實(shí)驗(yàn)一一培養(yǎng)基的制備與滅菌

實(shí)驗(yàn)一一培養(yǎng)基的制備與滅菌第一頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)要求課前充分預(yù)習(xí)，上課不無(wú)故缺席，實(shí)驗(yàn)報(bào)告要及時(shí)上交。實(shí)驗(yàn)期間不得大聲喧嘩、服從老師的安排、注意安全。實(shí)驗(yàn)器材專(zhuān)人專(zhuān)用，對(duì)儀器要愛(ài)護(hù)，損壞實(shí)行賠償制度。實(shí)驗(yàn)菌種和物品未經(jīng)許可，不得攜出室外，用后的菌種按老師要求妥善處理。維護(hù)好實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境衛(wèi)生，實(shí)行值日生制度。第二頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求統(tǒng)一用A4紙手寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告封面格式1、實(shí)驗(yàn)課程名稱(chēng)2、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱(chēng)3、學(xué)生所在的專(zhuān)業(yè)、班級(jí)、姓名、學(xué)號(hào)4、實(shí)驗(yàn)日期5、同組者姓名第三頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、實(shí)驗(yàn)原理3、實(shí)驗(yàn)儀器、溶液試劑4、實(shí)驗(yàn)步驟5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如繪圖、列表等）6、思考題第四頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)成績(jī)的組成

平常成績(jī)30％（實(shí)驗(yàn)操作表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)報(bào)告）操作考試30％筆試成績(jī)40％第五頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)

驗(yàn)

內(nèi)

容土壤中微生物的分離純化與活菌計(jì)數(shù)顯微鏡的使用及酵母菌、放線菌的形態(tài)觀察霉菌的形態(tài)觀察油鏡的使用、細(xì)菌的單染色和革蘭氏染色微生物大小測(cè)定、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法微生物生理生化反應(yīng)水中細(xì)菌總數(shù)和總大腸菌群的測(cè)定微生物的紫外誘變第六頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二（一）培養(yǎng)基的制備與滅菌實(shí)驗(yàn)一、土壤中微生物的分離純化與活菌計(jì)數(shù)第七頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二一、培養(yǎng)基的制備目的要求明確培養(yǎng)基的配制原理通過(guò)對(duì)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟第八頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二按培養(yǎng)基的用途分基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基按成分不同分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基基本原理第九頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（一種天然培養(yǎng)基，用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌）

配方：牛肉膏3g蛋白胨10g氯化鈉5g瓊脂20g水1000mlpH7.2-7.4滅菌121℃20min

第十頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基（一種合成培養(yǎng)基，可用于培養(yǎng)放線菌）

配方：可溶性淀粉20gKNO31gNaCl0.5gK2HPO40.5gMgSO40.5gFeSO40.01g瓊脂20g水1000mlpH7.2～7.4滅菌121℃20min

第十一頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二固體淀粉培養(yǎng)基（一種鑒別培養(yǎng)基，用于大分子物質(zhì)水解的生理生化鑒定）配方：蛋白胨10g氯化鈉5g牛肉膏5g可溶性淀粉2g蒸餾水1000ml瓊脂15～20g

滅菌121℃20min第十二頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二器材溶液或試劑

4mol/LNaOH，1mol/LHCl，各類(lèi)培養(yǎng)基的配方藥品。儀器或其他用具

試管，三角瓶，搪瓷杯，量筒，天平，藥匙，電磁爐，高壓蒸氣滅菌鍋，pH試紙(pH5.5～9.0)，硅膠塞，棉花，報(bào)紙，記號(hào)筆等。第十三頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二操作步驟（一）1．計(jì)算：根據(jù)配方按照用量計(jì)算。2.稱(chēng)量：3．溶解：如有瓊脂，要不斷攪拌避免糊底。4、調(diào)節(jié)pH：用1mol/LNaOH或1mol/LHCl調(diào)節(jié)，以pH試紙或pH計(jì)測(cè)定。5．過(guò)濾：趁熱用四層紗布過(guò)濾。

第十四頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二操作步驟（二）6.分裝試管：固體不超過(guò)試管高度的1/5；液體、半固體不超過(guò)試管高度的1/4或1/3。三角燒瓶：總體積的一半為限。管口或瓶口不得沾有培養(yǎng)基第十五頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二操作步驟（三）7.加塞1.正確；2.管內(nèi)部分太短，外部太松；3.外部過(guò)小第十六頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二操作步驟（三）8.包扎：注明培養(yǎng)基的名稱(chēng)。9.滅菌

：按各自培養(yǎng)基滅菌的溫度、時(shí)間滅菌。10.擱置斜面

(1/3～l/2，不能超過(guò)1/2)。11.無(wú)菌檢查第十七頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)無(wú)菌器皿的準(zhǔn)備無(wú)菌水：在試管或三角瓶?jī)?nèi)量取實(shí)驗(yàn)所需的自來(lái)水，經(jīng)

121℃20min滅菌。無(wú)菌移液吸管、培養(yǎng)皿：報(bào)紙包扎后，經(jīng)121℃20min滅菌。第十八頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二第十九頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。

