Ser239Asp，Glu330Leu，ILe332Glu提高ADCC突變Gly236Ala，Ser239Asp，ILe332Glu提高ADCP和ADCC雜合IgG亞型提高CDC突變Met252Tyr，Ser254Thr，Thr256Glu增加抗體的半壽期第二十頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日2改變抗體Fc的糖基化第二十一頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日各種糖基化變化對抗體功能的影響來自潘海報告第二十二頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第三代抗體藥物抗CD20obinutuzumab（糖基化改造，提高

ADCC）

AME-133v(Fc改造，提高ADCC)TRLI-05(Fc改造，提高ADCC)Pro13192(Fc改造，提高ADCC)抗RSV/FMEDI-557(Fc改造，增加半壽期)第二十三頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日3抗體上偶聯(lián)細(xì)胞毒物質(zhì)第二十四頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第二十五頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日單抗:癌細(xì)胞表面過量表達(dá)的抗原且能內(nèi)吞。偶聯(lián)鏈:在血液中穩(wěn)定但可以在細(xì)胞內(nèi)釋放毒素。毒素藥物:需要極毒的可以抑制細(xì)胞生長的化合物賴氨酸偶聯(lián)輕重鏈間二硫鍵偶聯(lián)定點(diǎn)偶聯(lián)KADCYLA(T-DM1)Genentech/ImmunogenADCETRIS(aCD33-vcMMAE)SeattleGeneticsThio-MaborAmbrx’sunnaturalAAincoporation抗體-藥物偶聯(lián)技術(shù)第二十六頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日FDA批準(zhǔn)的ADC藥物放射性同位素，Bexxar,Zevalin毒素小分子藥物，Mylotarg，T-DM1Adcetris第二十七頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日4雙特異性抗體第二十八頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日歐洲上市的雙特異性抗體第二十九頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日在臨床試驗(yàn)的雙特異性抗體抗體名稱靶抗原臨床試驗(yàn)SAR156597IL4xIL13PhaseIAFM13CD30xCD16APhaseIFBT-A05,Bi20CD20xCD3PhaseIMT110EpCAMxCD3PhaseIMT111,MEDI565CEAxCD3PhaseIIMCgp100Gp100xCD3PhaseITF2CEAxIMP288haptenPhaseIMEHD-7945AEGFRxHER3;dualIgG1PhaseIMM-111HER2xHER3PhaseICVX-241Ang2xVEGF;dualIgG1PhaseIIOzoralizumabATN103TNFxalbuminPhaseII第三十頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日5

免疫細(xì)胞因子第三十一頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日靶抗原選擇針對已確認(rèn)過的靶臨床確認(rèn)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)尋找新的功能性靶抗原第三十二頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日自身免疫病的治療靶第三十三頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日上市抗腫瘤抗體藥物的靶抗原靶分子適應(yīng)癥CD20NHLCLLHER2乳腺癌CD52CLLEGFR結(jié)腸癌VEGF結(jié)腸癌肺癌CD33AMLCTLA-4黑色素瘤CD30

淋巴瘤

第三十四頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第三十五頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日第三十六頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日發(fā)現(xiàn)藥物靶標(biāo)的主要方法分子流行病學(xué)調(diào)查人類遺傳學(xué)研究人類功能基因組學(xué)蛋白組學(xué)生物信息學(xué)藥理學(xué)模式動物第三十七頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日候選基因可成藥的候選藥靶與疾病的相關(guān)性第三十八頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日治療性抗體研發(fā)中要注意的問題抗體分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：四條肽鏈，重鏈糖基化，結(jié)構(gòu)上有較多二硫鍵L第三十九頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日ProteinexpressionSolubilitystability

抗體結(jié)構(gòu)與成藥性的關(guān)系第四十頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日MasterCellBankWorkingCellBankRawMaterialsSmall-scaleCellCultureLarge-scaleCellCultureProductRecoveryProductFiltrationFormulationPoolBulksSterileFilter,Fill,andPartialStopperVialsLyophilizeCapVialsLiquidProductsProductInspectionContainerIntegrityTestingLabeledFinalVialProductPackaging單抗體生產(chǎn)工藝和過程DrugSubstance李鋒DrugProduct第四十一頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日從細(xì)胞表達(dá)到病人臨床注射，單抗體藥物可能發(fā)生多種反應(yīng)變化細(xì)胞培養(yǎng)配伍制劑和儲藏分離純化臨床注射和新陳代謝酶糖基化化學(xué)糖基化還原反應(yīng)序列變異……還原反應(yīng)水解反應(yīng)聚合化……氧化反應(yīng)異構(gòu)化化學(xué)糖基化……脫氨基化巰基半胱胺酸化酶降解反應(yīng)……理化分析和質(zhì)量控制對于抗體制藥工業(yè)各個環(huán)節(jié)起著支持和指導(dǎo)的重要作用。如同眼睛對人的作用一樣，沒有好的分析手段和方法，抗體生產(chǎn)過程就可能走向歧途。引自張伯彥報告第四十二頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日可變區(qū)：選擇Gln為氨基末端，減少電荷變異突變CDR區(qū)上不穩(wěn)定的點(diǎn)突變某些氨基酸，避免抗體聚合去除可變區(qū)上的糖基化位點(diǎn)恒定區(qū)：鉸鏈區(qū)改造避免出現(xiàn)半個抗體和不規(guī)則二硫鍵或異型結(jié)構(gòu)提高與FcRn結(jié)合，增加血清半壽期影響抗體藥物穩(wěn)定性和效能的因素第四十三頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日單抗體藥物產(chǎn)品是各種變異體的混合物

電荷變異體byiCIEF

7.07.27.47.67.88.08.28.48.68.89.09.29.4LowerpIMarkerUpperpIMarkerMainPeak,54%

AcidicVariants,28%BasicVariants,18%

序列變異體byTrypticPeptideMap

Clone#

M83R

體積變異體

bySEC

二聚體

脫氨基化(3×2)Met氧化(2×2)糖基化（2×2)高甘露糖化,G0,G1,G1’,G2（5）唾液酸化（5）C-端Lys（2）2×6×4×4×5×5×2=9600(9600)2≈108

約1億個可能的變異體！美國FDA：StevenKozlowski基因特克：WassimNashabehOODDDGGKKpyro-EODGGDODpyro-E第四十四頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日Amidation(C-term)*Di-,tri-sulfidebondformationN,O-GlycosylationC-mannosylation(W)Proteolyticprocessing(C-term)SequenceVariants

Oxidation(M,W,H,F,Y)S-CysteinylationDisulfidescramblingS-GlutathionylationThioetherformationReductionDeamidation(NG,NT,NS)Isomerization(DG,DS,DD)TransaminationGlycation(K)Hydrolysis(DP)1。影響抗體質(zhì)量的蛋白表達(dá)后修飾細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞外都有發(fā)生；2。質(zhì)控的目標(biāo)是降低或避免在生產(chǎn)過程中不希望看到的

PTM和序列變異發(fā)生的現(xiàn)象。克隆篩選是質(zhì)量控制的關(guān)鍵步驟第四十五頁，共四十七頁，編輯于2023年，星期日mAbVariantsandCharacterizationMethodologiesSizeVariants(體積變異體）Terminologies:Aggregates,mainpeak,fragmentsAssays:HPSEC,CE-SDS,SDS,AUCChargeVariants（電荷變異體）Terminologies:Acidicpeak,mainpeak,andbasicpeakvariantsAssays:HPIEC,iCIEF,pH-IECSeque