薄層色譜法分離二甲基黃和羅丹明

實(shí)驗(yàn)課程：有機(jī)化學(xué)實(shí)驗(yàn)薄層板準(zhǔn)備時(shí)間：2014,4,18實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2014,4,21實(shí)驗(yàn)名稱：實(shí)驗(yàn)十二一一薄層色譜法分離二甲基黃和羅丹明-B【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹勘游缴V是將吸附劑均勻地涂在玻璃板上作為固定相，經(jīng)干燥活化后點(diǎn)上樣品，以具有適當(dāng)極性的有機(jī)溶劑作為展開劑。當(dāng)展開劑沿薄層展開時(shí)，混合樣品中易被固定相吸附的組分移動較慢，而較難被固定相吸附的組分移動較快。經(jīng)過一定時(shí)間的展開后，不同組分彼此分開，形成互相分離的斑點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用硅膠吸附劑涂于玻璃板上作固定相，以95%酒精溶劑為展開劑分離二羥基黃、羅丹明-B以及兩者的混合物?！緦?shí)驗(yàn)儀器與藥品】1、 儀器：玻璃片、毛細(xì)管、層析缸2、藥品：A、二甲基黃溶液 B、羅丹明-B溶液 C、A與B的混合物D、硅膠E、0.5%羥甲基纖維素鈉3、 展開劑：95%的酒精溶液【實(shí)驗(yàn)步驟】（一） 薄層板的提前制備一鋪層實(shí)驗(yàn)采用傾注法：稱取5克硅膠于研缽中，并加入8ml的CMC，調(diào)成糊狀，再加入4mlCMC,調(diào)成糊狀。將調(diào)好的糊狀物倒在玻璃板上，用于搖晃，使糊狀物均勻地分布于整塊薄板上。（二） 點(diǎn)樣取已活化的薄層板，用鉛筆在薄板一端約1cm處很輕劃一直線，然后用毛細(xì)管分別點(diǎn)上二甲基黃、羅丹明-B和混合液。三點(diǎn)相隔相同距離，外緣兩點(diǎn)不能太靠近薄層板外緣。（三） 展開將已用吹分機(jī)吹十的薄層板放入內(nèi)裝有乙醇的層析缸中，蓋好缸蓋，進(jìn)行展開。當(dāng)展開劑不再上升，取出薄層板。用鉛筆畫出溶劑前沿。本實(shí)驗(yàn)所用樣品本身有顏色，故無需顯色即可計(jì)算Rf的值。

（四）Rf值的計(jì)算量出樣品原點(diǎn)到各色斑點(diǎn)中心的距離。按公式計(jì)算Rf的值?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】Rf= a樣品原點(diǎn)到色斑中心的距離b為溶劑上升前沿至原點(diǎn)中心的距離Rfi===1.0000 a1為二甲基黃樣品原點(diǎn)到色斑中心的距離Rf2===0.6000a2為羅丹明-B樣品原點(diǎn)到色斑中心的距離Rf3===0.6125a3為混合溶液中易被固定相吸附的物質(zhì)原點(diǎn)到色斑中心的距離Rf4===0.9875 a4為混合溶液中難被固定相吸附的物質(zhì)原點(diǎn)到色斑中心的距離由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，混合液中易被固定相吸附的物質(zhì)是羅丹明-B，難被固定相吸附的物質(zhì)是二甲基黃?！舅伎寂c討論】（1）薄層色譜法兼有柱色譜和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，它不僅適用于少量樣品，而且也適用于較大量樣品的精制。此法對于揮發(fā)性較少或在較高溫度時(shí)易發(fā)生變化而不能用氣相色譜法分析的物質(zhì)特別適用。（2）薄層板制備的好壞，是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，薄層應(yīng)盡量牢固、均勻，厚度適宜。