藥物分析 第03章-藥物的雜質(zhì)-3

第三章

藥物的雜質(zhì)檢查郭慶發(fā)Testforpurity1.取樣2.鑒別3.檢查4.含量測定5.檢驗(yàn)報(bào)告工作程序

藥品檢驗(yàn)工作的基本內(nèi)容第三章藥物的雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)的檢查3藥物雜質(zhì)與限量1雜質(zhì)檢查方法2特殊雜質(zhì)的檢查43.腎上腺素中腎上腺酮的檢查：稱取腎上腺素0.250g，置于25mL量瓶中，加0.05mol/L鹽酸液至刻度，量取5mL置另一25mL量瓶中，用0.05mol/L鹽酸液稀釋至刻度，用此液照分光光度法，在310nm處測定吸收度，不得大于0.05，問腎上腺素的限量是多少？（以百分表示，腎上腺素

=453=()g/100ml=()g/ml×1/100四、重金屬檢查法定義——重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)(Ag,Pb,Hg,Cu,Cd,Sn,Bi等），以鉛為代表。什么是重金屬？重金屬檢查法

四種方法(2005版藥典)

硫代乙酰胺法熾灼檢查法硫化鈉法微孔濾膜法重金屬檢查法問題：三種檢查方法各適用于哪些藥物？第一法：適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物第二法：適用于含芳環(huán)、雜環(huán)及難溶于水、稀酸、乙醇和堿的有機(jī)藥物第三法：適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類在弱酸條件下（pH3～3.5）能與硫代乙酰胺生成不溶性硫化物而顯色的金屬離子有Ag+、As3＋、As5＋、Bi3＋、Cu2+、Cd2＋、Co2＋、Hg2＋、Ni2＋、Pb2＋、Sb3＋、Sn2＋、Sn4+等；

在堿性溶液中能與硫化鈉作用生成不溶性硫化物而顯色的有Bi3＋、Cd2

、Cu2+

、Co2＋、Fe3＋、Hg2＋、Ni2＋、Pb2＋、Zn2＋等金屬離子。適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物。第一法：硫代乙酰胺法黃色～棕黑色藥物：PbSSHPbpH3.522????++()黃色～棕黑色、對(duì)照：PbSSHPbNOpH3.523????+Vc1.原理

標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法

2.操作方法甲管對(duì)照管丙管監(jiān)測管乙管樣品管27ml重金屬檢查法--對(duì)照法（目視比色法）

比較顏色甲管（標(biāo)準(zhǔn)溶液）、乙管（供試品）、丙管（監(jiān)測管）丙管不淺于甲管，比較甲乙管甲管深于乙管，符合規(guī)定丙管淺于甲管，第二法甲丙甲乙3.討論（1）

測定條件①

Pb2+的最適檢測濃度范圍：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液臨用前稀釋而成標(biāo)準(zhǔn)硝酸鉛溶液10gPb2+/ml目視比色的濃度范圍：10~20g/27ml相當(dāng)于Pb2+標(biāo)準(zhǔn)溶液1~2ml(10g/ml)若小于10μg或大于30μg,則色太淺或太深,均不利于目視觀察比較。②

反應(yīng)試劑：硫代乙酰胺試液H2S試液：惡臭和毒性,不穩(wěn)定,易被空氣氧化而析出硫,濃度難以控制。③

醋酸鹽緩沖液控制溶液pH值為3~3.5pH在3.0~3.5時(shí),硫化鉛沉淀較完全.酸度增大,呈色變淺甚至不呈色.若樣品用強(qiáng)酸溶解,在加入硫代乙酰胺前,加氨水至中性.（2）

干擾及排除①供試品溶液有顏色a.內(nèi)消色法b.

外消色法

無鉛雜質(zhì)相同顏色澄清液樣品pH3.5硫代乙酰胺過濾濾液標(biāo)準(zhǔn)Pb液對(duì)照管樣品管除去PbS硫代乙酰胺a.內(nèi)消色法b.

