流式細胞儀操作步驟

一、開機程序：檢查鞘液桶和廢液桶。確認鞘液充滿狀態(tài)（鞘液為鞘液桶體積的3/4位置，可以連續(xù)工作3個小時左右）、蓋緊黑蓋、管道暢通、廢液桶有足夠空間容納本批標本排棄的廢液。如果要添加鞘液，要先釋放鞘液桶中氣壓。依次打開流式細胞儀FACSCalibur穩(wěn)壓器、主機開關、電腦開關，打印機。氣壓閥置于加壓位置，待流式細胞儀處于STANDBY狀態(tài)，做Prime，以排除管路中氣泡。二、運行FACSComp軟件、檢查儀器狀況制備三色標準微球樣本。一般情況向1ml鞘液（或過濾PBS）中加入1滴質控小微球，也可以根據(jù)實際情況調節(jié)濃度。機器預熱5min，打開FACSComp軟件，選擇保持路徑。選擇所需校正內容，如果使用的微球是新一批產品要輸入微球的批號。在軟件界面左側AssaySelection選項中選擇質控類型，即實驗過程中是否需要清洗樣品。上樣品，微球溶液上樣之前要充分混勻。功能鍵設置在“RUN”。儀器自動檢查，并做電壓、補償?shù)仍O置。FACSComp軟件運行完畢，顯示結果通過測試。做Setup。打印校正結果，退出FACSComp程序。備注：在質控過程中，如果提示收集細胞速度慢可以提高細胞收集速度，但是在調節(jié)靈敏度（Sens）時，一定要用“Low”的狀態(tài)上樣，保證儀器靈敏度的準確。在使用儀器過程中要養(yǎng)成好的習慣，在上樣品過程中，儀器保持在“Low”“Standby”狀態(tài)。三、樣品分析軟件：CellQuestProConnecttoCytometerAcquire保證機器預熱5min，打開CellQConnecttoCytometerAcquire在彈出的界面中的選擇數(shù)據(jù)存儲路徑（Directory菜單）；對實驗樣本進行命名；對實驗通道進行預設（FSC,SSC,FL1-FL4）。ShowBrowersWindows備注：如果界面被關閉，重新調出步驟：ShowBrowersWindows調出質控模板。OpenInstrumentSettingsCytometerOpenInstrumentSettingsCytometerBDBD圖標InstrumentSettingsBDFilesInstrumentSettingsBDFilesDoneSet（一定要做）Open選擇調用的質控文件DoneSet（一定要做）Open選擇調用的質控文件畫圖Acquire>>AnalysisAnalysis選擇畫圖工具（一般選擇散點圖），Inspect界面會自動彈出，對幾個常用選項進行設定：將散點圖選中（用鼠標點擊散點圖邊框才能夠選中圖形），將改為,更改橫縱坐標表示名稱，設置十字象限。如果要做四色實驗，則繪制四個圖。Acquire>>AnalysisAnalysisAcquire備注：第一個散點圖橫坐標為FSC，縱坐標為SSC。Acquire從工具欄Cytometer選項中調出（1,2,3和從工具欄Cytometer選項中調出（1,2,3和4）Acquisition&（2）調出電壓、閾值和補償?shù)冉缑?。Complement（3）將所有補償調為0。ComplementThreahold（4）將非52的閾值調為0。ThreaholdAcquire（5）FSC和SSC一般用線性（Lin）,激光通道（FL1-FL4）一般用對數(shù)（Log）。AcquireCounter（6）調出細胞計數(shù)器：Counter上陰性對照將陰性對照管混勻，上機，功能鍵設置在“RUN”,散點圖出現(xiàn)細胞信號，第一個圖：讓細胞信號出現(xiàn)在自己看上去舒服的區(qū)域；其他三個散點圖，要將細胞信號調整到陰性區(qū)域，即左下角區(qū)域。通過移動通7.等待機器預熱5---10分鐘后可開始實驗。FACSCalibur每日關機程序用2ml10%稀釋漂白劑(有效氯0.5-1%)作樣品，將樣品支撐架置于旁位，以外管吸入1ml。將樣品支撐架置于中位，以HIRUN5分鐘。將