目的要求二、消毒與滅菌第二十頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二

滅菌是指殺死一切微生物的營(yíng)養(yǎng)體，芽孢和孢子。消毒則指消滅病原菌和有害微生物的營(yíng)養(yǎng)體，因而只是部分滅菌。消毒與滅菌的方法很多，一般可分為加熱、過(guò)濾、照射和使用化學(xué)藥品等方法。

基本原理第二十一頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二干熱滅菌火焰灼燒法干熱滅菌法（烘箱內(nèi)熱空氣滅菌法）濕熱滅菌法加壓蒸汽滅菌法紫外線滅菌法微孔濾膜過(guò)濾除菌第二十二頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二火焰灼燒法直接在火焰上灼燒滅菌主要用于實(shí)驗(yàn)室接種針(環(huán))、試管口、三角瓶口和金屬小工具等的滅菌。第二十三頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二干熱滅菌法設(shè)備：電熱烘箱適用于耐高溫器皿，160-170℃，維持2小時(shí)注意事項(xiàng)：溫度不可超過(guò)180℃，以防玻璃器皿上的棉塞及包裝紙烤焦著火。滅菌時(shí)物品不宜堆放得太緊，以免妨礙空氣流通。滅菌物品不要接觸電烘箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火。電烘箱內(nèi)溫度＜70℃時(shí)，方可打開(kāi)箱門(mén)，以免驟然降溫導(dǎo)致玻璃器皿炸裂。第二十四頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.濕熱滅菌(一）高壓蒸汽滅菌法：是將物品放在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)0.1MPa，121℃保持15～30min進(jìn)行滅菌，從而導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。時(shí)間的長(zhǎng)短可根據(jù)滅菌物品種類(lèi)和數(shù)量的不同而有所變化，以達(dá)到徹底滅菌為準(zhǔn)。此法適用于培養(yǎng)基、工作服、橡皮物品等的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌。第二十五頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大。原因一：濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低。卵白蛋白含水量/%30分鐘內(nèi)凝固所需溫度/℃50562574~801880~9061450160~170蛋白質(zhì)含水量與凝固所需溫度的關(guān)系第二十六頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二原因二：濕熱的穿透力比干熱大。原因三：濕熱的蒸氣有潛熱存在。

溫度/℃時(shí)間/h透過(guò)布層的溫度/℃

滅菌干熱130~1404867270.5不完全濕熱105.33101101101完全第二十七頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二

在同一壓力下，含有空氣的蒸汽所達(dá)到的溫度低于飽和蒸汽的溫度，所以排氣是否完全很重要。第二十八頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二間歇滅菌法：

應(yīng)用于不易于高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基如明膠培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基、含糖培養(yǎng)基等。此法是用阿諾氏流動(dòng)蒸汽滅菌器進(jìn)行滅菌，每天加熱100℃30min、連續(xù)三天，可徹底滅菌。煮沸消毒法：注射器和解剖器械等可用煮沸消毒法。一般煮沸消毒時(shí)間為10～15min。超高溫殺菌：

此法指在溫度和時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)分別為135～150℃和2～8s的條件下對(duì)牛乳或其他液態(tài)食品進(jìn)行處理的一種工藝。2.濕熱滅菌(二）第二十九頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二高壓蒸汽滅菌法操作步驟（三）第三十頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二手提式高壓蒸汽滅菌鍋第三十一頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二全自動(dòng)數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌鍋第三十二頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二操作步驟（三）（以手提式高壓蒸汽滅菌鍋為例）

1.裝鍋先向外層鍋內(nèi)加入適量的水，放入內(nèi)鍋，裝入待滅菌物品。2.加蓋將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌鍋的排氣槽內(nèi)。再以?xún)蓛蓪?duì)稱(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，勿使漏氣。3.滅菌加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，升溫至l21℃時(shí)維持15~20min。4.降溫取物

滅菌結(jié)束后，切斷電源，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物。第三十三頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二加壓蒸汽滅菌法0.1MPa，121℃，20min滅菌注意事項(xiàng)：切勿忘記加水，加水量不可過(guò)少，以防滅菌鍋燒干而引起炸裂事故。鍋內(nèi)冷空氣必須完全排盡后，才能關(guān)上排氣閥，維持所需壓力。壓力一定要降到“0”時(shí)，才能打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物。滅菌全程必須有人看守。第三十四頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二紫外線滅菌法適用于無(wú)菌室、接種箱、手術(shù)室內(nèi)的空氣及物體表面的滅菌。紫外線燈距照射物以不超過(guò)1.2m為宜。若紫外線照射與3%~5%的石炭酸溶液或2%~3%的來(lái)蘇爾等化學(xué)消毒劑結(jié)合使用，可加強(qiáng)滅菌效果。注意事項(xiàng)：紫外線對(duì)眼結(jié)膜及視神經(jīng)有損傷作用，對(duì)皮膚有刺激作用，故不能直視紫外線燈光，更不能在紫外線燈光下工作。第三十五頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二過(guò)濾除菌法適用于不耐熱的液體物質(zhì)（如維生素、血清、酶等熱敏性物質(zhì)）。濾膜孔徑：≤0.22μm缺點(diǎn)：無(wú)法去除培養(yǎng)液中的病毒和噬菌體。第三十六頁(yè)，共三十九頁(yè)，編輯于2023年，星期二思考題培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的？在配制培