外消色法Ⅰ.稀焦糖溶液調(diào)節(jié)Ⅱ.指示劑調(diào)節(jié)（2）

干擾及排除②

干擾物的排除方法a.供試品中微量高價(jià)Fe3+存在干擾：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S

析出S，產(chǎn)生混濁影響檢查。如：葡萄糖酸亞鐵中重金屬的檢查.排除：加入抗壞血酸或鹽酸羥胺使

Fe3+還原為Fe2+。b.供試品為鐵鹽（大量的Fe3+）如：枸櫞酸鐵銨的重金屬檢查利用Fe3+在HCl溶液中能形成配位化合物[HFeCl6]2-用乙醚提取棄去.水層加氨試液調(diào)至堿性,用KCN掩蔽殘存的微量Fe3+,按第三法檢查.

c.藥物本身能生成不溶性硫化物如：葡萄酸銻鈉中重金屬的檢查排除：加入10%NaOH和KCN試液使銻/鋅形成穩(wěn)定的配位化合物后,用第三法檢查.第一法

硫代乙酰胺法小結(jié)條件：

介質(zhì)：醋酸鹽緩沖液(pH3.5)

2ml試劑：硫代乙酰胺(CH3CSNH2)2ml雜質(zhì)對(duì)照液：Pb(NO3)2(10μg/ml)靈敏度范圍：10~20g/27ml黃色至棕黑色混懸液注意：

供試品有色：加有色溶液或改用第二法含微量高鐵鹽：加Vc供試品為鐵鹽：除去供試品能形成不溶性硫化物：加掩蔽劑原理：第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法將供試品熾灼破壞后，使有機(jī)結(jié)合的重金屬游離，再按第一法檢查。適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇的有機(jī)藥物；有色且無法消色的藥物。1.原理2.操作方法對(duì)照溶液的配制：取上述同樣量試劑置瓷皿中蒸干后，用于配制對(duì)照溶液，依法檢查。

緩緩熾灼

放冷H2SO40.5-1.0ml供試品完全炭化

加熱

HNO32ml

500-600℃H2SO4蒸氣除盡放冷完全灰化

蒸干熾灼HCl2ml水15ml

中性，即供試溶液按第一法檢查蒸干氨試液3.討論

（1）HNO3處理后，必須蒸干除盡氧化氮。（2）熾灼溫度要嚴(yán)格控制：500-600℃。（3）含鈉鹽或氟的有機(jī)藥物在熾灼時(shí)腐蝕瓷坩堝，改用鉑坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿。例鹽酸尼卡地平Ch.P.（2010）【檢查】重金屬取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，依法檢查（附錄ⅧH第二法），含重金屬不得過百萬分之二十。適用于溶于堿而難溶于稀酸或在稀酸中產(chǎn)生沉淀的藥物。第三法：硫化鈉法介質(zhì)：氫氧化鈉試液反應(yīng)試劑：硫化鈉對(duì)照溶液：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（2）對(duì)于在水與乙醇液中難溶的藥物及易于重金屬結(jié)合成配位化合物的藥物，可采用有機(jī)破壞，溶劑提取及加掩蔽劑等方法除去干擾。（1）硫化鈉對(duì)玻璃有腐蝕，久置會(huì)產(chǎn)生絮狀物，應(yīng)臨用新制。

注意事項(xiàng)總結(jié)：例1.中國藥典(2010年版)重金屬檢查法中，所使用的沉淀劑是

A.硫化氫試液

B.硫代乙酰胺試液

C.硫化鈉試液

D.氰化鉀試液

E.硫氰酸銨試液例2.葡萄糖中進(jìn)行重金屬檢查時(shí)，適宜的條件是

A.用硫代乙酰胺為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液

B.用10ml稀硝酸/50ml酸化

C.在pH3.5醋酸鹽緩沖溶液中

D.用硫化鈉為試液

E.結(jié)果需在黑色背景下觀察

例3.現(xiàn)有一藥物為磺胺嘧啶，欲進(jìn)行重金屬檢查，應(yīng)采用《中國藥典》上重金屬檢查的哪種方法

A.一法B.二法

C.三法D.四法

E.以上都不對(duì)在水中幾乎不溶；在氫氧化鈉試液或氨試液中易溶例4.下面哪些方法為《中國藥典》收載的重金屬檢查方法

A.500～600℃熾灼殘?jiān)?，按一法操?/p>

B.pH3～3.5條件下，加入硫化氫試液

C.堿性下，加入硫化鈉試液

D.按一法操作后再用微孔濾膜過濾后觀察色斑

E.以上都對(duì)例5.藥典中需要檢查的重金屬是指

A.PbB.Hg，Cu，Bi，F(xiàn)e，PbC.比重大于5的金屬

D.在人體中可中毒的金屬

E.能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用生成不溶性硫化物的金屬雜質(zhì)五、砷鹽檢查法古蔡法方法二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC）1.古蔡氏法原理：本法系采用鋅和酸作用所產(chǎn)生的初生態(tài)氫與供試品中微量砷鹽化合物反應(yīng)生成揮發(fā)性砷化氫,再與溴化汞試紙作用生成黃色至棕色砷斑。標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的制備