（3） 本實(shí)驗(yàn)所用樣品本身有顏色，故無須顯色即可計(jì)算Rf值。（4） 羅丹明B（RhodamineB）又稱玫瑰紅B,或堿性玫瑰精，俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料。羅丹明-B為綠色結(jié)品或紅紫色粉末，易溶于水、乙醇,微溶于丙酮、氯仿、鹽酸和氫氧化鈉溶液；水溶液為藍(lán)紅色，稀釋后有強(qiáng)烈熒光，其水溶液加入氫氧化鈉呈玫瑰紅色，加熱后產(chǎn)生絮狀沉淀。于濃硫酸中呈黃光棕色，帶有較強(qiáng)的綠色熒光，稀釋后呈猩紅色，隨后變?yōu)樗{(lán)光紅色至橙色。醇溶液為紅色熒光，最大吸收波長552nm，最大熒光波長610nm，激光峰值波長610nm，調(diào)諧范圍578?610nm。經(jīng)老鼠試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，羅丹明B會引致皮下組織生肉瘤，被懷疑是致癌物質(zhì)。羅丹明B在溶液中有強(qiáng)烈的熒光，用作實(shí)驗(yàn)室中細(xì)胞熒光染色劑、有色玻璃、特色煙花爆竹等行業(yè)。曾經(jīng)用作食品添加劑，但后來實(shí)驗(yàn)證明羅丹明B會致癌，現(xiàn)在已不允許用作食品染色。（5） 羅丹明-B用途：光度測定金、鎵、迷、倒;V）、鉈（III）、熒光測定錳、鉆等，比色測定鎘；氧化還原指示劑用以滴定錫、銻、鈮、鉭的沉淀劑、生物染色劑系列激光染料。在化妝品工業(yè)中，可用于浴液、洗發(fā)水、冷燙水等類產(chǎn)品的著色，但不得用于眼部、口腔及唇部化妝品中。（6） 二甲基黃，又名甲基黃或?qū)Χ装被嫉?，常用作酸堿指示劑，pH2.9（紅）?4.0（黃），測定胃液中的游離鹽酸，過氧化脂肪的點(diǎn)滴試驗(yàn);也用作酸堿指示劑、非水溶液滴定用指示劑及胃液中游離鹽酸的測定。（7） 薄層色譜法目前是醫(yī)藥生產(chǎn)和化工染料分離有效成分的常用方法之一，薄層色譜法分離混合物的優(yōu)點(diǎn)：分離速度快、效率高、適用性強(qiáng)、操作簡便等。薄層色譜法（thinlayerchromatography；TLC）是平面色譜法中應(yīng)用最為廣泛的方法之一。將細(xì)粉狀的吸附劑或載體（固定相）涂布于玻璃板、塑料板或鋁箔上，成一均勻薄層并進(jìn)行活化，將試樣與對照品溶液點(diǎn)在同一薄板的一端（原點(diǎn)），在密閉的容器中用適當(dāng)?shù)娜軇鲃酉嗷蛘归_劑）展開，顯色后樣品的斑點(diǎn)與對照品斑點(diǎn)進(jìn)行比較，用于定性鑒定和含量測定，鋪好的薄層的板，稱為薄層（thinlayerplate）。薄層色譜可以同時(shí)分離多個(gè)樣品，分析成本低，對樣品預(yù)處理要求低，對固定相、展開劑的選擇自由度大，適用于含有不易從分離介質(zhì)脫附或含有懸浮微?；蛐枰V后衍生化處理的樣品分析，薄層色譜法也可用于藥品的鑒別或雜質(zhì)檢查的方法。薄層色譜法具有以下特點(diǎn)：①分析速度快，一般只需十至幾十分鐘。且一次可同時(shí)展開多個(gè)試樣。②分離能力較強(qiáng)，分析結(jié)果直觀。③試樣預(yù)處理簡單，對被分離組分性質(zhì)沒有限制。④上樣量較大。⑤所用儀器簡單，操作方便。因此在實(shí)際工作中特別是基層實(shí)驗(yàn)室薄層色譜法是一種被廣泛應(yīng)用的分離分析技術(shù)。（8）展開劑（developingsolvent；developer）的選擇是薄層分離結(jié)果優(yōu)劣的重要條件之一。展開劑的選擇，主要是根據(jù)被分離物質(zhì)的極性、吸附劑的活度和展開劑的極性進(jìn)行選擇，通過組分分子與展開劑分子爭奪吸附劑表面活性中心而達(dá)到分離。分子中極性集團(tuán)多，吸附力強(qiáng)；雙鍵數(shù)多，吸附