北中大中藥鑒定學(xué)實(shí)驗指導(dǎo)01基本實(shí)驗-15注射用雙黃連的鑒定

PAGEPAGE31.15注射用雙黃連的鑒定內(nèi)容提要本實(shí)驗采用理化、顯微和生物鑒定法，對注射用雙黃連進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，以控制其產(chǎn)品和原材料的質(zhì)量。通過實(shí)驗掌握注射用雙黃連鑒定特征，熟悉中藥注射用粉針劑鑒定的一般方法和基本內(nèi)容。原理根據(jù)供試品的化學(xué)成分和劑性特點(diǎn)，主要采用理化學(xué)鑒定的方法對其質(zhì)量進(jìn)行鑒定。儀器、材料與試劑(1)儀器與材料1)儀器聚酰胺薄膜（5cm×7.5cm），超聲波提取器，三角瓶，365nm紫外光分析燈，濾紙，漏斗，鐵臺架，層析缸，微量進(jìn)樣器（5μL，20μL），硅膠G-CMC-Na薄層板，電吹風(fēng)，高效液相色譜儀，容量瓶，顯色劑噴霧器，分析天平，量筒，燒杯，玻璃珠，錐形瓶，試管，離心機(jī)，恒溫箱，酸度計，pH試紙等。2)材料供試品：注射用雙黃連(哈爾濱中藥二廠生產(chǎn))。對照品：黃芩苷，綠原酸，連翹標(biāo)準(zhǔn)藥材。（2）試劑75%甲醇，醋酸，氯仿，10%硫酸乙醇溶液，冰醋酸，三乙胺，蒸餾水，兔血，生理氯化鈉溶液，鞣酸試液，稀鹽酸，3%氯化鈣溶液。操作步驟（1）性狀鑒定按照藥典規(guī)定的取樣方法，取供試品，主要觀察和描述其內(nèi)容物的形態(tài)、顏色、氣味等特征。本品應(yīng)為黃棕色無定形粉末或疏松固體狀物，味苦、澀，有引濕性。（2）理化鑒定1）薄層色譜法黃芩和金銀花的定性鑒別：取供試品60mg，加75%甲醇5mL，超聲處理使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷、綠原酸對照品，分別用75%甲醇制成1mL含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各1μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下觀察。連翹的定性鑒別：取本品0.1g，加甲醇10mL，超聲處理20min，放置，取上清液作為供試品溶液。另取連翹對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述2種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G-CMC-Na薄層板上，以氯仿-甲醇（5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。2）高效液相色譜法黃芩的含量測定：供試品每支含黃芩按黃芩苷（C21H18O11）計算，應(yīng)為128~173mg。填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠。流動相：甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶1）。檢測波長：274nm。理論板數(shù)：按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2000。取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成1mL含0.05mg的溶液，作為對照品溶液。取供試品10mg，精密稱定，加50%甲醇適量，超聲處理20min使溶解，制成每1mL約含0.2mg的溶液，作為供試品溶液。分別精密吸取對照溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定。金銀花的含量測定：供試品每支含金銀花以綠原酸（C16H18O9）計算，應(yīng)為8.5~11.5mg。填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠。流動相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15∶85∶1∶0.3）。檢測波長：324nm。理論板數(shù)：按綠原酸峰計算應(yīng)不低于6000。取綠原酸對照品適量，精密稱定，加水制成1mL含0.02mg的溶液，作為對照品溶液。取本品60mg，精密稱定，置50mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。分別精密吸取對照溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀測定。（3）生物鑒定溶血與凝聚檢測：取兔血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10min，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅血球再用生理氯化鈉溶液洗滌2~3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細(xì)胞用生理氯化鈉溶液配成2%的混懸液（表）。表溶血與凝聚試驗各溶液的配制試管編號1234562%紅血球混懸液/mL生理氯化鈉溶液/mL供試品溶液/mL2.52.00.52.52.10.42.52.20.32.52.30.22.52.40.12.52.50.0取試管6支，按表中配比量依次加入2%紅細(xì)胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30min，分別加入不同量的藥液（取本品600mg，用生理氯化鈉溶液溶解并稀釋成20mL；第6管為對照管），搖勻后，置37℃恒溫箱中，開始每隔15min觀察1次，1h后，每隔1h觀察1次，共觀察2h，按上法檢查，以第3管為準(zhǔn)，本品在2h內(nèi)不得出現(xiàn)溶血和紅細(xì)胞凝聚。（3）檢查1）pH值測定取供試品加水制成每1mL含25mg的溶液，pH應(yīng)為5.7~6.7。2）蛋白質(zhì)檢查取供試品0.6g，加水10mL使溶解，取2mL，置試管中，滴加鞣酸試液1~3滴，不得產(chǎn)生渾濁。3）草酸鹽檢查取供試品0.6g，加水10mL使溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1~2，保溫濾去沉淀，調(diào)節(jié)pH值至5~6，取2mL，加3%氯化鈣溶液2~3滴，放置10min，不得出現(xiàn)混濁或沉淀。4）水分測定用減壓干燥法測定，本品含水分不得過5.0%。（略）5）重金屬測定取本品1.0g，按藥典重金屬檢查法第二法檢查，含重金屬不得過百萬分之十。（略）6）砷鹽測定取本品0.40g，加2%硝酸鎂乙醇溶液3mL，點(diǎn)燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500~600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5mL與水21mL使溶解，按藥典砷鹽檢查法一法檢查，含砷量不得過百萬分之五。（略）要點(diǎn)及難點(diǎn)解答（1）中成藥的鑒定特征與原料藥的特征相關(guān)。通過對原料藥鑒定特征的分析并結(jié)合中成藥的特點(diǎn)，確定其鑒定的內(nèi)容和指標(biāo)。（2）根據(jù)處方