標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的制備稱取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20％氫氧化鈉溶液5ml溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液，存放時(shí)間一般不宜超過一年。臨用前，精密量取貯備液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當(dāng)于1μg的As)。標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備

標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將裝妥的導(dǎo)氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置25-40℃水浴中，反應(yīng)45分鐘，取出溴化汞試紙，即得。

相當(dāng)于2μg砷。此時(shí)砷斑清晰HCl供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)砷溶液KI試液酸性SnCl2三價(jià)砷Zn粒AsH3↑過Pb(Ac)2棉花遇HgBr2試紙砷斑（比較顏色）操作方法：供試品溶液按各品種規(guī)定方法制備；標(biāo)準(zhǔn)砷斑采用2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液(1μgAs/ml)制備。2ml5ml+H2O21ml2.5%,5ml0.3%,5滴2g25~40℃水浴中,反應(yīng)45min生成砷斑吸收硫化氫氣體防止形成HgS色斑古蔡檢砷裝置溴化汞試紙醋酸鉛棉花(60mg)HCl碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液Zn粒中空?qǐng)A面旋塞導(dǎo)氣管AsH3發(fā)生瓶8cm還原五價(jià)砷為三價(jià)砷還原劑表現(xiàn)在3方面:As5+→As3+將KI被氧化生成的I2再還原為I-SnCl2與Zn粒表面形成Zn-Sn齊，起去極化的作用，是產(chǎn)生的氫均勻。討論----試劑的作用1.KI的作用-----?還原劑：As5+→As3+2.酸性SnCl2的作用----?SnCl2與Zn粒表面形成Zn-Sn齊起去極化作用,使氫均勻而連續(xù)地發(fā)生H2阻礙酸與鋅粒反應(yīng)Zn超電壓0.70Sn超電壓0.50SnCl2討論-----PbAc2棉花的作用?—排除硫化物的干擾干擾物的排除供試品是硫化物,亞硫酸鹽,硫代硫酸鹽干擾消除方法：加入濃硝酸處理干擾物的排除供試品是鐵鹽(Fe3+)干擾：Fe3+能消耗還原劑、

氧化砷化氫排除方法先加酸性SnCl2試液使：Fe3+→Fe2+共價(jià)鍵結(jié)合的砷化物酸破壞法：加稀硫酸與溴化鉀堿破壞法加入氫氧化鈣500-600℃灼燒加入無水碳酸鈉堿融含銻藥物SbH3+HgBr2SbH2(HgBr)+HBr（灰色銻斑）改用白田道夫(Betterdorff)法。干擾：排除:白田道夫法

2As3＋+3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H＋

(棕褐色的膠態(tài)砷

)與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液用同法處理后的顏色比較干擾砷斑檢查

（1）供試品為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽時(shí)，在酸中生成H2S或SO2，與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查，可先用硝酸將其氧化成硫酸鹽。（2）供試品為鐵鹽（Fe3+）時(shí)，消耗KI、SnCl2，并氧化砷化氫，可先加酸性氯化亞錫試液還原高鐵。（3）砷以共價(jià)鍵結(jié)合的有機(jī)藥物，進(jìn)行有機(jī)破壞后再檢查?？偨Y(jié)：

砷鹽檢查法--古蔡法特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高(1gAs)缺點(diǎn)：Sb干擾2.二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）紅色膠態(tài)銀As(DDC)3+6Ag+3吡啶·HDDCAsH3+

6Ag(DDC)+3吡啶目視比色法510nm測定A值（定量）同古蔡氏法C2H5C2H5NCSSAgAg(DDC)結(jié)構(gòu)：吡啶吸收HDDC（1）USP采用0.5%Ag-DDC的吡啶溶液，ChP采用0.25%Ag-DDC的三乙胺-三氯甲烷溶液，靈敏度略低于吡啶溶液。（2）銻化氫與Ag-DDC的反應(yīng)靈敏度較低，本法受銻的干擾較小。討論：

Ag-DDC溶液產(chǎn)生AsH3Ag-DDC法檢砷裝置砷鹽檢查法--Ag-DDC法Ag-DDC法的特點(diǎn)靈敏度高0.5μgAs/30ml可儀器測定,還可定量Sb干擾小古蔡法Hg(Br)2試紙Pb(Ac)2棉花反應(yīng)液（相同）Ag(DDC)Ag(DDC)法標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶導(dǎo)氣管

