儀器分析實(shí)驗(yàn)課件

儀器分析實(shí)驗(yàn)課件第一頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六可樂、咖啡、茶葉中咖啡因的高效液相色譜分析

一、目的要求1、理解反相色譜的原理和應(yīng)用；2、掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線定量法。第二頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六二、原理咖啡因又稱咖啡堿，屬黃嘌呤衍生物，化學(xué)名稱為1,3,7—三甲基黃嘌吟，是由茶葉或咖啡中提取而得的一種生物堿。它能興奮大腦皮層，使人精神興奮?？Х戎泻Х纫蚣s為1.2%~1.8%，茶葉中約含2.0%~4.7%?？蓸凤嬃?、APC藥片等中均含咖啡因。分子式為C8H10O2N4，結(jié)構(gòu)式為：

第三頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六樣品在堿性條件下，用氯仿定量提取，采用EconosphereC18反相液相色譜柱進(jìn)行分離，以紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，以咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜峰面積對(duì)其濃度做工作曲線，再根據(jù)樣品中的咖啡因峰面積，由工作曲線算出其濃度。第四頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六三、儀器與試劑儀器

Agilent1100液相色譜儀（美國(guó)），EconosphereC18反相色譜柱，l0cm*4.6cm；平頭微量注射器。試劑

1、甲醇（色譜純）；二次蒸餾水；氯仿（A.R.）；lmol/LNaOH；NaCl（A.R.）；Na2SO4(A.R.)；咖啡因(A.R.)；可口可樂（l.25L瓶裝）；雀巢咖啡；茶葉。2.咖啡因標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液第五頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六四、實(shí)驗(yàn)步驟1、按操作說明書使色譜儀正常工作，色譜條件為：柱溫：室溫流動(dòng)相：甲醇／水＝60/40

流動(dòng)相流量：1.0mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm2、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制：分別用吸量管吸取咖啡因標(biāo)準(zhǔn)貯備液于五只10mL容量瓶中，用氯仿定容至刻度，濃度分別為40、60、80、100、120mg/L。第六頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六3、樣品處理如下：（1）將約100mL可口可樂置于一250mL潔凈、干燥的燒杯中，劇烈攪拌30min或用超聲波脫氣5min，以趕盡可樂中二氧化碳。（2）準(zhǔn)確稱取0.25g咖啡，用蒸餾水溶解，定量轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻。（3）準(zhǔn)確稱取0.30g茶葉，用30mL蒸餾水煮沸l(wèi)0min，冷卻后，將上層清液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，并按此步驟再重復(fù)二次，最后用蒸餾水定容至刻度。將上述三份樣品溶液分別進(jìn)行干過濾（即用干漏斗、干濾紙過濾），棄去前過濾液，取后面的過濾液。第七頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六分別吸取上述三份樣品濾液25.00mL于125mL分液漏斗中，加入1.0mL飽和氯化鈉溶液，1mLlmol/LNaOH溶液，然后用20mL氯仿分三次萃?。?0mL、5mL、5mL）。將氯仿提取液分離后經(jīng)過裝有無水硫酸鈉小漏斗（在小漏斗的頸部放一團(tuán)脫脂棉，上面鋪一層無水硫酸鈉）脫水，過濾于25mL容量瓶中，最后用少量氯仿多次洗滌無水硫酸鈉小漏斗，將洗滌液合并至容量瓶中，定容至刻度。第八頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六4、繪制工作曲線：待液相色譜儀基線平直后，分別注入咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液10μL重復(fù)二次，要求二次所得的咖啡因色譜峰面積基本一致，否則，繼續(xù)進(jìn)樣，直至每次進(jìn)樣色譜峰面積重復(fù)，記下峰面積和保留時(shí)間。5、樣品測(cè)定：分別注入樣品溶液10μL，根據(jù)保留時(shí)間確定樣品中咖啡因色譜峰的位置，再重復(fù)二次，記下咖啡因色譜峰面積。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，按要求關(guān)好儀器。第九頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六五、結(jié)果處理1、根據(jù)咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的色譜圖，繪制咖啡因峰面積與其濃度的關(guān)系曲線。2、根據(jù)樣品中咖啡因色譜峰的峰面積，由工作曲線計(jì)算可口可樂、咖啡、茶葉中咖啡因含量（分別用mg/L、mg/g和mg/g表示）。第十頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六六、注意事項(xiàng)1、測(cè)定咖啡因的傳統(tǒng)方法是先經(jīng)萃取，再用分光光度法測(cè)定。由于一些具有紫外吸收的雜質(zhì)同時(shí)被萃取，所以，測(cè)定結(jié)果具有一定誤差。液相色譜法先經(jīng)色譜柱高效分離后再檢測(cè)分析，測(cè)定結(jié)果正確。實(shí)際樣品成分往往比較復(fù)雜，如果不先萃取而直接進(jìn)樣，雖然操作簡(jiǎn)單，但會(huì)影響色譜柱壽命。2、不同牌號(hào)的茶葉、咖啡中咖啡因含量不大相同，稱取的樣品量可酌量增減。3、若樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液需保存，應(yīng)置于冰箱中。4、為獲得良好結(jié)果，標(biāo)樣和樣品的進(jìn)樣量要嚴(yán)格保持一致。第十一頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六七、思考題1、用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？2、根據(jù)結(jié)構(gòu)式，咖啡因能用離子交換色譜法分析嗎？為什么？3、若標(biāo)準(zhǔn)曲線用咖啡因濃度對(duì)峰高作圖，能給出準(zhǔn)確結(jié)果嗎？與本實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比何者優(yōu)越？為什么？4、在樣品干過濾時(shí)，為什么要棄去前過濾液？這樣做會(huì)不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果？為什么？第十二頁，共十三頁，編輯于2023年，星期六分組實(shí)驗(yàn)1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品不同（可樂、咖啡、茶葉），六小組中每?jī)蓚€(gè)小組編成一大組做同一種樣品，如：可樂。每小組分別取不同品牌的同一種樣品。如：可口可樂、百事可樂。2.每個(gè)小組選一個(gè)代表做預(yù)實(shí)驗(yàn)（標(biāo)準(zhǔn)樣品實(shí)驗(yàn)）時(shí)間：12月6日3.