古蔡氏法與

Ag(DDC)法的比較

3.其它方法（1）白田道夫法原理：氯化亞錫在鹽酸溶液中將砷鹽還原成棕褐色的膠態(tài)砷。特點(diǎn)：用于含銻藥物的砷鹽檢查時(shí)，不產(chǎn)生干擾，但靈敏度低。（2）次磷酸法原理：次磷酸在鹽酸溶液中將砷鹽還原成棕色的游離砷。特點(diǎn)：用于硫化物、亞硫酸鹽及含銻藥物的砷鹽檢查時(shí)，不產(chǎn)生干擾，但靈敏度比古蔡氏法低。方法試劑結(jié)果古蔡氏法Ag-DDC法白田道夫法次磷酸法Zn、HCl、KI、SnCl2、HgBr2Zn、HCl、KI、SnCl2、Ag-DDCSnCl2H3PO2砷斑膠態(tài)銀膠態(tài)砷游離砷ChP規(guī)定干燥失重的量應(yīng)恒重，即供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下。六、干燥失重測定法檢查藥物中的水分及其它揮發(fā)性物質(zhì)。干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率表示。（一）常壓恒溫干燥法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物干燥箱（105℃）（二）減壓干燥法與恒溫減壓干燥法適用于熔點(diǎn)低或受熱分解的藥物減壓干燥器（室溫）、恒溫減壓干燥器（60oC）

常用干燥劑：無水氯化鈣、硅膠、五氧化二磷干燥失重檢查法鼓風(fēng)烘箱減壓烘箱扁形稱量瓶減壓玻璃干燥器(三）干燥劑干燥法(常溫減壓干燥法)本法適用于受熱易分解或易升華的藥物。將樣品置干燥器內(nèi)干燥至恒重常用干燥劑有：硅膠、硫酸、無水氯化鈣、五氧化二磷等。其中五氧化二磷吸水效力最強(qiáng)，但P2O5吸水后產(chǎn)生H3PO4，若樣品對(duì)酸不穩(wěn)定，可能會(huì)受影響樣品七、水分測定法ChP、USP和BP均收載了費(fèi)休氏法和甲苯法。八、熾灼殘?jiān)鼨z查法九、易炭化物檢查法十、殘留溶劑測定法十一、溶液顏色檢查法十二、溶液澄清度檢查法§3-4特殊雜質(zhì)的鑒定方法一、特殊雜質(zhì)的研究規(guī)范1.新原料藥和新制劑中的雜質(zhì)表觀含量≥0.1%和表觀含量<0.1%具強(qiáng)烈生物作用或毒性的雜質(zhì)，要求定性或確證其結(jié)構(gòu)。包括：藥物合成中的有機(jī)雜質(zhì)；穩(wěn)定性試驗(yàn)中的降解產(chǎn)物。

2.非新藥中發(fā)現(xiàn)的新雜質(zhì)和新降解產(chǎn)物3.手性藥物的光學(xué)異構(gòu)體（一）合成雜質(zhì)對(duì)照品法適用于量少，分離純化困難的雜質(zhì)。方法：比較雜質(zhì)與對(duì)照品的色譜性質(zhì)、UV曲線特征和MS信息，判斷雜質(zhì)與對(duì)照品是否是同一種化合物，從而確定雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。（二）色譜制備雜質(zhì)對(duì)照品法適用于量較大的雜質(zhì)。方法：通過色譜分離得到特定雜質(zhì)，再通過元素分析、UV、IR、NMR和MS確定雜質(zhì)及有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。二、特殊雜質(zhì)的鑒定（一）最佳選擇題1.下列屬于信號(hào)雜質(zhì)的是（）

A.砷鹽B.硫酸鹽C.鉛D.氰化物

E.汞2.藥物中無效或低效晶型的檢查可以采用的方法是（）

A.高效液相色譜法B.紅外分光光度法

C.紫外-可見分光光度法D.原子吸收分光光度法

E.氣相色譜法3.原子吸收分光光度法檢查藥物中金屬雜質(zhì)時(shí)，通常采用的方法是（）

A.內(nèi)標(biāo)法B.外標(biāo)法C.加校正因子的主成分自身對(duì)照法D.標(biāo)準(zhǔn)加入法

E.不加校正因子的主成分自身對(duì)照法4.藥物中氯化物雜質(zhì)檢查，是使該雜質(zhì)在酸性溶液中與硝酸銀作用生成氯化物渾濁，所用的稀酸是

()

A.硫酸

B.硝酸

C.鹽酸

D.醋酸E.磷酸5.氯化物檢查法中，用以解決供試品溶液帶顏色對(duì)測定干擾的方法是（）

A.活性炭脫色法B.